Аналитическая диагностика острых отравлений, наркотического опьянения

5.6. Аналитическая диагностика острых отравлений, наркотического опьянения. Анализ отдельных групп наркотических средств

Употребление наркотиков стало одной из актуальных проблем современного общества. Характерной чертой оборота наркотических средств в России является значительное расширение их ассортимента вследствие появления многочисленных легальных медицинских препаратов и интенсификации контрабандных поставок. При этом увеличивается доля незаконно производимых высокотоксичных синтетических контрабандных поставок. Угроза здоровью и жизни людей усугубляется распространением вируса ВИЧ вследствие антисанитарного внутривенного введения наркотиков; растет число детей с тяжелыми заболеваниями и серьезными умственными и физическими недостатками, рождаемыми матерями, употребляющими наркотические средства.

Незаконное производство и оборот наркотиков, а также злоупотребление ими, сопровождаемые противоправными действиями, создают угрозу для здоровья и жизни людей, наносят серьезный ущерб экономике, подрывают нравственные основы общества.

Одним из средств государства в борьбе с наркоманией является аналитическая служба, осуществляющая химико-токсикологический анализ средств, вызывающих одурманивание, позволяет контролировать уголовно наказуемые деяния и способствует эффективной диагностике и лечению больных наркоманией.

Специфика борьбы с незаконным оборотом наркотиков требует для достоверного выяснения всех обстоятельств дела привлечение специалистов разных профилей: криминалистов, химиков-токсикологов, врачей-наркологов. Одним из решающих направлений при этом является проведение судебно-медицинского обследования подозреваемых с целью установления факта употребления наркотиков, результаты которого во многом зависят от лабораторного исследования биологических проб обследуемого.

5.6.1. Понятие о веществах, вызывающих одурманивание

Наркомания и токсикомания с медицинской точки зрения рассматриваются как болезнь, причиной которой является употребление средств, вызывающих зависимость (психическую, а иногда и физическую) между живым организмом и химическим веществом.

Психическая зависимость – состояние, при котором наркотик (одурманивающее вещество) вызывает чувство удовлетворения и которое требует периодического или постоянного приема наркотика с целью получения удовольствия или во избежание неприятных психических ощущений.

Физическая зависимость – адаптация, проявляющаяся в сильном физическом расстройстве при задержке приема наркотика. Данное расстройство (синдром абстиненции) складывается из определенного множества симптомов и признаков психического или физического свойства, характерных для каждого вида наркотиков.

Рекомендуемые материалы

Средства, вызывающие одурманивание, подразделяются на наркотические средства и токсикоманические средства, в том числе средства, вызывающие лекарственную зависимость.

Термин “наркотическое средство” содержит в себе три критерия: медицинский, социальный и юридический. Они взаимосвязаны и в правовом аспекте обязывают признавать средство наркотическим только при единстве трех критериев, а именно: медицинского, если соответствующее средство оказывает специфическое действие на ЦНС, что и является причиной его немедицинского применения; социального, если его немедицинское применение принимает массовые масштабы, приобретающие социальную значимость, и юридического, если, исходя из двух вышеуказанных критериев, МЗ страны признало это средство наркотическим и включило его в список наркотических средств.

В случае отсутствия хотя бы одного из критериев одурманивающее средство относится к средствам, вызывающим токсикоманию или лекарственную зависимость.

5.6.2. Классификация наркотических и одурманивающих веществ

1.     Алкалоиды группы опия (морфин, кодеин, наркотин, папаверин и их синтетические производные: героин (диацетилморфин), дионин (этилморфин, промедол).

2.     Производные барбитуровой кислоты (фенобарбитал, барбамил, бутобарбитал, этаминал натрия).

3.     Производные 1,4-бензодиазепина (хлордиазепоксид, диазепам, оксазепам, нитразепам).

4.     Производные фенотиазина (аминазин, дипразин, левомепромазин, тиоридазин).

5.     Каннабиноиды (каннабидиол, каннабиол, тетрагидроканнабинол, тетрагидроканнабиноловая кислота).

6.     Фенилалкиламины (эфедрин, эфедрон, амфетамин, метамфетамин).

7.     Кокаин.

8.     Галлюциногены (ЛСД, псилоцибин, мескалин, фенциклидин).

9.     Этиловый спирт.

10. Растворители (бензин, ацетон, трихлорэтилен, эфиры, хлороформ).

11. Второстепенные психостимуляторы (никотин, кола, кофеин).

Конвенцией ООН по борьбе с незаконным оборотом наркотических средств и психотропных веществ и Резолюцией Генеральной Ассамблеи ООН по вопросу о международном сотрудничестве в борьбе с незаконным оборотом и распространением наркотических и психотропных средств рекомендовано странам-участницам взять под свой контроль: 1) производство, изготовление, склонение к употреблению, предложение с целью продажи, распространение, продажу, поставку на любых условиях, посредничество, переправку, транзитную переправку, транспортировку, импорт или экспорт любого наркотического средства или наркотического вещества; 2) культивирование опийного мака, кокаинового куста, конопли (индийской, южной маньчжурской или южной чуйской) либо других запрещенных к возделыванию наркотикосодержащих культур в целях производства наркотических средств в нарушение положений Конвенции ООН; 3) изготовление, транспортировку, распространение и продажу оборудования и полупродуктов для производства наркотических средств.

Ответственность за правонарушения, связанные с наркотиками, в Российской Федерации регламентируется Уголовным кодексом, Кодексом РФ об административных правонарушениях, Гражданским кодексом, а также Кодексом о браке и семье и Жилищным кодексом РФ.

5.6.3. Особенности химико-токсикологического анализа на содержание одурманивающих средств

Целью анализа наркотических и других одурманивающих средств является установление факта присутствия наркотических и других одурманивающих средств независимо от тяжести состояния, т.е. от найденного количества вещества. Главная задача анализа – идентификация средств, вызывающих одурманивание. В анализе наркотических и других одурманивающих средств существуют два основных направления: судебно-правовое (установление факта присутствия, употребления) и клиническое (диагностика, лечение, реабилитация). При судебно-правовой направленности вещество анализируется как минимум двумя методами, причем один из этих методов используется для предварительного исследования, а другой – для подтверждающего исследования.

