Автореферат (Нейропептиды в регуляции фертильности женщин), страница 4

Для проверки этой гипотезы уздоровых небеременных женщин на протяжении 18 месяцев была изучена динамика измененияректальной температуры. Соотношение частоты ановуляции и уровня кисспептина представленына Рисунке 4.Из диаграммы, представленной на Рисунке 4, видно, что при снижении уровнякисспептина в 2 раза частота ановуляторных циклов повышалась в 4 раза (р≤0,001), что,возможно, и объясняет удлинение сроков наступления зачатия. При дальнейшем сниженииуровня кисспептина количество ановуляторных циклов возрастало почти до одной трети.У пациенток I группы было получено аналогичное соотношение овуляторных иановуляторных циклов.Средние показатели доли ановуляторных циклов у женщин первой и второй группсоставили 15,0% и 17,5% соответственно.16Уровень кисспептина 2,5-4,5,n=727,7Уровень кисспептина от 4,5до 7,0 нг/мл, n=1622,2Уровень кисспептина 7,0 - 9,0нг/мл, n=19Количество ановуляторныхциклов,%Линейная (Количествоановуляторных циклов,%)11,1Уровень кисспептина выше9,0 нг/мл, n=85,6051015202530месяцыРисунок 4 — Количество ановуляторных циклов у женщин второй группыв зависимости от уровня кисспептина в сыворотке кровиПолученные данные свидетельствуют в пользу ранее высказанной гипотезы, чтокисспептин влияет на уровни гонадотропных и половых гормонов крови и, как следствие, нарегуляцию овуляции.Данные, полученные при изучении уровня кисспептина у женщин во время беременности,представлены в Таблице 10.Таблица 10 — Уровень кисспептина и гормонов сыворотки крови женщин, в различные срокибеременностиПоказатели12-13 недельбеременности3264,3±457,324-25 недельбеременности13875,6±1236,438-39 недельбеременности34940,1±3158,7Прогестерон, нмоль/л245,6±27,9291,3±34,7455,9±44,5Пролактин, мЕд/л249,8±25,7425,6±49,8126,3±53,4Кисспептин, нг/мл10,88±0,4510,08±0,3711,22±0,31*Эстрадиол, пмоль/лПримечание — *р≤0,05 по сравнению с аналогичным показателем 24–25 недель беременностиНа Рисунке 5 показан уровень кисспептина сыворотки крови женщин во времябеременности в сравнении с аналогичными показателями небеременных женщин I и II групп.Полученные данные позволяют высказать предположение, что кисспептин принимаетучастиеврегулированиимеханизмовполовогосозреванияиподдержаниягонадотропинов у женщин в процессах сохранения и вынашивания беременности.уровня1711,2210,0810,88III группа, n=27Уровень кисспептина на 38-39неделях беременности, нг/млУровень кисспептина на 24-25неделях беременности, нг/млII группа, n=46Уровень кисспептина на 12-13неделях беременности, нг/мл6,89Уровень кисспептина у небеременных женщин, нг/млI группа, n=477,43024681012Рисунок 5 — Показатели уровня кисспептина сыворотки крови у женщинв различные сроки беременности и у небеременных женщинДля уточнения патогенетической роли кисспептина в формировании женского бесплодия,связанного с отсутствием овуляции были изучены его количественные значения у женщин,беременность которых не наступала при регулярной половой жизни со здоровым партнером безприменения средств контрацепции в течение 5 лет и более (Таблица 11).Таблица 11 — Уровень гормонов в сыворотке крови у женщин с бесплодиемПоказательФСГ, мЕд/млЛГ, мЕд/млПролактин, мЕд/млЭстрадиол, нмоль/млПрогестерон, нмоль/млУровень гормонов (6-7 день цикла)0,238±0,0940,138± 0,057429,29±8,37167,14±52,130,215±0,024Как видно из данных, представленных в Таблице 11, у пациенток с ановуляторнымбесплодием отмечено снижение в сыворотке крови количества ФСГ и ЛГ и прогестерона посравнению с референсными значениями.

Уровень эстрадиола был ниже, чем у здоровых женщин,но не выходил за нижнюю границу. Уровень пролактина находился выше референсных значений,характерных для женщин детородного возраста.Установлено, что снижение в сыворотке крови уровней ФСГ и ЛГ коррелирует (r=0,97) снизким уровнем кисспептина у женщин данной группы (0,203±0,047 нг/мл). Можнопредположить, что ановуляция у обследованных женщин связана со снижением в крови уровнякисспептина, что приводит к снижению уровней ФСГ и ЛГ и к нарушению фолликулогенеза вяичниках.18В результате исследования разработаны референсные значения уровня кисспептина уздоровых небеременных женщин и критерии диагностики бесплодия, связанного с отсутствиемовуляции, для экспресс-диагностики эндокринного бесплодия (Таблица 12).Группа женщинУровенькисспептинаВыше 9,0 нг/млЗдоровые женщины, имеющие детей18-25 летЗдоровые женщины, имеющие детей18-25 летЗдоровые женщины, имеющие детей25-35 летЗдоровые женщины, имеющие детей25-35 летЖенщины с эндокринной формойОт 7,0 нг/мл до9,0 нг/млот 4,5 нг/мл до7,0 нг/млот 1,8 нг/мл до4,5нг/млниже 1,7 нг/млПрогнозвозможность забеременеть втечение 6 месяцеввозможность забеременеть втечение 1 годавозможность забеременеть втечение 1,5 летвозможность забеременеть втечение 2 летнеобходимо проведениестимуляции овуляции или ЭКОЗАКЛЮЧЕНИЕРезультаты проведенного исследования свидетельствуют о том, что уровень кисспептинау здоровых женщин колеблется в широких пределах.

