Автореферат (Роль функциональных показателей сперматозоидов отца в программах предимплантационного генетического скрининга эмбрионов), страница 4

et al., 2015]. В связи с вышесказанным,отдельно хотелось бы остановиться на синдроме Клайнфельтера, который был описан в 1942 г.Г. Клайнфельтером и Ф. Олбрайтом, и является одной из наиболее распространенныхгенетических причин мужского бесплодия и первичной тестикулярной недостаточности. Онхарактеризуется разнообразием цитогенетических вариантов и их мозаичных сочетаний[Мельниченко Г.

А. и др., 2007].Изменение числа хромосом, приводящее к синдрому Клайнфельтера, обусловлено ихнерасхождением при мейозе или при митотическом делении на ранней стадии развитияэмбриона [Linden M. et al., 1995]. Согласно литературным данным, до 60% мейотическихнарушений приходится на материнские гаметы и ассоциировано с возрастом. Но также естьисследования, показавшие, что сперматозоиды мужчин с олигоастенозооспермией несут в 100раз больше дисомий по половым хромосомам по сравнению с образцами, характеризующимисянормозооспермией [Kirkpatrick G.

et al., 2008].Полученные нами результаты представлены в таблице 7.Таблица 7. Встречаемость синдрома Клайнфельтера у эмбрионов исследованных парОбщая группа исследуемых парДолясперматозоидовс менее 4%4% или болеенормальной морфологиейВстречаемостьсиндрома 7,23,49Клайнфельтера, %Группа репродуктивного возрастаДолясперматозоидовс менее 4%нормальной морфологиейВстречаемостьсиндрома 10,82Клайнфельтера, %p t-тест0,04364% или более2,61p t-тест0,0228Как видно из представленной таблицы, встречаемость синдрома Клайнфельтера уэмбрионов значимо повышается при уменьшении содержания в эякуляте сперматозоидов снормальной морфологией. Согласно данным Gianaroli L.et al.

(2005) дисомии по половымхромосомам являются наиболее часто встречающимися анеуплоидиями в сперме бесплодныхмужчин. Kirkpatrick et al. (2008) показали 100-кратно большее количество XY дисомий вслучаях олигоастенотератозооспермии по сравнению с нормозооспермией. Также следует17отметить, что по литературным данным, отцовский вклад значим не только для возникновенияанеуплоидий, но и полиплоидий в связи с высокой частотой диплоидности сперматозоидовбесплодных пациентов [Benkhalifa M. et al., 1993; Munné S.

et al., 1998; Pang M.G. et al., 1999;Ushijima C. et al., 2000; Shi Q. et al., 2001; Kahraman S. et al., 2006; Çankaya T. et al., 2011; Zhu Y.et al., 2013].В отличие от многих других анеуплоидий, синдром Клайнфельтера не ассоциирован сповышенным риском выкидыша и не является летальным фактором [Nieschlag E. et al., 2014].На данный момент возможно использование методики предимплантационного генетическогоскрининга (ПГС) для выбора эмбрионов с нормальным набором хромосом. Если у мужчинывыявляются отклонения в морфологии сперматозоидов, целесообразно использовать программуПГС для снижения риска рождения ребенка с синдромом Клайнфельтера и трисомиями поаутосомам.Таким образом, для оплодотворения необходим строгий отбор сперматозоидов поморфологическимпоказателям.(усовершенствованнаятехнологияДаннаяИКСИ,технология,основаннаяполучившаянаназваниемикроинъекцииИМСИтщательноотобранного морфологически нормального сперматозоида в цитоплазму яйцеклетки), ужеприменяется в мировой клинической практике.

Согласно литературным данным, использованиеметода ИМСИ снижает частоту анеуплоидий по половым хромосомам и уменьшает рискполучения эмбрионов с хаотичным набором хромосом [Setti A.S. et al., 2014].4.Фрагментация ДНК ядра сперматозоидовВ последние годы значительный интерес вызывает исследование фрагментации ядернойДНК сперматозоидов при мужском факторе бесплодия.

Уровень фрагментации ДНКопределяется методом TUNEL. Установлено, что пациенты, у которых обнаруживают более15% TUNEL-позитивных сперматозоидов, имеют сниженную результативность ЭКО, и уровеньвыше 15% признается патологичным [Руднева С.А. и соавт., 2014].Полученные нами при исследовании фрагментации ДНК сперматозоидов данныепредставлены в таблицах 8 и 9.18Таблица 8.

Частота аномалий числа и структуры хромосом в подгруппах с нормальными высоким уровнем фрагментации ДНК сперматозоидов (общая группа исследуемых пар)Уровень фрагментациисперматозоидовДНККариотип эмбрионаМенее 15%(n=112)Более 15%(n=58)рМУУтестНормальный66.1747.960.0275Трисомии по аутосомам18.9529.110.2736Моносомии по аутосомам16.7229.510.113Трисомиихромосомам4.68.540.31341.224.950.03135.3935.890.0116поМоносомиипохромосомам (45, Х0)половымполовымДелеции и дупликацииТаблица 9. Частота аномалий числа и структуры хромосом в подгруппах с нормальными высоким уровнем фрагментации ДНК сперматозоидов (группа репродуктивного возраста)УровеньфрагментацииДНКсперматозоидовКариотип эмбрионаМенее15%(n=71)Более15%(n=22)рМУУтестНормальный58.3945.020.0896Трисомии по аутосомам23.7730.840.2407Моносомии по аутосомам24.6330.340.5328Трисомии по половым хромосомам5.699.260.4623Моносомии по половым хромосомам (45, Х0)0.933.50.0261Делеции и дупликаций5.0338.660.0412Статистическая обработка результатов предимплантационного генетического скринингаэмбрионов выявила достоверное отличие подгрупп с повышенным уровнем фрагментации ДНК19ядра сперматозоидов (более 15%) от подгрупп с нормальными значениями данного показателя.Так, установлено, что встречаемость эмбрионов с нормальным кариотипом у отцов снормальным уровнем фрагментации ДНК значимо выше.