Отличительной особенностью ХТА, выделяющей его из других видов анализа, является определение экзогенных веществ в объектах, которые по своей природе весьма разнообразны. Объекты, подвергаемые анализу, можно разделить на следующие группы:

– биологические образцы (моча, кровь, волосы, ногти, внутренние органы, диализаты, промывные воды);

– образцы растительного происхождения (конопля, опий), их экстракты и производные;

– твердые субстанции (порошки);

– таблетки, драже;

– инъекционные растворы.

К основным этапам ХТА средств, вызывающих одурманивание, относятся:

– забор проб и хранение биоматериала;

– пробоподготовка;

– предварительные и подтверждающие методы анализа;

– обработка и интерпретация полученных результатов.

В силу специфики анализа на содержание наркотических и других одурманивающих веществ (сокрытие факта употребления, фальсификация проб и т.д.) в основу его методологии положен метод скрининга, используемый при ненаправленном анализе, т.е. при анализе на неизвестное вещество. При анализе известного вещества, т.е. при направленном анализе, применяются частные методики определения.

Надежность результатов анализа, полученных с помощью скрининга, определяется:

– правильностью организационных мероприятий (отбор пробы, хранение проб, постоянный контроль за работой оборудования, чистотой реагентов и др.);

– чувствительностью и специфичностью используемых методов;

– знанием природы вещества, способов введения в организм, распределения в организме, степени метаболизма, путей выведения, а также индивидуальными особенностями организма.

Выбор аналитических методов для скрининга одурманивающих средств определяется целью анализа – добиться минимума отрицательных и максимума положительных результатов – и связан с такими главными параметрами анализа, как чувствительность и специфичность, так как этими параметрами определяется наличие ложноотрицательных и ложноположительных результатов соответственно.

Чувствительность аналитического метода определяется как отношение сигнала анализируемого вещества к сигналу базовой линии и выражается в нанограммах на миллилитр (нг/мл) или в граммах на килограмм (г/кг) биообъекта.

Под специфичностью метода понимают способность метода отличать химическую структуру данного соединения от ему подобных (аналогов).

В качестве основных предварительных скрининговых методов для обнаружения средств, вызывающих одурманивание, используются химические (хромогенные, микрокристаллические реакции), иммунохимические методы (ИФА, ПФИА, РИА и др.) и тонкослойная хроматография.

В качестве подтверждающих методов исследования используются ГЖХ, ВЭЖХ, ГХ/МС. Подтверждающие методы должны быть выше или равными по чувствительности, чтобы уменьшить количество ложноотрицательных результатов, но обязательно должны быть выше по специфичности, для того, чтобы снизить количество ложноположительных результатов.

Таблица 10. Сравнение преимуществ и недостатков некоторых аналитических методов

При выборе аналитического метода необходимо учитывать его преимущества и недостатки, а также вид анализируемого образца и обстоятельства дела. Но даже при использовании самого чувствительного метода, результаты скрининга должны быть подтверждены аналитическими методами, основанными на других физико-химических принципах.

5.6.4. Требования, предъявляемые к работе лабораторий, занимающихся анализом наркотических и других одурманивающих веществ

1.     Лаборатория должна пройти внешнее профессиональное тестирование и быть аттестована.

2.     Каждый химик-эксперт должен доказать свой профессиональный уровень.

3. Каждый прибор должен иметь сертификат средства измерения и свидетельство о поверке.

4.      Все используемые реагенты должны иметь отметку о дате изготовления и паспортизованы.

5.      Каждый этап методики должен быть подробно описан и иметь метрологическую оценку (воспроизводимость, предел обнаружения, линейность и др.).

6.      Используемые эталонные вещества должны быть паспортизованы.

7.      Должны быть известны пределы обнаружения анализируемых веществ по каждому используемому аналитическому методу.

8.      Правила отбора и хранения образцов должны быть регламентированы.

9.      Каждый положительный результат должен быть подтвержден другим аналитическим методом. Исключение может быть сделано только в случае направленного анализа.

5.6.5. Особенности интерпретации результатов при анализе биологических объектов на содержание веществ, вызывающих одурманивание

Используя полученные результаты, аналитик-токсиколог должен не только подтвердить или опровергнуть предположение о присутствии одурманивающего средства в анализируемом образце, но и различать случаи хронического и разового использования наркотических веществ. Последнего можно достичь, если сопоставить концентрации обнаруженного вещества и его метаболитов. Как правило, более высокие концентрации метаболитов свидетельствуют о хроническом применении, а значительное превышение концентрации вещества над концентрацией метаболита – об остром отравлении (разовом употреблении).

Для правильной интерпретации результатов анализа важно знание формы и способа введения. Внутривенное введение или ингаляция в начальный момент дают более высокие концентрации вещества в крови, чем внутримышечное, оральное, подкожное.

В случае анализа трупного материала равные концентрации, обнаруженные в печени и крови, свидетельствуют о хроническом использовании высоких доз наркотических веществ. В случае острого отравления концентрация анализируемого вещества в печени значительно превышает концентрацию его в крови. Высокие концентрации одурманивающих средств в крови на раннем этапе после внутривенного или орального введения будут соответствовать более высоким концентрациям в легких и печени, в то время как в период выведения концентрация в желчи и моче будет выше, чем в крови.

Одурманивающие средства основного характера дают сравнительно низкие концентрации в крови, а отношение концентраций в печени и в крови часто выше 10. Соединения кислого характера дают умеренно высокие концентрации в крови, и это отношение находится в пределах от 2 до 5. Для веществ нейтрального характера наблюдаются высокие концентрации в крови и почти одинаковое содержание в других тканях.

Для корректной интерпретации полученных данных такого биообъекта, как моча, необходимо также знание дозы, времени, способа и периодичности введения вещества, кинетики распределения, однако в случае наркотиков подобная информация редко доступна и не всегда полна. Однако можно отметить некоторые закономерности:

1.    Чем выше введенная доза, тем больше вероятность их обнаружения. Высокие дозы обычно дают более высокие концентрации в плазме и моче.

