Биогенный магнетит и магниторецепция. Новое о биомагнетизме. Под ред. Дж. Киршвинка. Том 1 (1989) (1095847), страница 49
Текст из файла (страница 49)
ЛОСЛС ТОТО КЙК ИЕОрГИНИЧЕСКИй Матсрнап ОСаждеи, К НЕМУ добаимя$ог свежий Отбеливатель и Вновь Взбалтываю»' О$ждок пря ПОМОщм уЛЬтраэвуКОВОй Вибрации. Этат прО»$ССС ПОВтаряЮт дО тЕХ нар, пОка большая часть Оргйничсского исшссти4$ ие Окажется растворев»$ОЦ. Обработанные отбеливателем частицы промывают д$»стмлл$$рова$$$»ой иодой, применяя такое же чередование растворения в воде, осаждения и последуюШсго суснеиднрования до тех пор, пока отбеливатель ис будет В ОС$говпом удален. Как и при всякой обработке„здесь возможс$$ ряд осложнений. Во-первь$х, лля улучтпсния растворения органического вещесгва нельзя применять нагреваине из-за большой вероятности сопутствующих Этажу ИЗМЕНЕНяй МИНЕраЛЬНОГО СОСтйиа $$$иян) КрИСТЙЛЛИЧИОетв выделяемого неорганического материала, Во-вторых, продолжительиость этапов цеитрнфутирования должна быть достаточной, для тога чтобы большая часть ламе самых мелких минеральных часгичек могла достичь дна пробирки.
Это можно трубо оценить, помешал пробирки перед источником света. Если жидкость прозрачна, н эффект Ч'инда$»я не обнаруживается, значит, бОльшйя часть материа»та осаждсна. 8"третьих, следует учитывать возможность изменения минеральных фаз под действ»$ем отбелнвителя, Существует потенциальная опасность окисления ~асти восстановленного железа в ма$ не 1 иге, ио опыт показал.
что зто происходит редко. Исследование таких образцов до и после и1гге$$сивного воздействия отбеяивателя методом дифракции ри$»тгеноиских лучей не обнаружило образование новых минеральных фаз. Тем не менее исследователь, возможно, пожелает убедиться сам, что такого рода изменения отсутствуют И в-четвертых, с$цс одно предостережение' окисление органического материала хлорным отбеливателем в наката. рых случаях может приводить к выдевению железа, находящег$зся в организме в хсийтировв$$иом или другом немн парализованном состоянии, Это железо может гндролизоваться в днстлллированной воде с образованием коллондных Водвых оксидов железа, отсутствуюп$$$я в обычных условиях, Хотя ие зарегистрировано ни одного случая такога артефакта, при любом способе выделения минеральных частиц с использованием окисления органического материала потенциальная В»»зможнОсть такой Ошибки не исклжчеиаКогда минеральный материал вьщелен и освобожден от органических примесей, он Фактически готов для исследования.
Поскояьку про свечиаающая электронная микроскопия имеет определенные агравиче. ния в отношении толщины обраЗ$та, 1И»абХОдима дильнийшая обраб$»тя$$ материала для удаления крупных зерен. Образцы толще О,! мкм редко дают в электронном микроскопе что-либо„кроме св»$узтного изображс ния, причем зто зависит от среднего атомного числа иослеДУемьтх элем» ЕН,„„И ИХ КрИСТЙЛЛОт.рафИЧЕСКОГО ОКружвиня.
ПОЗТОМу и таКОМ „Ьр: Можна НССЛЕДОВЙ гь $" ОЛЪКО МИИЕРальные част»$пь$ меньшей вели' т-рубозернистые препараты лучше исследовать цри помоши „'„,„„ру»ощсй зз»ектронной микроскопии, в отраженном свете или с ,$рич».»»с в$$$,'»1 Реплн»т ЦзтотОвление ПОЛЛОжек ДЛЯ обРазцов др»$»$сс»»сдовании в просвечиваюшем электронном микроскопе образцы поз$с$»п$$от ив соответствующие подложки. Обычная процедура, описан»$ив в руководствах. состоит в $$анесеинн капли днспергнрован$$ых ч„тсти1$ иа держатель образца-сетку-подложку или другое какое-либо приспособление с небольшими ОтВсрстиями, затянутътм»$ очень тОнким бесструктур$тыъ$ и проиицаемым для электронов субстратом.
