Диагностика вич-инфекции

Диагностика вич-инфекции

Своевременная диагностика ВИЧ-инфекции позволяет предотвратить осложнения, связанные с поздней стадией ВИЧ-инфекции, снизить риск трансмиссии ВИЧ-инфекции,  своевременно назначить  ВААРТ, снизить  заболеваемость и летальность ВИЧ-инфицированных больных. 

Однако ранняя диагностика ВИЧ-инфекции является проблемой во всем мире. Так по данным центра по контролю заболеваемости, Атланта,  у 41% ВИЧ-инфицированных больных СПИД развивается в течение 1 года после установления диагноза, что затрудняет предотвращение неблагоприятных исходов.

Все диагностические тесты на ВИЧ можно условно разделить на 2 группы:

1. Тесты,  позволяющие установить факт инфицирования ВИЧ

2. Тесты, позволяющие осуществлять мониторинг  ВИЧ-инфекции у инфицированного человека (стадия ВИЧ-инфекции, показания к началу терапии, эффективность терапии).

Установление факта инфицированности ВИЧ.

1. Серологические тесты:

· определение антител к ВИЧ (ИФА, иммуноблот)

Рекомендуемые материалы

· определение антигена P24

2. Молекулярно-генетические тесты:

· Определение РНК вируса

· Определение ДНК провируса

В обычной (рутинной) практике для диагностики ВИЧ используется так называемый стандартный протокол серологического тестирования ВИЧ, в котором используются доступные и высокоточные тесты. Протокол включает проведение диагностики ВИЧ в 2 этапа : скрининговый и подтверждающий (табл. 1).

Табл. 2 - Стандартный протокол серологического тестирования на ВИЧ

Как видно из табл. 2, протокол обладает высокой точностью в диагностике  ВИЧ, однако возможно получение ложноположительных и ложноотрицательных результатов.

Проблема «диагностического окна». Одна из важнейших проблем тестирования на ВИЧ — так называемый период диагностического окна. Это срок, который проходит с момента заражения ВИЧ до появления определимого уровня антител (Busch 1997). Переход неопределимого титра антител в определимый называется сероконверсией. Современные скрининг-тесты выявляют ВИЧ-инфекцию через 6 недель после заражения примерно в 80% случаев, а через 12 недель — почти в 100% случаев. Крайне редко ВИЧ-инфекция выявляется только через 3-6 месяцев после заражения. Чтобы сократить период диагностического окна, в скрининг-тестах четвертого поколения определяются и антитела к ВИЧ, и антиген p24 (Gürtler 1998, Ly 2001).

Прямые тесты на ВИЧ. Диагноз ВИЧ-инфекции можно поставить не только на основании косвенных признаков (наличия антител к ВИЧ), но и на основании прямых доказательств присутствия вируса. Выделение вируса в культуре клеток — исследование, которое приберегают для особых случаев: оно требует специального оборудования и подготовки, а кроме того сопряжено с определенным риском и поэтому может проводиться только в лабораториях с повышенными мерами безопасности. Существуют и другие прямые тесты на ВИЧ, в частности тест на антиген p24. В целом ИФА на антиген

p24 сегодня вытеснили более чувствительные тесты на нуклеиновые кислоты ВИЧ, однако скрининг-тесты четвертого поколения помимо антител к ВИЧ выявляют и антиген p24, что позволяет сократить период диагностического окна (см. выше). Вирусные нуклеиновые кислоты (то есть генетический материал ВИЧ) можно определить различными лабораторными методами. Одни из них выявляют провирусную кДНК в лейкоцитах (в цельной крови, обработанной ЭДТА), другие — вирусную РНК в бесклеточной фракции (в плазме или цельной крови, обработанной ЭДТА). Качественные тесты на нуклеиновые кислоты ВИЧ позволяют судить о наличии инфекции. Они дополняют или заменяют тесты на антитела к ВИЧ при диагностике ВИЧ-инфекции в отдельных случаях — например, при подозрении на недавнее заражение (в период диагностического окна, когда антитела не определяются) или при обследовании детей, рожденных ВИЧ-инфицированными женщинами (в их крови присутствуют материнские антитела — см. ниже).

В связи с возможностью получения ложнопозитивных и ложнонегативных результатов при серологическом тестировании на ВИЧ у части обследуемых применяются молекулярно-генетические методы тестирования – определение вирусной РНК или провирусной ДНК ВИЧ методом ПЦР.

Пациенты, которым проводится диагностика ВИЧ с использованием ПЦР:

· новорожденные

· больные с агаммаглобулинемией

· больные, находящиеся в периоде  «серологического окна»

· острая ретровирусная инфекция

· доноры крови.

В РБ любой желающий может пройти анонимное обследование на ВИЧ –инфекцию в любом медицинском учреждении. Пациенту гарантируется полная конфендициальность, которая охраняется законом РБ. Кроме того, больные обследуются по клиническим показаниям при наличии признаков заболеваний подозрительных на проявление ВИЧ. Контингенты,  подлежащие обязательному тестированию на ВИЧ определены в приказе МЗ РБ №351, 1998. 

Контингенты, подлежащие обследованию на ВИЧ в РБ (Служебное письмо МЗ РБ 18.12.2009 № 02-2-04/4037 «О медицинском освидетельствовании на ВИЧ»)

· Доноры

· Иностранные граждане

· Лица с клиническими симптомами заболеваний (лихорадка, лимфаденопатия, потеря массы тела, рецидивы пневмоний, серозный менингит н/э, энцефалит н/э, нейропатии, слабоумие и др.).