2.    Концентрация вещества в плазме зависит от его распределения в организме, метаболизма и выведения. Для каждого вещества его фармакокинетика индивидуальна. Концентрация наркотических веществ в моче варьируется по сравнению с плазмой и зависит от объема и рН мочи.

3.       Каждое вещество сохраняется в организме в разное время и зависит от химического строения и частоты употребления.

4.       Поскольку концентрация большинства веществ в моче (за исключением этанола) не коррелируется с их концентрацией в крови и степенью наркотического воздействия, время употребления наркотического вещества по концентрации в моче не может быть установлено.

5.6.6. Правила отбора проб на обнаружение наркотических средств, психотропных и других токсических веществ

Результаты исследования во многом зависят от точности соблюдения методики пробоотбора биологических объектов, условий хранения и транспортировки. На стадии пробоотбора в анализе наркотических веществ следует учитывать возможность уничтожения или фальсификации объекта; анализируемая проба может быть мала по массе, загрязнена и иметь химический состав, отличный от первоначального из-за воздействия окружающей среды при неправильном хранении.

Документальное оформление химико-токсикологических исследований. Основным документом “кабинета”, осуществляющего экспертизу опьянения, а также отбор биологических проб для химико-токсикологического исследования, является рабочий журнал кабинета экспертизы опьянения. Журнал является юридическим документом, будучи прошнурованным и опечатанным, заполняется и ведется по установленной форме. В журнале обязательно должны быть указаны ФИО больного, номер медицинской карты стационарного или амбулаторного больного или номер акта медицинского освидетельствования, дата и время исследования (начало и окончание исследования), а также все операции, проведенные с исследуемой пробой, на основании которых дается заключение о нахождении или отсутствии токсического вещества в исследуемой пробе. При количественном исследовании в журнале записывают показания приборов и объема исследуемых объектов.

На всех хроматограммах, спектрограммах и других документах должны быть проставлены ФИО больного, номер медицинской карты стационарного или амбулаторного больного или номер акта медицинского освидетельствования, дата и время исследования. Первичный документ без указанных атрибутов не может служить основанием для заключения о химико-токсикологическом исследовании.

В журнале регистрации химико-токсикологических исследований записывают результаты анализа на основании записей в рабочем журнале. При заполнении журнала регистрации химико-токсикологических исследований следует соблюдать общие правила ведения документации такого рода: записи производятся шариковой или перьевой ручкой; запрещаются записи карандашом, а также ручками с красными и зелеными чернилами; запрещается использование прочерков или кавычек в графах “Дата”, “Время”, “ФИО”, “Результат”, исключение составляет графа “Время” при исследовании одной и той же пробы на несколько групп веществ; в графе “Объект исследования” указывают количество взятого на исследование объекта и обязательно делают пометки в случаях нарушения правил отбора биологических проб; в графе “Метод и найденные величины” после указания метода записывают значения физико-химических параметров веществ; в графе “Результат“ записывают название обнаруженного (или необнаруженного) вещества или группы веществ (в соответствии с принятой номенклатурой), а также концентрации найденных веществ в единицах измерения “СИ”. Нумерация анализов сквозная независимо от числа журналов и начинается от 0 ч 00 мин 1 января и заканчивается в 24 ч 00 мин 31 декабря каждого года. За один номер (единицу исследования) принимают исследование на вещество или группу веществ, которые идентифицируются одним реактивом, прибором или методом. Результаты исследования на алкоголь записываются отдельным номером независимо от выявления в пробе других веществ; исправления в графах “Время”, “ФИО”, ”Результат” недопустимы, в случаях ошибочных записей текст аккуратно зачеркивается, скрепляется подписью исследовавшего и рядом вносится новая запись.

Результаты химико-токсикологического исследования оформляются актом, который выдается на руки или высылается почтой по запросу направившего учреждения, о чем делается соответствующая запись в журнале регистрации химико-токсикологических исследований. Акт подписывается лицами, проводившими исследование, и заверяется главным врачом. Копия акта хранится в лаборатории.

Сопроводительная документация: “Направление на химико-токсикологическое исследование” и “Справка о доставке проб на химико-токсикологическое исследование” заполняются по установленным формам и передаются в химико-токсикологическую лабораторию (ХТЛ) вместе с пробами.

Направление на химико-токсикологическое исследование остается в ХТЛ, является главным документом, на основании которого ХТЛ проводит химико-токсикологический анализ и выдает результаты о содержании или отсутствии алкоголя в пробе представителям органов здравоохранения. Направление на химико-токсикологическое исследование подписывается дежурным врачом и медсестрой (фельдшером), производившими отбор проб, и хранится в ХТЛ в течение двух месяцев.

Справка о доставке проб на химико-токсикологическое исследование выдается лицу, осуществляющему транспортировку образцов и документации в ХТЛ, и служит документом, удостоверяющим полномочия лица на доставку, а также содержит сведения об отправке и получении образца. Справка составляется в двух экземплярах, первый экземпляр остаётся в ХТЛ, второй экземпляр заверяется штампом ХТЛ и возвращается в “кабинет”.

В случае, когда ХТЛ и “кабинет” территориально располагаются в одном здании (одном больничном комплексе) лечебного учреждения, справка о доставке не заполняется.

Правила отбора жидких биосред

Моча. Процедура отбора пробы должна производиться в условиях, исключающих подмену или замену ее другими жидкостями. Проба мочи собирается в прозрачный стеклянный широкогорлый градуированный сосуд объемом 300-600 мл. Объем пробы должен быть не менее 200 мл.

После завершения процедур освидетельствуемый передает сосуд с пробой персоналу. Сосуд с пробой накрывается покровной пластиной (крышкой).

Предварительное исследование пробы включает:

– измерение температуры (не более, чем через 4 минуты после отбора пробы) стеклянным ртутным термометром;

– измерение величины рН с помощью универсальной индикаторной бумаги для определения рН мочи;

– визуальное наблюдение (цвет, мутность и т.п .).