Сетки лля Образцов весьма различа$отся по виду металла и Велнчи$$е яясск. 6 большинстве случаев для диспергированных частиц подходят Мсдпме СЕТКИ тала вАФИНЙЭ диаМЕтроы 3 ММ, ИМЕЮщНЕ МЕЛКИС ВЧСйКН С че$киь$в очертаниями. Достаточной является решетка из 200-300 ячеек, Сетки с крупттыми Ячейками, тцелевидные нди овальные бленды более ПРкгол1$Ь$ ДЛЯ СЙСРХтОНКИХ СРЕЗОВ ИЛ$$ РЕПЛИК, НО МЕНЪШЕ ПОДХОДЯТ ДЛЯ диспсргированиых частиц из зв повытпе$$$$ой вероятности сме$цення Образца и Паиреждаиия Субстрата В ЗЛЕКтрОННОМ М$$Краско$$Е.
Квжд»»я Сетка должна быть покрыта падложкой. Для этого имсстся несколько возмож$$остсй, но наиболее распространенной являетси тонкая коллодиевая (иитроцеллюлозная) пленка, покръ1гая тонким слоем ийиылсинаго углерада. в большинстве руководств описывй$отся рваные способы изготовлевия таких тонких пленок. Одним из простейших методов достижения Ол»юрод»$ОС 1 $$ топких пленок Является метод капли, растекаютцейся под действием силы тяжести, По этой методике сначала готовят чистый Раствор, содержащий Около РА (по Весу) парлодия в амилацетате. Балы»»ой стекли?$$1ый кристйллизйтор заполняют дистиллированной во Лой.
Ставят В ПЕНтрЕ ЕГО бЛОК-ПадстаВКу И Кяадут На НЕЕ МвдиуЮ (Иян ИЗ другого нержйвс1О$цего материала) пластинку таким образом, чтобы она ивходи »ась нод симой поверхностью воды. Затем иа пласт»$$$ку астор"»к»ю помещают по отдельности медные сетки После укладывания ~сх сеток и кристаллизатор медленно дОяивают Воду до тех пор, пока "е образуетея мениск. Частицы пыли с поверхности меииска удаляют "истой стеклянной палочкой. Ка чистую поверхность воды наносят Ъ$аяс»$ьху»о КаилЮ ИСХОДНОГО раСГВОра Пардодня ПОСЛЕ ТОГО КаК аМИЛ- Й'$етит улетучится (зто должно занимать всего несколько секунд), на пояс х Оясрх1$ОСтк ВОЛЫ ОСтастея тОПКая ПЛЕИКЙ ПяйСТМКОВОГО ПОКрЫтия.
' - -ду кз кристаллязйтор Отсасывают при помОши сифона, пОзвО- '""" п»»е»»ке осесть ий сетках. ~В некоторых лабораториях пользу$отся спе$О»взь """'«»ыми стекляннъ$мн чашками с $$япсль»$ым отверстием в основании ддяз д»1я удалении воды без отсасывания с помощью сифона.) После того Ч- П. При»»р?»ь» и .цеиодь$ Кая ВОду ОтСОСаЛИ, ПЛаС».Н$$ху С ПОКрмтЫМИ ПЛанКОЙ СатхаМН ОСторожк~ удаляют и высушив?пот иа воздухе в защищенном от пыли месте. Высушаи$$ьге иа воздухе сетки могут быть использованы как под ,$$ожки длй образцов.
Однако для их укрепления и для того чтоб„ избежать ъаряднъ4х зффектОВ 6 микроскопе, жела гель?м $»апь|лить на н» поверхность тонкий слой углерода, Тонкую углародную пленку нанося» в высоковакуумной напылительной усгановке, являющейся стандартно$ $»ри?$адлсж$$ость$О большинства злектронно-микроскопических лабора'.
тОрнй. О КОЛИЧЕСТВЕ уГЛЕрОда Судят ВИЗуаЛЬНО ПО МЕра ЕГО Наиееснщ~ Прежде чем откачать воздух иъ колоколообразного сосуда вакууь$ногг нспарителя, рядом с сс$ками помещают небольшой кусочек бело~ глазурированной кафельной плитки, в центр которого наносят валли масла для диффузиоииого насоса. При испарении угларод будет оссда»ъ на всей поверхно«ги кафеля, не прикрытой масляной ка$$лей„и, следя з$ интенсивностью окрашнвания, зксперимеитатор может контролироват» толщи$$у слоя иа~ылеиного углерода. Желательным является сл$$бц, серое Окра»пиввкис.
Углеродные планки (и в меньшей степени пластмассовые) гидрофоб НЫ. ЭТО НажсдатЕЛЬНОЕ СВОйотВО Затрудияат ОдиОрОднОЕ Нааданвн»ПП диспергированиого материала водных суспензий. Поз?ому пСРЕД $$а»п» сеииам образца углародныа полимерные подложки необходимо допод нн гсльно обработать. Важность этого этапа в н«следованиях с поь$ощьн просвечивающей электронной микроско$$ии то$$коднсперсного матсряа ла бесспорна, Время, затраченное на придание поверхности сетки гидро фильиых свойств. окупается с лихвой. Различные руководства дрсдлагают миожсс» во способов устра;нен$п несмйчиваемости, вызванной гидрофобностью поверхности.
