Разработка методов иммуноанализа с использованием магнитных наномаркеров (1104599), страница 5
Текст из файла (страница 5)
13).Установлено, что в отсутствии антигена неспецифическое связывание МЧ с антителами,иммобилизованными на тестовой линии мембраны незначительно (рис. 13б). При этом намикрофотографии фрагмента тестовой линии ИХА-полоски после анализа образца,содержащего 50 нг/мл ПСА, можно обнаружить большое количество магнитных частицразмером около 200 нм, специфически связавшихся с мембраной (рис. 13в).Рисунок 13. Микрофотографии иммунохроматографических мембран, полученные с помощьюсканирующей электронной микроскопии: А) – общий вид чистой мембраны до начала анализа;Б) – фрагмент тестовой линии после анализа образца, не содержащего ПСА; В) – фрагмент тестовойлинии после анализа образца, содержащего 50 нг/мл ПСА.20Количественные результаты получены при измерении ИХА тест-полосок врегистраторе, основанном на детекции МЧ на комбинаторных частотах, и количественногоизмерения распределения МЧ вдоль полоски (рис.
14а). На рис. 14б представленазависимость магнитного сигнала на тестовой линии от концентрации антигена ПСА.А)Б)Рисунок 14. Разработанный количественный иммунохроматографический анализ для определенияПСА в сыворотке крови человека: А) – распределение магнитного сигнала вдоль ИХА тест-полосок;Б) – зависимость магнитного сигнала на тестовой линии ИХА тест-полосок от концентрации ПСА.Минимально детектируемая концентрация ПСА в сыворотке крови человекасоставила 25 пг/мл в широком динамическом диапазоне значений концентраций – более 3порядков.
Разработанный метод основан на сухой химии, обладает высокой скоростью ипредельной простотой использования, не требует привлечения высококвалифицированногоперсонала – то есть всеми преимуществами иммунохроматографии, и, в то же время, почувствительности не уступает количественной регистрации ПСА с помощью гораздо болеетрудоемких и продолжительных иммуноферментных методов.21РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ На основе метода спектрально-корреляционной интерферометрии разработана методикаколичественной оценки конформационных изменений биомолекул, их взаимодействиямежду собой и с магнитными наночастицами. Показано, что результаты, полученные спомощьюспектрально-корреляционнойсоответствиисданнымиинтерферометрии,независимыхметодов:находятсявискозиметрии,вхорошемэллипсометрии,иммуноферментного анализа, сканирующей электронной микроскопии. Показано, что толщина слоя сополимеров N,N-диметилакриламида и N-акрилоил-mаминофенилборнойкислоты,иммобилизованныхнастекляннойповерхности,претерпевает обратимые изменения на 0,5-1 нм при смене состава водного окружения. Установлено, что использование магнитных наночастиц диаметром 50 нм в качествеметок вызывает более чем 100-кратное усиление сигнала спектрально-корреляционнойинтерферометрии при детекции сердечного тропонина I по сравнению с безметочнойрегистрацией. Разработан высокочувствительный метод количественной детекции стафилококковыхтоксинов в цельном молоке, основанный на использовании в качестве твердой фазыобъемных волоконных фильтров и магнитных наномаркеров, регистрируемых понелинейномуперемагничиваниюнакомбинаторныхчастотах.Показано,чточувствительность метода растет с увеличением объема анализируемого образца. Разработан экспресс-метод количественной детекции простатического специфическогоантигена в сыворотке крови человека, основанный на принципе иммунохроматографии сиспользованиемМЧвкачествеметок,регистрируемыхпонелинейномуперемагничиванию на комбинаторных частотах.СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИСписок работ, опубликованных в перечне изданий, рекомендованных ВАК1.
Orlov A. V., Khodakova J. A., Nikitin M. P., Shepelyakovskaya A. O., Brovko F. A.,Laman A. G., Grishin E. V., Nikitin P. I. Magnetic immunoassay for detection of staphylococcaltoxins in complex media // Analytical Chemistry. 2013. V. 85. № 2. P. 1154–1163.2. Буренин А. Г., Никитин М.
П., Орлов А. В., Ксеневич Т. И., Никитин П. И. Детекцияпиретроидов с помощью спектрально-корреляционной интерферометрии // Прикладнаябиохимия и микробиология. 2013. T. 49. № 3. C. 312–318.3. Дирюгина Е. Г., Буренин А. Г., Никитин М. П., Орлов А. В., Никитин П. И. Детекцияв реальном времени аутоантител в сыворотке крови с помощью безметочной биосенсорнойсистемы Пикоскоп // Труды МФТИ. 2012. T. 4. № 3.
С. 11–17.224. Ivanov A. E., Solodukhina N., Wahlgren M., Nilsson L., Vikhrov A. A., Nikitin M. P.,Orlov A. V., Nikitin P. I., Kuzimenkova M. V., Zubov V. P. Reversible conformational transitionsof a polymer brush containing boronic acid and its interaction with mucin glycoprotein //Macromolecular Bioscience. 2011. V. 11. № 2. P. 275-284.5. Красникова Т. Л., Никитин П. И., Ксеневич Т.
И., Горшков Б. Г., Орлов А. В.,Сидорова М. В., Азьмуко А. А., Арефьева Т. И., Мамочкина Е. Н., Ефремов Е. Е.,Беспалова Ж. Д. Влияние пептидного фрагмента (65–76) C-концевого домена моноцитарногохемотаксического белка-1 (MCP-1) на взаимодействие MCP-1 с гепарином // ДокладыАкадемии Наук. 2011. Т. 433. № 4. С. 559-562.Список работ, опубликованных в виде тезисов конференций6.Nikitin P. I., Khodakova J. A., Nikitin M. P., Orlov A. V. Biosensors Based on MagneticNanoparticles // Proceedings of 9th European Magnetic Sensors and Actuators Conference (Prague,Czech Republic, 1-4 July 2012), p. MP05.7.Orlov A.