Температура должна находиться в пределах 32,5-37,7оС, рН мочи в норме должен быть в интервале 4-8 ед. рН, визуально проба должна выглядеть естественно.

Если результаты предварительного исследования вызывают подозрение в фальсификации, персонал обязан провести повторную процедуру отбора пробы в условиях, исключающих фальсификацию.

Отобранную пробу мочи разливают в два стеклянных или пластмассовых герметично закрывающихся сосуда емкостью 100-150 мл каждый.

Кровь отбирается при строгом соблюдении асептических условий из поверхностной вены через иглу самотеком в сухой пенициллиновый флакон, содержащий раствор гепарина (3-5 капель на каждые 10 мл крови). Флакон тотчас же закрывают стандартной резиновой пробкой, фиксируют пробку, содержимое флакона сразу же перемешивают. Для химико-токсикологического исследования необходимо не менее 10 мл крови, для исследования только на наличие алкоголя достаточно 2-3 мл крови.

Слюна отбирается в стерильный сухой флакон из-под пенициллина в количестве 5 мл и тут же закрывается пробкой.

У всех флаконов с отобранными пробами (мочи, слюны или крови) фиксируют пробки алюминиевыми колпачками с помощью приспособления для обжима колпачков, обеспечивающего герметизацию флакона, и ставят их в холодильник. В случае герметизации другим способом флаконы должны быть опечатаны. На каждый флакон наклеивается этикетка с указанием номера пробы (по регистрационной книге), даты, времени забора пробы, фамилии освидетельствуемого, фамилии медицинского работника, подготовившего пробу.

Исследование на наличие алкоголя проводится в течение 1 часа после получения биологических проб. Допускается хранение пробы при условии асептического отбора в холодильнике при температуре 0+2оС не более суток. При длительном хранении биосред с нарушением температурного режима в них развиваются бродильные и гнилостные процессы, которые могут существенно исказить результаты количественного определения. Данные об отборе биологической пробы заносятся в журнал регистрации анализов и их результатов. При этом указываются: порядковый номер, дата и время взятия мочи, крови или слюны; фамилия, имя, отчество обследуемого, год рождения, пол; фамилия, имя, отчество врача, производившего взятие пробы крови (откуда взята кровь и способ обработки кожи), количество взятых биосред, дата и время передачи биосред на анализ, дата проведения исследования, результаты исследования.

Флаконы, пробирки, предназначенные для взятия крови и мочи, моются 2% раствором соды, ополаскиваются дистиллированной водой и стерилизуются обычным способом.

Правила отбора волос, ногтей и потожировых выделений для химико-токсикологического исследования на наличие наркотических средств и психотропных веществ

Волосы отбирают отдельно с лобной, теменной, затылочной, правой и левой височных областей волосистой части головы в виде пучка в количестве не менее 15-20 волос, которые обрезаются у корня ножницами как можно ближе к коже. При необходимости отбирают образцы волос с других волосистых участков тела. Отобранные образцы волос помещают каждый в отдельный конверт с соответствующей надписью, который затем опечатывают. Все полученные конверты с образцами помещают в один общий конверт, который опечатывают.

Ногти отбирают отдельно с каждой руки или, при необходимости, с каждой ноги. Ногти обрезаются ножницами по возможности ближе к коже. Отобранные образцы ногтей с каждой руки или ноги помещают в отдельный конверт с соответствующей надписью, который затем опечатывают. Все полученные конверты с образцами помещают в один общий конверт, который также опечатывают.

Отбор образцов потожировых выделений на руках и других участках тела производится ватным тампоном, смоченным этиловым спиртом. Вес тампона должен составлять 400-500 мг при расходе этанола до 1 мл.

Данным тампоном тщательно протираются поверхности рук и лица (главным образом вокруг рта), после чего тампон высушивается на воздухе. Во избежание взаимопередачи исследуемых веществ с одного тампона на другой, каждый из них упаковывают в отдельный полимерный пакет, имеющий соответствующую маркировку. Все полученные пакеты с образцами помещают в один общий конверт, который опечатывают.

Подготовка образцов и документов к транспортировке в ХТЛ. Для отправки биопроб в ХТЛ готовятся два сосуда, в которых находится проба биожидкости одного освидетельствуемого. Первый – “образец” – предназначен для анализа, второй – “контрольный образец” – по прибытии в ХТЛ помещается на хранение без нарушения упаковки и используется для повторного анализа пробы в случае необходимости: при повторной экспертизе, по требованию правоохранительных органов, при необходимости использования более совершенных методов анализа и связанной с этим необходимости отправки контрольного образца в другую ХТЛ и т.д.

Для маркировки сосудов готовят два “ярлыка”. Надпись на ярлыке содержит шестизначный код обследуемого (для кодирования используется произвольный ряд чисел от 0 до 9, например: 008745 и т.д.), дату и код данного пункта (по общей системе кодирования “кабинета” и ХТЛ наркологических диспансеров и больниц). При этом ярлык контрольного образца содержит букву “К” после шестизначного кода, а также подпись освидетельствуемого на оборотной стороне. Заполненные ярлыки должны лежать надписью вниз, когда освидетельствуемый приглашается поставить подпись на одном из них (контрольном). Освидетельствуемый не должен видеть своего кода.

Рекомендуется, чтобы заполнение ярлыков проводилось лицом, ответственным за ведение рабочего журнала “кабинета”. Во избежание путаницы оборотная сторона ярлыка контрольного образца отмечается каким-либо образом, например, цветным карандашом.

Ярлык крепится к сосуду с помощью клейкой ленты так, чтобы лента проходила через дно, боковую поверхность и головку сосуда, а надпись располагалась на стенке. Место соединения концов ленты на головке сосуда заливается сургучом, на нем делается оттиск штампа “кабинета”. Допускается использование современных надежных средств для опечатывания.

В случае, если обследуемый не согласен с правильностью произведенного отбора пробы персоналом “кабинета”, он может:

– оставить запись в рабочем журнале;

– потребовать повторного взятия пробы (безотлагательно);

– сделать заявление в вышестоящие органы.