Этот нейропептид оказывает существенноевлияние на репродуктивную систему через кисспептин-опосредованное снижение уровней ФСГи ЛГ и нарушение фолликулогенеза в яичниках. Это, в свою очередь, влияет на сроки зачатияпри регулярной половой жизни со здоровым партнером. Кроме того, кисспептин, по-видимому,принимает участие в регуляции гестационных механизмов, что подтверждается увеличением егоуровня на фоне беременности. Снижение уровня кисспептина ниже 1,7 нг/мл в сыворотке кровиу соматически и гинекологически здоровых женщин ассоциировано с риском ановуляции.Полученные в ходе исследования данные и разработанная на их основе методика (Патентна изобретение №2574669 «Способ экспресс-диагностики женского эндокринного бесплодия»)позволяют рекомендовать кисспептин для использования в качестве маркера риска и критериядиагностики бесплодия, связанного с отсутствием овуляции, а также для прогнозирования сроковвозможного наступления беременности.Результаты исследования дают основание сделать следующие выводы:1.

Экспериментальная модель, разработанная на половозрелых самках крыс линии Wistarпосредством полной блокады кисспептинергических рецепторов, воспроизводит нарушенияэстрального цикла и формирование ановуляторного бесплодия (пролонгации диэструса), чтоподтверждается изменением кольпоцитологических индексов (КИ, ИС 0/0/0 с 1-го по 7-й деньпосле введения блокатора) и появлением монофазной кривой ректальной температуры.192. Восстановление овуляции и нормального эстрального цикла, подтвержденное даннымикольпоцитологическогоисследования,нафонеэкспериментальновоспроизведенногоановуляторного бесплодия происходит через 16 часов после введения половозрелым самкамкрыс физиологических доз кисспептина.3.

Референсными значениями кисспептина для здоровых небеременных женщин следуетсчитать показатели, превышающие 2,5 нг/мл, а диагностическим критерием ановуляторногобесплодия – снижение его концентрации ниже 1,7 нг/мл. Кисспептин участвует в обеспечениирегуляции гестационных механизмов.4. Концентрациякисспептинавысоко(r=0,98)коррелируетсколичественнымсодержанием ФСГ, ЛГ, эстрадиолом, прогестероном, а также частотой ановуляторных циклов уздоровых женщин. Установлено, что при снижении уровня кисспептина в 2 раза (с 9,0 до 4,5нг/мл) риск ановуляторных циклов повышается в 4 раза (с 5,6% до 22,2%).5.

Разработанаиапробированадляпрактическогоздравоохраненияметодикаобследования женщин для выделения с вероятностью 98% группы риска развитияановуляторного бесплодия. Критерием прогноза ановуляции служит уровень кисспептина ниже1,7 нг/мл. При уровне кисспептина больше 9,0 нг/мл беременность у здоровых женщин наступаетв течение 6 месяцев; при уровне 7,0–8,9 нг/мл — в течение 1 года; при 4,5-7,6,9 нг/мл — в срокдо 1,5 лет; при 2,5-4,4 нг/мл — в течение 2 лет.Полученные данные позволяют сформулировать практические рекомендации:1.

Исследованиеуровнякисспептинаможетбытьиспользованодляоценкирепродуктивного потенциала женщин, риска ановуляции и прогнозирования вероятностинаступления беременности. Преимущества данного метода: возможность диагностики вамбулаторных условиях; отсутствие привязки исследования к дням менструального цикла;невозможность получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов на фоневлияния внешних и внутренних факторов на репродуктивную систему из-за генетическойдетерминированности секреции кисспептина в организме женщины; простота методики —исследование проводится на обычном лабораторном оборудовании с применением стандартныхнаборов реагентов. Результат выдается пациентке или врачу в день исследования.2.

Уровень кисспептина у женщин репродуктивного возраста не зависит от фазыменструального цикла. Для исследования необходимо 5–10 мл венозной крови. Уровенькисспептина определяют в сыворотке крови и сравнивают с референсными значениями (2,5–12,0 нг/мл).3. Уровень кисспептина в сыворотке крови женщин, детородного возраста целесообразноиспользовать для выявления женщин группы риска развития бесплодия, связанного сотсутствием овуляции.

Ановуляторное бесплодие с вероятностью 95% имеет место при уровне20кисспептина ниже 1,7 нг/мл. Указанные показатели позволяют обосновать необходимостьстимуляции овуляции или направления на ЭКО.Перспективы дальнейшей разработки темы. Полученные данные позволяют считатьперспективными исследования, посвящённые роли кисспептина в регуляции процессов половогосозреванияисохранениябеременности,разработкенеинвазивныхметодовлеченияановуляторного бесплодия путем коррекции уровня кисспептина при его дефиците, а такжезначения мониторинга колебания уровня секреции кисспептина для диагностики и профилактикинарушений функции репродуктивной системы женщин.СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ1.