Некоторые авторы связываютнарушения репродуктивной функции мужчин с фрагментацией ДНК. Была показана корреляцияфрагментации ДНК с отклонениями параметров спермы от нормальных, включая хромосомныеаномалии [Cohen-Bacrie P. et al., 2009]. Более того, фрагментация ДНК и дисперсия хроматинабылиповышеныубесплодныхмужчин,ивособенностиупациентовсолигоастенотератоспермией [Belloc S. et al., 2014]. Проведенный нами анализ частоты трисомийи моносомий по аутосомам не выявил статистически значимых различий между подгруппами снормальным и повышенным уровнем фрагментации ДНК, несмотря на некоторую тенденцию ких увеличению. Вместе с тем повышение уровня фрагментации ДНК сопровождалосьувеличением частоты эмбрионов с синдромом Шерешевского-Тернера.В рамках данной работы также было обнаружено существенное увеличение частотыделеций и дупликаций у эмбрионов в парах с повышенным уровнем фрагментации ДНКсперматозоидов, что позволяет предполагать возможность передачи нарушений в структуреДНК сперматозоидов в генетический материал эмбриона.

Важно отметить, что согласно рядуисследований,повреждениесеменнойДНКоказываетотрицательноевлияниенаоплодотворение и частоту имплантации эмбрионов и играет сопричастную роль в наступленииспонтанных абортов в ситуациях естественного наступления беременности [Ferraretti A.P. et al.,2004; Kahraman S. et al., 2004; Kahraman S. et al., 2006; Rubio C. et al., 2007; Sills E. S. et al., 2014,Sakkas D. et al., 2010]. Более того, вероятность неблагоприятного исхода значительно возрастаетв тех случаях, когда эмбрионы трансплантируются без ПГС [Chow J.F et al., 2014].Таким образом, повышенный уровень фрагментации ДНК ядра сперматозоидов являетсясущественным признаком, при наличии которого следует прописывать пациентам ПГС в ходеосуществления цикла ВРТ.

Действительно, многие авторы предлагают введение анализа нацелостность семенной ДНК в клиническую практику при работе с бесплодными парами всовокупности с предваряющими обследованиями. Особенно это исследование актуально длямужчин с показателями спермограммы, близкими к нормальным, у которых не обнаруженонарушений в кариотипе или других явных причин бесплодия, в случаях неудачных попытокЭКО,ИКСИилипривычногоневынашивания.ИсследованиефрагментацииДНКсперматозоидов может выступать эффективным диагностическим методом, выявляющимнарушения фертильности у мужчин [Руднева С.А. и соавт., 2014; Gianaroli L. et al., 2005].20ЗАКЛЮЧЕНИЕРезультаты проведенного исследования позволяют подвести следующие итоги:1.Характеристики сперматозоидов отца оказывают значимое влияние на результатыпредимплантационного генетического скрининга эмбрионов, полученных методом ИКСИ.2.При концентрации сперматозоидов ниже нормы ВОЗ, составляющей 15 млн/мл,наблюдается статистически значимое повышение частоты эмбрионов с кариотипом 45, X0.3.Снижение содержания морфологически нормальных сперматозоидов в эякуляте (менее4%) сопровождается достоверным увеличением встречаемости в кариотипе эмбрионовчисленных аномалий аутосом, делеций и дупликаций, а также повышением риска рожденияребенка с синдромом Клайнфельтера.4.Значимого влияния подвижности сперматозоидов на результаты предимплантационногогенетического скрининга эмбрионов не обнаружено, что можно объяснить техникойоплодотворенияметодомИКСИ,прикоторойвыборсперматозоидаспомощьюмикроманипулятора нивелирует влияние ослабленной подвижности сперматозоидов.5.У отцов с уровнем фрагментации ДНК сперматозоидов, превышающим 15%, достоверноувеличена частота эмбрионов с делециями и дупликациями в хромосомах, а также скариотипом 45, Х0, что свидетельствует о возрастании риска рождения ребенка с синдромомШерешевского-Тернера у мужчин с повышенным уровнем фрагментации ДНК ядрасперматозоидов.Практические рекомендации1.Для более точного прогнозирования исхода программы ВРТ необходимо уделятьбольшее внимание диагностике патологии сперматозоидов.2.РекомендуетсявведениеопределенияуровняфрагментацииДНКвпереченьобязательных анализов, предшествующих вступлению бесплодной пары в программу ВРТ.3.Еслиумужчинывыявляютсяотклонениявфункциональныхпоказателяхсперматозоидов, целесообразно выполнять предимплантационный генетический скрининг дляснижения риска рождения ребенка с синдромами Клайнфельтера, Шерешевского-Тернера идругими заболеваниями, обусловленными изменением числа и структуры хромосом.

Это такжепозволит снизить риск невынашивания беременности и самопроизвольного абортированияплода, связанных с наличием аномалий в кариотипе эмбриона.21Список научных работ, опубликованных в рецензируемых научных изданиях,рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ1.Киселева Ю.Ю., Азова М.М., Кодылева Т.А, Ушакова И.В., Кириллова А.О., РакитькоА.С., Володяева Т.О., Мишиева Н.Г., Абубакиров А.Н..