Транспортировка образцов и документов. Транспортировку образцов проб с направлениями на химико-токсикологическое исследование осуществляет лицо, на имя которого составлена справка о доставке. ХТЛ незамедлительно уведомляется об отправке проб и документации использованием телефона, телефакса или телеграфа.

Независимо от степени удаленности образцы рекомендуется транспортировать в контейнере ящике, в который вмещается достаточное количество образцов. Каждый контейнер маркируется номером и кодовым обозначением “кабинета”. После упаковки образцов контейнер закрывается крышкой, запирается и заклеивается бумажной лентой. Лента располагается таким образом, чтобы было невозможно вскрыть контейнер без нарушения ее целостности. Перевозка образцов в жаркое время года производится в сумках-холодильниках.

Передача образцов и документов в ХТЛ. В лабораторию пробы мочи, крови и слюны передаются с направлением, в котором указаны порядковый номер пробы (по регистрационной книге), наименование, количество, дата и время взятия биосред, условия хранения, цель анализа, Ф.И.О. направившего врача, адрес направившего учреждения.

При получении образцов проб в ХТЛ производят наружный осмотр целостности упаковки. Доставленные образцы проб вскрывает заведующий ХТЛ или ответственное лицо. Проверяется наружная упаковка образцов и соответствие записей на ярлыках. Распакованные образцы проб передают персоналу ХТЛ для анализа. Все сведения по приемке образцов регистрируются в журнале регистрации результатов химико-токсикологических исследований ХТЛ.

Контрольные образцы ставят на хранение в запираемые и опечатываемые холодильные шкафы (при температуре – 18оС) для возможных контрольных исследований в течение 2-х месяцев со дня поступления в ХТЛ. Если в течение этого срока отсутствовала необходимость в повторном химико-токсикологическом исследовании, то по истечении двух месяцев образец уничтожают.

При пробах небиологического происхождения (растительное сырье, порошки, таблетки, экстракты и др.) навеска для анализа отбирается произвольно, если она только не оговорена методикой и не ограничена малым объемом образца. Самая малая проба должна быть проанализирована самыми чувствительными методами. Критерием выбора метода в данном случае является предел обнаружения вещества. Образцы небиологического происхождения, как правило, изымаются в процессе оперативно-следственных мероприятий и являются вещественными доказательствами.

Осмотр объектов исследования и определение некоторых свойств

При осмотре объектов исследования отмечают внешний вид, цвет и запах доставленных образцов.

При подготовке пробы к анализу следует обращать внимание на внешний вид доставленных биообъектов, который может служить важной подсказкой при проведении анализа, например, изменение цвета содержимого желудка может быть связано с отравлением такими веществами, как:

перманганат калия – пурпурный или розовый цвет;

соли меди – зеленый или голубой;

соли никеля-зеленый;

соли кобальта – розовый;

кислоты азотная, пикриновая – желтый;

кислоты серная, соляная, щавелевая – цвет кофейной гущи.

При осмотре мочи также отмечают необычный цвет и запах, которые наблюдаются при отравлениями следующими препаратами:

красно-коричневый цвет имеет моча при отравлении производными пиразола, фенотиазина, ферроцероном, рифадином; зелено-синий – фенолом, метиленовой синью; желтый – фенацетином, витаминами, производными нитрофурана, пикриновой кислотой.

Запах фиалок наблюдается при отравлении скипидаром. Запах ацетона – при отравлении изопропиловым спиртом, ацетоном, у больных диабетом.

Цвет препарата также может быть подсказкой при его идентификации.

Желтые препараты: производные нитрофурана, невиграмон, нифедипин, нитазол, но-шпа (дротаверин), нистатин, меркаптопурин, пиразидол, тетрациклиновые антибиотики, тавегил, леворин, клозапин (лепонекс, котарнин, курантил, риванол, пикриновая кислота, калия бихромат, фурацилин.

Желто-оранжевые препараты: витамин В2, фолиевая кислота.

3еленые: рутин, бриллиантовая зелень.

Розовый: витамин В12, розоватый – манинил.

Красные: пирвиниум памоат, рубомицин.

Красно-коричневые: рифадин, ферроцерон.

Темно-фиолетовый – калия перманганат.

Черно-коричневый – йод.

Необходимо отметить, что кроме лекарственных веществ в некоторые лекарственные формы входят вспомогательные вещества, консерванты, стабилизаторы, которые бывают добавлены в значительных количествах. Они могут извлекаться из биологического материала и при оценке результатов анализа приводить к ошибочным заключениям. Например, в таблетки могут входить гипс, фосфаты, тальк, желатин, агар, коллоидные салицилаты, маннитол и др.

Запах. Солод, ментол, метилсалицилат, камфора, ксероформ, некоторые витамины, формалин, бензин, керосин, ароматические и хлорированные углеводороды, эфиры этиленгликоля обладают специфическим запахом.

Фенолы, креозот имеют фенольный запах; ацетон, хлороформ – сладковатый; алифатические спирты и их эфиры – спиртовой, фруктовый запах. “Раздражающий ”запах характерен для азотной, соляной, хлорной, уксусной, трихлоруксусной, муравьиной кислот; чесночный запах – для фосфора, теллура, мышьяка.

5.6.8. Характеристика биологических объектов. Пробоподготовка

На стадии пробоподготовки образец очищается от примесей и загрязнений, которые не следует отбрасывать, так как они могут быть источником дополнительной информации. Пробоподготовка – стадия риска потерять анализируемое вещество и объект. Поэтому все предпринимаемые действия должны быть логически оправданы и направлены на сохранение образцов, отобранных для анализа, для дальнейшего исследования.

Моча – наиболее распространенный объект исследования на лекарственные токсичные соединения и наиболее простой биообъект для анализа вследствие низкого содержания белковых компонентов.

Важным показателем мочи как биообьекта является рН, поэтому работа с ней требует постоянного внимания к изменению рН. Величина рН мочи повышается со временем из-за действия бактериальной флоры, выделяющей аммиак. Такое увеличение можно предотвратить путем хранения ее при пониженных температурах (при анализе очень лабильных веществ – в замороженном виде). Необходимо учитывать также, что при хранении мочи в холодильнике в ней происходит новообразование этанола до концентрации 0,5 ‰. При сахарном диабете новообразование этанола в моче, хранящейся в холодильнике, доходит до 1,1‰. Вместе с тем следует помнить, что при большом объеме воздушного слоя во флаконе над кровью или мочой происходит окисление алкоголя и снижение его содержания в объекте.

