Автореферат (Блокаторы медленных кальциевых каналов новые возможности использования в качестве регуляторов образования соединительной ткани), страница 9

Проведение исследований по экспрессии транскрипционных факторов в первичнойкультуре перитонеальных фибробластов крыс и в перевиваемой культуре дермальныхфибробластовчеловекаподтвердилонаибольшуюфармакологическуюэффективностьверапамила.При исследовании верапамила в качестве противоспаечного средства in vivo на разныхвидах животных была определена максимальная переносимая доза для внутрибрюшинноговведения, не вызывавшая значимых и достоверных изменений кардио- и гемодинамики,которая составила 0,1 мг/кг массы тела. На целостном организме крыс и кроликов34подтверждено выявленное в экспериментах in vitro нормализующее действие верапамила начрезмернуюактивностьфибробластовимакрофагов,темпысинтезаоксипролина,гиалуроновой кислоты, цитокинов, на интенсивность процессов спайкообразования.Выраженная антианаболическая и антипролиферативная активность классическогонедигидропиридиновогоБМККверапамила,однотипностьвлиянияпрепаратанамолекулярные механизмы активации перитонеальных и дермальных фибробластов позволилииспользовать именно его в качестве средства регуляции функции фибробластов приформировании патологических рубцов кожи и послужили основанием для разработкитрансдермальной лекарственной формы, содержащей верапамил – антирубцового крема (патент2290919РФ).исследованийНабылоснованииосуществленрезультатоввыбортехнологическихоптимальнойибиофармацевтическихконцентрацииверапамилаипредпочтительной основы крема, проведена оценка антирубцового крема в качестве средствапредупреждения избыточного кожного фиброгенеза.При экспериментальном изучении динамики изменений в патологических рубцах кожикрыс установлена эффективность крема, проявлявшаясяформированием физиологическогорубца, уменьшением площади рубцовой поверхности, изменением цвета рубца, исчезновениемболевых ощущений.

Доказан факт более раннего структурного созревания рубца кожи безгипертрофии. Верапамил усиливал репаративные процессы, укорачивал все фазы воспаления,блокировал гипертрофию и, в результате, приводил к преимущественному формированиюфизиологических рубцов.Можноконстатировать,чтопроделаннаяработапозволилаустановитьфармакодинамические закономерности и особенности действия различных групп БМКК порегуляции образования соединительной ткани при спайко- и рубцовообразовании и обосноватьновые возможности использования БМКК верапамила для предотвращения образования спаекв брюшной полости и формирования патологических кожных рубцов. Создание новойлекарственной формы, содержащей верапамил - антирубцового крема и подтверждение егоэффективности и безопасности явилось логичным завершением работы.ВЫВОДЫ1.Разработанная модель перитонеального спайкообразования (патент 2260854 РФ)является адекватной и универсальной, поскольку получены функциональные иморфологические эквиваленты спаечного процесса, воспроизводимость модели наразных видах животных с идентичностью распространенности, локализации спаек, ихморфологических характеристик.352.Моделированиегемоперитонеумавызываетповышение(всреднем6-кратное)пролиферации фибробластов и активности ядерного фактора транскрипции NF-κB,приводящей к блокаде процессов апоптоза, усиление темпов синтеза компонентовмежклеточногоматрикса-коллагенаигиалуроновойкислоты,увеличениефункциональной активности макрофагов, синтеза провоспалительных цитокинов TNF-и IL-1.

Выявлена корреляционная связь интенсивности процесса спайкообразования ианаболизма соединительной ткани, уровней TNF-, IL-1.3.Вкультуреактивированныхпригемоперитонеумеклетокдоказаноналичиедозозависимого антипролиферативного и антианаболического эффектов у БМККверапамила и дилтиазема. Верапамил обладает наиболее выраженным эффектом, снижаяв среднем в 1,6 – 2,3 раза чрезмерную митотическую активность фибробластов имакрофагов, избыточную продукцию оксипролинана и гиалуроновой кислоты, синтезTNF- иIL-1.

Эффекты дилтиазема даже в максимальной дозе менее значимы (всреднем на 35,5%), чему верапамила. У нифедипина изученный фармакологическийэффект не выявлен.4.Активация разных типов фибробластов - перитонеальных фибробластов крысы идермальных фибробластов человека - приводит к равнозначному (4,5 – 4,8-кратному)росту активных форм транскрипционного ядерного фактора.

Верапамил и дилтиаземингибируют NF-kB перитонеальных и дермальных фибробластов, и этот эффектдозозависим. Нифедипин не оказывает влияния на экспрессию NF-kB.5.Верапамил в дозе 0,1 мг/кг массы тела при внутрибрюшинном введении не обладаетхроно-, ино- и ангиотропным действием. Дозы верапамила 0,2 мг/кг и 0,4 мг/кг массытела животного оказывают кардио- и гемодинамические эффекты.6.Внутрибрюшинное введение верапамила крысам и кроликам в дозе 0,1 мг/кг массы телаоказывает выраженный ингибирующий эффект на процессы спайкообразования:тормозит чрезмерную активность фибробластов и макрофагов, уменьшает синтезоксипролина и гиалуроновой кислоты, провоспалительных цитокинов TNF- и IL-1.Установленывзаимосвязимежду числомперитонеальныхспаек,содержаниемоксипролина и гиалуроновой кислоты в перитонеальной жидкости крыс и кроликов,подвергшихся воздействию верапамила.7.Впервые сконструирована мягкая лекарственная форма для наружного применения антирубцовый крем, содержащий в качестве базового компонента верапамил (патент362290919 РФ).