· Больные с подозрением или подтвержденным диагнозом (рецидивы бактериальных инфекций, кандидоз, криптококкоз, туберкулез,сепсис, саркома, мононуклеоз, образования г/м, лимфомы и др.).

· Новорожденные с задержкой развития, аномалии, маловесные, масса менее 2500

· Больные парентеральными гепатитами

· Беременные

· Реципиенты препаратов крови, жидкостей

· Дети, рожденные ВИЧ-инфицированными

· Дети на гособеспечении

· Лица с ИППП

· Наркоманы

· Пенитенциарная система

· Эпидпоказания

· Анонимно

Исследования, позволяющие осуществлять мониторинг  ВИЧ-инфекции.

· Определение уровня лимфоцитов CD4+в сыворотке крови (иммунограмма методом моноклональных антител)

· Определение вирусной нагрузки ВИЧ в крови инфицированного (ПЦР)

· Определение мутаций резистентности ВИЧ  к антиретровирусным препаратам ( ПЦР, генетический анализ ВИЧ).

Определение уровня лимфоцитов CD4+в сыворотке крови (иммунограмма методом моноклональных антител).

Данный метод позволяет определить состояние иммунной системы инфицированного человека.  Уровень CD4+лимфацитов является одним из важнейших лабораторных показателей для решения вопроса о назначении ВААРТ и для оценки эффективности проводимой терапии. 

Расчет показателя СD4+ проводится по формуле:

СD4+= (L кр. X  % Lymph X  %CD4+ X 1000): 10000

Примечание: L кр. – показатель лейкоцитов в общем анализе крови обследуемого

% Lymph – процентное содержание лимфоцитов в общем анализе крови , %CD4 - процентное содержание CD4 лимфоцитов в иммунограмме больного.

Таким образом, для определения уровня СD4+ у больного должно быть одновременно выполнено 2 исследования: общий анализ крови с  подсчетом лейкоцитарной формулы и иммунограмма крови.

Нормальные диапазоны уровня СD4+лимфоцитов у взрослых находятся в пределах 500 – 1400  в 1 мкл. Необходимо учитывать, что показатель уровня СD4+лимфоцитов подвержен колебаниям у одного и того же пациента даже в течение суток и зависит от многих факторов, наиболее значимыми из которых являются: 

Время года, время суток (минимальные значения – 12.30, максимальные – 20.30)

Терапия  кортикостероидами

Рекомендуем посмотреть лекцию "8. Комментарий".

Коинфекция  лимфотропными вирусами

Не влияют: пол, возраст, физическое и эмоциональное перенапряжение, беременность, категория риска инфицирования ВИЧ.

В случае отсутствия возможности определения показателя  СD4+лимфоцитов (исследования являются дорогостоящими и требуют специально оборудованной лаборатории) при решении вопроса о назначении АРТ допустимо ориентироваться на абсолютное количество лимфоцитов в общем анализе крови. Показанием к назначению ВААРТ является абсолютное количество лимфоцитов менее 1,0 х 10⁹ / л.

Определение вирусной нагрузки (ВГ) ВИЧ в крови инфицированного (ПЦР. Исследование так называемой вирусной нагрузки сегодня в клинической практике незаменимо: оно позволяет как оценивать прогноз, так и следить за эффективностью лечения. Знание исходного (до начала ВААРТ)  уровня ВН пациента является дополнительным критерием начала ВААРТ. Считается, что уровень ВН выше 100 000 копий/мл  - пороговый уровень для старта терапии у взрослых и детей старше 1 года жизни. Мониторинг ВГ на фоне ВААРТ является критерием эффективности терапии. Так, при эффективной терапии уровень ВН должен снижаться и достигать неопределяемого уровня (менее 50 копий/мл).

Экспресс-тесты на ВИЧ. OraQuick® (OraSure Technologies, Пенсильвания, США), Reveal™ (MedMira Laboratories, Галифакс, Новая Шотландия), Uni-Gold Recombigen™(Trinity Biotech, Ирландия) и одноразовая диагностическая система Murex). Сегодня выпускается множество экспресс-тестов на ВИЧ. Они известны как «тест на месте», «тест у постели больного» и «упрощенный экспресс-тест». В их основе лежит один из четырех методов: реакция агглютинации, ИФА на полимерных мембранах (тест-полоски), иммунологический фильтрационный анализ либо иммунохроматография (Giles 1999, Branson 2000). Большинство таких тестов позволяет получить результат через 15-30 минут. Многие предназначены для исследования цельной или капиллярной крови (из кончика пальца или мочки уха), что исключает существующую при исследовании венозной крови необходимость центрифугировать образец.

Подобные экспресс-тесты полезны, когда результат необходимо получить быстро, например, в приемном отделении, перед срочными хирургическими вмешательствами или после случайной травмы иглой. Кроме того, они позволяют сократить частоту «невостребованности» результатов тестирования, ведь при получении результата теста через несколько дней некоторые пациенты не обращаются за ним. Основной проблемой применения экспресс-тестов - необходимость консультировать пациента перед тестированием и получать его согласие на проведение теста. Кроме того, любой тест на ВИЧ, доступный непрофессионалам, может использоваться неправомерно (скажем, для принудительного тестирования заключенных).