Действие бактериальной флоры можно замедлить добавлением натрия фторида, кислоты борной и других бактериостатических препаратов, однако надо учитывать их дальнейшее участие в экстракции и образовании фона. Мочу можно лиофилизировать, предварительно переведя летучие соединения в соответствующие соли.

При анализе мочи и других биологических объектов на содержание одурманивающих веществ необходимо обращать внимание на потенциальные фоновые соединения как эндогенного, так и экзогенного характера, присутствие которых в анализируемом образце неизбежно при любом способе пробоподготовки.

Из потенциальных эндогенных соединений необходимо отметить присутствие низкомолекулярных продуктов метаболизма аминокислот и сахаров (амины, мочевина, карбоновые кислоты, соли карбоновых кислот и др.), небольших количеств пептидов и сахаров (в норме), стероидов, пигмента уробилина, окрашивающего мочу в желтый цвет и других веществ.

К фоновым экзогенным соединениям относятся продукты биотрансформации веществ, поступивших с пищей, и различных лекарственных веществ, используемых наркоманами для усиления наркотического эффекта, снятия синдрома абстиненции, смягчения “выхода” из состояния наркотического опьянения (барбитураты, производные 1,4-бензодиазепина), а также метаболиты других химических веществ, попавших в организм (красители, антиоксиданты, продукты табакокурения и т.д.).

На содержание эндогенных и экзогенных компонентов в пробе влияют: 1) возраст, пол и вес человека, определяющие во многом распределение яда и его метаболизм; 2) параллельное присутствие других экзогенных химических веществ (лекарственные средства, кофеин, табак, алкоголь и др.), изменяющих фармакокинетические и фармакодинамические параметры яда; 3) диета – свободные жирные кислоты связываются с альбуминами и конкурируют на этапе связывания яда с белком; 4) генетический фактор – отдельные индивидуумы обладают повышенной толерантностью к действию некоторых химических агентов; если для одних доза введенного яда является смертельной, то для других эта же доза относительно безвредна (или не вызывает летального исхода); 5) другие факторы, действие которых необходимо предусматривать, болезнь (может дать повышенный фон некоторых эндогенных соединений), работа с соединениями бытовой или индустриальной химии (повышенный фон эндо- и экзогенных веществ).

Пробоподготовка мочи может состоять из различных операций: прямое концентрирование (упаривание некоторого количества мочи до небольшого объёма на водяной бане либо роторном испарителе), экстракция растворителями, лиофилизация, хроматографическое разделение или сорбция на твердом сорбенте или комбинация различных операций (концентрирование – экстракция, лиофилизация – экстракция и др.).

Кровь. Уровень токсических веществ и их метаболитов у живых объектов и в крови трупа неодинаков вследствие биохимических изменений. Содержание токсического вещества в артериальной или венозной крови также будет различным. Даже положение тела у живого пациента – стоя, сидя или лежа – влияет на биохимический состав пробы, так как в этом случае меняется содержание белков в крови, что особенно важно для токсических веществ, в значительной степени связывающихся с белками.

Обработке экстракцией может быть подвергнута цельная кровь, плазма или сыворотка. Если для предотвращения свертывания крови использовались антикоагулянты, то необходимо учитывать, что гепарин вытесняет жирные кислоты из мест их связывания с альбумином. Это влияет, с одной стороны, на увеличение связывания токсических веществ с белками, с другой – на переход жирных кислот в органический растворитель при экстракции. Для уменьшения энзиматической активности кровь рекомендуется хранить в холодильнике в замороженном виде. Поскольку стеклянные стенки посуды содержат большое количество свободных гидроксильных групп, возможно связывание полярных токсических соединений стенками посуды за счет образования водородной связи. Это явление особенно важно учитывать при анализе следовых количеств вещества. Предварительное силилирование стенок посуды позволяет свести это явление к минимуму. Альтернативой является использование посуды из полипропилена или тефлона, хотя при этом необходимо считаться с загрязнением пробы мономерами смолы.

Из эндогенных соединений помимо жирных кислот в экстрактах из крови встречаются различные стероидные гормоны (тестостерон и др.), холестерин, которые в крови находятся в связанном состоянии с протеинами плазмы. При хранении крови более суток при комнатной температуре происходит новообразование алкоголя, достигая концентрации 1 ‰.

Слюна является продуктом секреции желез ротовой полости. Отобранную пробу центрифугируют и для хранения замораживают, чтобы замедлить активность ферментов. Хранить лучше всего слюну в склянках из тефлона или полипропилена, чтобы избежать поглощения следовых количеств анализируемого вещества стенками стеклянной посуды. Установлено, что неионизированные формы токсического вещества, находящиеся в водном растворе плазмы, пассивно диффундируют в слюну, так что существует прямая зависимость между концентрацией анализируемого вещества в слюне и его концентрацией в крови.

Волосы представляют относительно гомогенный (с точки зрения агрегатного состояния) биологический субстрат. Являясь легкодоступным для отбора, они представляют значительный интерес в качестве объекта при проведении химико-токсикологического анализа как на неорганические, так и на органические вещества. При анализе волос наркотики могут быть обнаружены в отдаленные сроки после окончания их приема и в тех случаях, когда анализ биожидкостей дает отрицательный результат. Использование волос в качестве объекта исследования позволяет проследить динамику поступления наркотического вещества в организм человека. Анализ волос длиной 6-8 см (6-8 месяцев) позволяет судить о степени наркотической зависимости.