Оптимизация состава крема обеспечивает стабильность при оптимальнойбиодоступности.8.Накожноеприменениеверапамилавсоставеоригинальногокремаявляетсябезболезненным и безопасным, проявляется ремоделированием патологическогокожного рубца с усилением репаративных процессов и более ранним структурнымсозреванием сосудисто-стромальных элементов без гипертрофии, формированиемфизиологического рубца, уменьшением площади рубцовой поверхности, улучшениемконсистенции и изменением цвета, размягчением и уплощением, исчезновениемболевых ощущений.9.Доказано наличие у БМКК верапамила нового вида фармакологической активности –предотвращения ростаизбыточной соединительной ткани. На молекулярном,клеточном, организменном уровнях подтверждена универсальность фармакологическойактивностиверапамилавотношенииперитонеальногоформирования патологических кожных рубцов.37спайкообразованияиСПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИНаучные работы, опубликованные в рецензируемых научных журналах,рекомендованных ВАК1.

Экспериментальная модель перитонеального спайкообразования / С. В. Скальский, Г. А.Шамрай, Т. И. Долгих, Б. А. Рейс, Т. Ф. Соколова, А. М. Кочетов, Т. В. Притыкина // Бюллетеньэкспериментальной биологии и медицины. – 2007. – Т. 144, № 10. – С. 473-475.2.

Скальский, С. В. Влияние верапамила на продукцию противовоспалительных цитокиновперитонеальными мононуклеарами / С. В. Скальский // Вестник РАМН. – 2010. – № 3. – С. 3335.3. Скальский, С. В. Блокаторы медленных кальциевых каналов как средства профилактикипослеоперационных перитонеальных спаек // Эндоскопическая хирургия. – 2011. – № 6. – С. 3840.4.

Скальский, С. В. Влияние верапамила на процесс перитонеального спайкообразования вэксперименте / С. В. Скальский // Медицина в Кузбассе. – 2012. – Т. 11, № 3. – С. 15-18.5. Скальский, С. В. Экспериментальное изучение верапамила как регулятора функцииперитонеальных фибробластов и клеток микроокружения / С. В. Скальский, Г.

А. Шамрай //Омский научный вестник. Сер. Ресурсы Земли. Человек. – 2012. – № 2 (114). – С. 72-75.6. Изменениекомпонентовмежклеточногоматриксасоединительнойтканиприэкспериментальном спаечном процессе брюшной полости на фоне действия верапамила / С. В.Скальский, Т.

Ф. Соколова, Д. А. Сычев, Е. В. Ананичева // Вестник ОмГАУ. – 2016. – № 2 (22). – С. 171-176.7. Скальский, С. В. Воздействие блокаторов медленных кальциевых каналов на перитонеальныеклетки при моделировании спаечного процесса в брюшной полости / С. В. Скальский, Т. Ф.Соколова, Д. А. Сычев // Биомедицина. – 2016. – № 3. – С. 11-17.8. Скальский, С. В. Фиброгенез как объект фармакологической регуляции: альтернативныевозможности блокаторов медленных кальциевых каналов / С. В. Скальский, Д.А. Сычев // Врач.– 2016.

– № 4. – С. 33-35.9. Скальский, С. В. Влияние блокаторов медленных кальциевых каналов верапамила и дилтеаземана интенсивность процессов пролиферации и апоптоза фибробластов в условиях гиперплазиисоединительной ткани при спайкообразовании / С. В. Скальский, Т. Ф. Соколова //Дальневосточный медицинский журнал. – 2017. – № 4. – С.77-80.10. Скальский, С. В. Угнетение фибробластов модифицирует интенсивность спайкообразованияпри асептическом воспалении брюшины кроликов / С. В. Скальский, Т.

Ф. Соколова, С. К.Зырянов // Успехи современной науки. – 2017. – Т. 5, № 1. – С. 153-159.3811. Соколова, Т. Ф. Оценка возможности применения блокаторов медленных кальциевых каналов,традиционно используемых в кардиологии для профилактики спайкообразования / Т. Ф.Соколова, С. В. Скальский, Н. Е. Турок // Казанский медицинский журнал. – 2017. – Т. 98, № 2.– С.

218-221.12. Фармакотехнологические исследования по разработке оптимального состава антирубцовогокрема с верапамилом / С. В. Скальский, М. А. Огай, Т. Ф. Соколова, Е. А. Лукша, А. И. Сливкин// Вестник ВГУ. Серия Химия, биология, фармация. – 2017. – № 2 – С. 128-132.13. Скальский, С. В. Функциональная активность перитонеальных фибробластов как объектизучения фармакодинамики блокаторов медленных кальциевых каналов / С.

В. Скальский, Т.Ф. Соколова, Д. А. Сычев // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 2017. – Т. 80,№ 7. – С. 32-36.14. Охлопков, В. А. Эффективность использования верапамил-содержащего крема при развитиипатологических (гипертрофических и келоидных) рубцов кожи / В. А. Охлопков, С. В.Скальский, Т. Ф.

Соколова // Вестник дерматологии и венерологии. – 2017. – № 4. – С. 38-43.15. Скальский, С. В. Влияние верапамила на формирование спаек при асептическом воспалениибрюшины (экспериментальное исследование) / С. В. Скальский, Т. Ф. Соколова, Н. Е. Турок //Бюллетень сибирской медицины. – 2017. – Т.