V., Khodakova Yu. A., Nikitin M. P., Nikitin P. I. Highly sensitive magneticimmunoassay compatible with high volume samples // Proceedings of the 9th InternationalConference on the Scientific and Clinical Applications of Magnetic Carriers (MinneapolisMinnesota, U.S.A., 22-26 May 2012), p. 97.8.Nikitin P. I., Diryugina E. G., Burenin A. G., Nikitin M. P, Khodakovа J. A., Orlov A. V.Optical biosensors with low-cost consumables // Proceedings of ХI Conference on OpticalChemical Sensors and Biosensors (Barcelona, Spain, 1-4 April 2012), р. 167.9.Orlov A.
V., Nikitin M. P., Sergachev I. A., Valeiko M. V., Gorshkov B. G., Nikitin P. I.Advanced label-free biosensors with low-cost consumables for nanobiotechnology research and invitro diagnostics // Proceedings of III International Symposium «Topical problems of biophotonics–2011» (St. Petersburg – Nizhny Novgorod, Russia, 16-22 July 2011), p. 168-169.10.
Orlov A. V., Nikitin M. P., Yuriev M. V., Vetoshko P. M., Nikitin P. I. Magneticnanoparticles in biomedical research and in vitro diagnostics // Book of Abstracts of MoscowInternational Symposium on Magnetism (MISM) (Moscow, Russia, 21-25 August 2011), p. 326.11. Orlov A. V., Nikitin P. I. Magnetic immunoassays – new method for biochemical analysisbased on non-linear magnetization of magnetic nanolabels // Book of abstracts of IV InternationalCompetition for Scientific Papers in Nanotechnology for Young Researchers at RUSNANOTECH2011 Forum (Moscow, Russia, 26–28 October 2011).12. Буренин А. Г., Никитин М. П., Орлов А. В., Ветошко П.
М., Никитин П. И. Разработкаметодов многопараметрического иммуноанализа на планарных структурах с использованиемсуперпарамагнитных наномаркеров // Труды 54-й научной конференции МФТИ (МоскваДолгопрудный, 10-30 ноября 2011), с. 105-106.2313. Дирюгина Е. Г., Орлов А. В., Никитин М. П., Горшков Б. Г., Никитин П. И.Амплификация сигналов припроведении иммуноанализаспомощьюоптическихбиосенсорных систем "Пикоскоп" // Труды 54-й научной конференции МФТИ (МоскваДолгопрудный, 10-30 ноября 2011), с. 38 40.14. Nikitin P., Orlov A., Nikitin M., Vetoshko P., Gorshkov B.
Immunoassays Based onMagnetic Nanolabels // Book of abstracts of the 8th European Conference on “Magnetic Sensorsand Actuators” (Bodrum, Turkey, 4-7 July 2010), p. W3O.36.15. Orlov A. V., Nikitin M. P, Ksenevich T. I., Vetoshko P. M., Nikitin P. I. New methods ofquantitative magnetic immunoassay and their optimization with a biosensing system Picoscope //Book of abstracts of III International Competition for Scientific Papers in Nanotechnology forYoung Researchers at RUSNANOTECH 2010 Forum (Moscow, Russia, 1-3 November 2010).16. Никитин М. П., Oрлов A. B., Сергачёв И. А., Ксеневич Т.
И., Горшков Б. Г.,Никитин П. И. Oптические одномерные «Пикоскопы» - новые возможности длямедицинских исследований и биосенсорики // Сборник материалов III Евразийскогоконгресса «Медицинская физика – 2010» (Москва, 21-25 июня 2010), т. 4, с. 25-27.17. Орлов А. В., Никитин М.
П., Ксеневич Т. И., Ветошко П. М., Никитин П. И.Магнитный иммуноанализ - новый метод биохимической диагностики на основе магнитныхнаномаркеров // Сборник материалов III Евразийского конгресса «Медицинская физика –2010» (Москва, 21-25 июня 2010), т. 4, с. 256-258.18. Orlov A. V., Nikitin M. P., Gorshkov B. G., Nikitin P. I. Optimization of Immunoassaysbased on Magnetic Nanolabels by Optical Biosensor Picoscope™ // Proceedings of the 8thInternational Conference on the Scientific and Сlinical Applications of Magnetic Carriers (Rostock,Germany, 25-29 May 2010).19. Nikitin M. P., Orlov A. V., Diryugina E.
G., Gorshkov B. G., Nikitin P. I. Investigation ofLabels for Adaptation of Direct Optical Biosensor Picoscope™ for in vitro Diagnostics // Book ofAbstracts of the 10th European Conference on Optical Chemical Sensors and Biosensors.EUROPT(R)ODE X (Prague, Czech Republic, 28-31 March 2010), p. 222.20. Orlov A. V., Burenin A. G., Nikitin M. P., Blinova A. I., Ksenevich T. I., Gorshkov B.
G.,Nikitin P. I. Combined Opto- Magnetic Biosensors // Book of Abstracts of the 10th EuropeanConference on Optical Chemical Sensors and Biosensors. EUROPT(R)ODE X (Prague, CzechRepublic, 28-31 March 2010), p. 96.21. Орлов А. В., Горшков Б. Г., Ветошко П. М., Никитин П.
И. Новые форматымагнитного иммуноанализа и их оптимизация с помощью приборов Пикоскоп. // Труды 52-йнаучной конференции МФТИ (Москва-Долгопрудный, 27-30 Ноября 2009), с. 46.24.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