По сравнению с биожидкостями, исследование твердых кожных образований имеет целый ряд отличительных особенностей, которые накладывают отпечаток на все этапы проведения работ. Исследование волос включает в себя две принципиально важные с точки зрения интерпретации результатов стадии: предварительное исследование поверхности волос на присутствие анализируемых веществ и проведение очистки указанной поверхности от мешающих дальнейшему исследованию веществ с обязательной проверкой эффективности данной операции. К основным методам разрушения волос относятся следующие: экстракция органическими растворителями; кислотный или щелочной гидролиз; энзиматическое разрушение; экстракция органическими растворителями при сверхкритических условиях; термическое разложение объектов.

Желчь является продуктом секреторной деятельности печени, желчного пузыря и двенадцатиперстной кишки. Эта жидкость содержит большое количество воды, эндогенных веществ, подобных тем, которые находятся в крови, плазме и сыворотке, а также желчные кислоты и пигменты. Желчь различается по величине рН (в пределах 6,7-8,3), что заставляет контролировать рН в ходе подготовки к экстракции, а при необходимости использовать подходящий буфер. Рекомендуется пробу также центрифугировать при низких скоростях (для удаления холестерина) и осадить белки добавлением смеси хлороформ – метанол (2:1) или хлороформ – изопропанол (9:2).

Печень представляет собой центральный орган химического гомеостаза. В печени находится большое разнообразие экзогенных и эндогенных веществ: продукты белкового, углеводного, жирового обменов, продукты биотрансформации экзогенных, в том числе токсических веществ. С точки зрения присутствия эндогенных и экзогенных веществ в экстракте из печени этот объект является самым неудобным вследствие их большого разнообразия. Даже самая длительная и многоэтапная экстракция, например, кислых лекарственных средств дает в хлороформном экстракте до восьми разнообразных эндогенных соединений.

5.6.9. Особенности исследования мочи на присутствие наркотиков

Результаты исследования биологических жидкостей в значительной степени зависят от возможности манипулирования этими образцами как подозреваемыми, так и людьми, участвующими на разных этапах данного действия. Под этим подразумевается разбавление, подмена его на «чистый» от наркотиков образец или добавление в него веществ, препятствующих правильной интерпретации получаемых результатов. На сегодняшний момент любой человек, задавшийся целью скрыть факт пристрастия к наркотикам, может получить исчерпывающую информацию о том что, когда, где, во сколько это ему обойдется и прочее. Источником этой информации является Интернет или большое количество изданий, посвященных этому вопросу. Все вышесказанное выводит на первое место с точки зрения получения адекватной информации о проверяемом лице вопросы организации аналитической службы, начиная от отбора образцов, их упаковки, транспортировки и проведения предварительных и подтверждающих исследований. При этом следует учитывать, что достаточно незначительного послабления режима, со злым умыслом или без такового, на любом из этапов, что бы исказить получаемые результаты.

Подмена образца

Наиболее часто для фальсификации результатов исследования используется подмена образца мочи другим образцом, взятым от не употреблявшего наркотики человека, например, родителей, братьев или сестер, родственников, друзей или домашних животных. Однако такой способ подмены не лишен опасности замены одного образца на другой, содержащий наркотик.

Другим подходом является использование синтетической или «контрольной» мочи, образцы которых можно заказать через Интернет или у большого числа крупных компаний, производящих биохимические и клинические реактивы.

На практике часто встречаются случаи подмены образцов мочи другими жидкостями, обладающими схожими цветом и консистенцией. Обычно для этого используют разбавленные водой соки, газированные напитки, чай, пиво, солевые растворы.

Простейшим способом проверки образцов на факт подмены является измерение их температуры, определение цвета, мутности и рН среды в момент изъятия. Температура мочи в момент изъятия должна быть в пределах от 32 до 38ºС.

Сокрытие фальсификации образцов мочи встречает довольно часто и заключается в механическом их нагреве при использовании различных нагревательных устройств: микроволновых печей, двигателя автомобиля, электрических плиток, ламп и других приборов, спичек и сигарет, рук, наконец. Фальсификаторы доходят до использования собственного тела в качестве контейнера для хранения образцов. Для этого они применяют пластиковые контейнеры или презервативы с фальсифицированными образцами, которые помещают в промежность, прямую кишку, подмышкой или закрепляют на одежде. Особенно «продвинутые» – с помощью катетера вводят жидкость в мочевой пузырь.

Приведенные выше ухищрения требуют включения в процедуру отбора образцов исследования визуальный контроль или, как это принято в развитых странах, документирование этого этапа на кино-фотопленку.

Разбавление образца

Разбавление образца – часто используемый подход для фальсификации результатов исследования мочи. Его использование приводит к уменьшению концентрации анализируемых веществ, в лучшем случае, ниже предела определения используемого предварительного метода исследования. Для получения указанных результатов применяют:

- употребление большого количества воды;

- применение доступных в свободной продаже лекарственных препаратов - диуретиков (бензотиадиазины, циклические диуретики, вещества, влияющие на обмен калия, осмотические диуретики, ингибиторы карбоангидразы и др.);

- использование немедицинских веществ для увеличения диуреза (алкогольные напитки, аммония хлорид, кофеин и вещества его содержащие, зеленый и черный или зеленый чай, парабром, различные растительные настои и отвары);

-простое разбавление водой.

Для выявления потенциально разбавленных таким образом образцов схема проведения исследований обязательно должна предусматривать тестирование образцов на креатин и креатинин, а также определение удельной плотности образца.

Применение (in vivo) препаратов, влияющих на результаты исследования

Присутствие наркотика или его метаболитов в организме человека может быть сокрыто употреблением различных лекарственных препаратов или пищевых продуктов. Наиболее известны из них «золотой корень» и его аналоги, распространяемые в виде чая, капсул или шариков. Все эти товары свободно распространяются через магазины «здоровой пищи» или Интернет под названиями «Eliminator», «HealthTech Pre-Cleanse Formula»,

«Naturally Klean Herbal Tea», «Test Free» и другими.

Данные продукты содержат в своем составе комплексы углеводов и/или растительные экстракты и, обычно, требуют употребления большого количества воды. Для маскировки разбавления мочи в состав таких «лекарств» добавляют комплекс витаминов группы-В, креатин и креатинин. Стоимость одной дозы снадобья составляет 20 – 30 долларов США. Некоторые фирмы рекламируют свою продукцию 200% гарантией её эффективности.