Найбола$ чистым и надежным является редко описываемый методический прием ионная очистка в высокочастотном газовом раъряде. Лучше всег$» это» процесс протекает сразу после покрытия сеток углеродом. Если вакуум ный испаритель оборудован еионно-очистным?» тра$$сформатором, с»т включают после прекращения работы диффузионного насоса, когда поз колокол проникает немного воздуха„и начинают новый цикл: Пр» отсугствии встроенного трансформатора сходного результата дости гают приложением к внешнему вводу колокола управляемой вручнук высокОчастотной индукционной катушки Тесла. Голубоватый ГЯЗОВ$»$~ разряд ВЮГлядит по"разному в зависимости От степени вакуума.
Кйк н $ случае ионизационного счетчика„он будет слабым и цри О~Щюкоь иизком, и прн слишком высоком вакууме. С помощью метода проб $ ошибок исследователь может найти наилучшие условия обрабо*"' сеток. Сетки под~р»»$ют обработке в течение 30 — бОс После Этого» он$ пригодны для использования н могут быть извлечены из прибоРа' Есл» сетки пе используют в тече$$ис примерно недели, то может потребовать сл их повторная обработка.
»»~"»нн' з.я'кнц»»»н»»~»н,миАу»~»Г»з»ам» Нанесение образца на лодложку $-», сне г$ио как образец получен в виде водной суспе?$зии, его помещают „оо, в«» ству?оп$ам количестве) иа повархиость сетки для исследования ,-,скгрцином микроскопе. При этом возникает необходимость в а ?рнООТХО СПОСОбоа удержнванля СЕТОК. Прн НСПОЛЬЗОВанин ПИННЕта ВО ?НИКаТЬ Ос??ОЖНС?$ИЯ, н ОСОбСННОСТН В СяуЧас МагнитНЫХ ,„$а $ср$$$Н$ов, Лучшим спОсобОм ЯвлЯатся сладу»о»ций.
Сначала ыа чистое др;.дчстпос стекло накладывают небольшую полоску двусторонней липкой ленты. Затеь$ отдельные покрытые пленкой и ионизироваиные О,$ОР$$ь$с сетки прикладывают к самому краю ленты таким образом, Ч» Об»ь$ удсржа 1ь ИХ На МЕСТЕ И В ТО жа ВРЕМЯ ЧТОбм ОНИ бЫЛИ На д$»С'$'н»'ОчнОМ р$$ССТОЯНИИ друГ ОТ ДруГй ПОСЛЕ ЭТОГО Иа СЕТКИ МОЖНО $$»?$$~»СНГ$* ООРазды, И «ледусмый материал должен быть хорошо диспергнроввн в опрадс:$с$$$юм ко?$инсстве дистиллированной воды. «Соотвагствующую» КО»$ИС$$тра!~0$О Оцрадеяяют ЗКС$$«риыа?$»Ж?ьно, аиъуаЛЬНО Оценлаая Ий цРОСВЕ$ $НГГИЧССКуЮ ПЛОТНОСТЬ раетВОра В 5-МНЛЛИЛитрояой цЕИГрифу»х>$О$$ Прсбнрке. ЕСЛИ СуСПСНЪИЯ ОКЯЗЫВЯЕТСЯ СЛИШКОМ СВЕтЛОй, тпардыс компоненты можно парсосадиГЬ В КЛИНИЧССксй цеитрнфуге.
Если суспс$?зим ныгляднт слишком темной, еа можно развестн. Лерел»?алей:иисм образца на сетку цантрифужиую $$робирку, солар- жни$у$О обра»ец, следует на коро.?кое время поместить в ультразвуковой лис?»сргатор, чтобы быть уверенным в дезагрегации минерйяьнь$х чйстиц, Эго х»ож«г быть Особенно важно в случае магнитных частиц, которые $»мск»$ тенденцию слипаться и образовывать вытянутыа цепочки.
При помощи чистой стеклянной пипетки па ионизированиую понсрх$$ос»ь сс$ки наносят $$сбольшу$о каплю диспергированного мите- РИВЛВ. Есяк ПОВЕРХНОСТЬ ДОСГатОЧИО ГИДРОф?$ЛЬИЯ„ТО МЯЛЕНЬКаЯ КаПЛЯ буд«$ иметь и?$ъкнй уплощениый менисковый профиль, аслн же она »ядроФобна, то капля будет высокой. В последнем случае обычно иа Рск$»ь$с??дуется производить дальнейшие операции, поскольку при высыха$?ии образец распределится по поверхности сетки неравномерно. Час- '$$?пы булу» смещаться к краям сетки нли образовывать плотные сконлс»$ин.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