Прием избранных лекарственных препаратов приводит к изменению динамики выделения наркотиков с мочой, что, соответственно, оказывает влияние на получаемые результаты. Например, употребление больших количеств аскорбиновой кислоты или гиппуровой кислоты (кислые фруктовые напитки) уменьшает рН мочи, что резко уменьшает количество выделяемых в мочу наркотиков слабощелочного характера (амфетамины, фенциклидин). Соответственно, подщелачивание мочи, например, приемом больших количеств соды, приводит к снижению концентрации в моче барбитуратов и других слабокислых наркотиков.

Многие лекарственные средства или их метаболиты в моче могут коренным образом затруднять проведение исследований наркотиков теми или другими методами. Например, употребление ацетилсалициловой кислоты может приводить к ложно-положительным результатам исследования большого числа наркотиков при использовании иммуноферментными методами. Аналогично, ибупрофен воздействует на результаты исследования ТГК-кислоты и опиатов методом хромато масс - спектрометрии.

Применение препаратов для фальсификации результатов исследования (in vitro)

Внесение в мочу посторонних веществ - широко распространенный способ фальсификации результатов предварительного исследования мочи. Вещества вносятся с расчетом изменения рН и/или ионной силы мочи, её химического состава, подавления иммунных свойств объекта, разрушения или уменьшения концентрации определяемых веществ.

Все применяемые таким образом вещества делятся на две основные группы: препараты бытовой химии (аммиак, органические растворители, бензин, керосин, сода, соль, жидкое мыло, шампунь, перекись водорода, соки, ванилин и прочее) и специально для этого производимые продукты, которые свободно можно заказать по большинству каталогов или через Интернет. Получаемые результаты фальсификации непредсказуемы из-за многочисленных влияющих на них факторов и могут быть как ложноположительными, так и ложноотрицательными. Однако эффективность таких действий особенно видна в случае применения на предварительном этапе исследования мочи иммунных методов.

За последнее время ассортимент товаров, которые могут быть использованы для фальсификации результатов анализов, значительно пополнился. Например, шампунь для удаления остатков наркотиков из волос. Стоимость его составляет 35 долларов США. Этот шампунь может быть заказан через Интернет.

Таким образом, из приведенных выше материалов видна одна из основных специфических особенностей проведения исследований биологических объектов на присутствие в них наркотиков, которая заключается в высокой вероятности предоставления на исследование умышленно фальсифицированных, разбавленных или химически модифицированных образцов с целью искажения информации о проверяемом человеке. Это приводит к усложнению и без того непростой задачи обнаружения незначительных количеств вещества, а чаще всего, продуктов его метаболизма в сложной биологической матрице. Каким бы современным и дорогостоящим оборудованием не была оснащена лаборатория, проводящая исследования, результаты его будут заведомо ложны, если моча проверяемого лица в момент её изъятия была заменена мочой домашнего животного или обработана сильным окислителем, например, перекисью водорода.

Решением указанной проблемы является организация строго формализованного и хорошо отработанного в деталях протокола, включающего полную схему осуществления проверки биологических объектов на наркотики, начиная, с методики отбора образцов, их упаковки, транспортировки, приема на исследование и, заканчивая, организацией проведения самих исследований. Только жесткая схема контроля над движением образца и всеми операциями с ним позволяет получать соответствующие действительности результаты.

5.6.10. Экстракция как метод изолирования наркотических и одурманивающих средств. Основные понятия экстракции

В химико-токсикологическом анализе метод экстракции широко используется для изолирования токсических веществ из объектов биологического происхождения, для очистки вытяжек из биологического материала от примесей, для выделения токсических веществ из предварительно очищенных вытяжек, для концентрирования исследуемых веществ, находящихся в сильноразбавленных растворах.

Экстракция – процесс извлечения растворителям и соответствующих веществ из различных объектов. Объекты, из которых извлекают соответствующие соединения, могут быть твердыми веществами или жидкостями. Поэтому процессы изолирования подразделяют на экстракцию в системе твердое тело – жидкость (твердо-жидкостная экстракция) и на экстракцию в системе жидкость-жидкость (жидкостная экстракция).

Экстрагент – органический растворитель, в индивидуальном состоянии или содержащий какие-либо реагенты, извлекающий (экстрагирующий) данное вещество из водной фазы.

В химико-токсикологическом анализе метод твердофазной экстракции применяется для изолирования исследуемых веществ из органов трупов, растений, почвы и других объектов. При экстракции веществ в системе твердое тело–жидкость в качестве экстрагентов применяют органические растворители. Для данной системы в ряде случаев используют выщелачивание.

Выщелачивание – извлечение компонентов из твердых тел с помощью воды.

Жидкостная экстракция – процесс распределения растворенного вещества между двумя несмешивающимися жидкими фазами, одной из которых в большинстве случаев является вода, а второй – несмешивающийся с водой органический растворитель.

Экстракционный реагент – составная часть экстрагента, взаимодействующая с извлекаемым веществом с образованием экстрагирующегося соединения.

Экстракт – отделенная жидкая органическая фаза, содержащая экстрагированное из водной фазы вещество.

Реэкстракция – процесс обратного извлечения вещества из экстракта в водную фазу.

Реэкстрагент – раствор реагента, используемый для извлечения вещества из экстракта.

Реэкстракт - отделенная водная фаза, содержащая вещество, извлеченное из экстракта.

Вам также может быть полезна лекция "Воспаление".

Разбавитель – относительно инертный органический растворитель, прибавляемый к экстрагенту для улучшения его физических или экстракционных свойств.

Промывка – процесс частичного или полного удаления примесей из экстракта или реэкстракта.

Периодическая экстракция – экстракция вещества из одной и той же фазы, проводимая отдельными порциями экстрагента.

Непрерывная экстракция – экстракция, проводимая при непрерывном перемешивании одной жидкой фазы (другая жидкая фаза остается неподвижной).

Противоточная экстракция – экстракция, осуществляемая при встречном движении обеих фаз.

Основы метода экстракции – см. ниже в соответствующем разделе