Автореферат (Нейропептиды в регуляции фертильности женщин), страница 3

Состоит из введения,обзора литературы, трех глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов,заключения. Работа иллюстрирована 27 таблицами и 19 рисунками. Список литературы включает207 источников, в том числе 162 иностранных.9ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫРезультаты исследования и их обсуждение. В ходе первого этапа исследования у всех36 животных, включенных в исследование, отмечен регулярный эстральный цикл, включающий4 фазы: диэструс (стадия покоя, или межтечки); проэструс (стадия подготовки к течке, илипредтечки); эструс (течка); метэструс (стадия послетечки). Длительность эстрального цикла непревышала 5 суток (Рисунок 1).АБВГРисунок 1 — Влагалищный мазок крысы.

А- Стадия диэструса. 1-слизь; 2-лейкоциты;Б - Стадия проэструса. 1 - слущенные эпителиальные клетки; В - Стадия эструса.1 - безъядерные, ороговевшие клетки (чешуйки); Г - Стадия метаэструса.1 - базальные эпителиальные клетки. Окраска метиленовым синим. Увеличение 10х20Данные цитологического исследования отделяемого из влагалища здоровых самок крыс сустойчивым эстральным циклом представлены в Таблице 1.Таблица 1 — Кольпоцитологические индексы у крыс линии Wistar до применения блокаторакисспептинергических рецепторов – kisspeptin-234 trifluoroacetatesalt (Sigma, USA)ПоказательИндекс созревания (ЕД)Кариопикнотическийиндекс (%)Эстрогенная стимуляцияДиэструс0/0/0Проэструс0/24/76Эструс0/15/85Метэструс65/25/109,6±3,675,6±7,281,7±6,225,6±5,3↓↓↓(сильно снижена)↑↑(высокая)↑↑↑(сильно повышена)↓↓(снижена)Физиологическое течение эстрального цикла у животных, включенных в эксперимент,было подтверждено динамикой изменения ректальной температуры у крыс.

Непосредственноперед овуляцией наблюдали всплеск эстрогенов, что обеспечивало еще большее снижениебазальной температуры. Для подтверждения регулярности у каждого животного былозафиксировано не менее 3-х последовательных эстральных циклов.После введения в носовые ходы крыс блокатора кисспептинергических рецепторовkisspeptin-234 trifluoroacetatesalt в фазу диэструса, у всех 18 животных было отмечено удлинение10диэструса в 3-4 раза по сравнению с исходными значениями. Введение физиологическогораствора в аналогичный период не вызывало изменений эстрального цикла.Измерениебазальнойкисспептинергическихтемпературырецепторовукрысkisspeptin-234послепримененияблокаторапоказалоизменениеtrifluoroacetatesaltхарактера температурной кривой, которая стала монофазной.Кольпоцитологические индексы крыс после блокады рецепторов к кисспептинупредставлены в Таблице 2.Таблица 2 — Кольпоцитологические индексы у крыс линии Wistar после применения блокаторакисспептинергических рецепторов – kisspeptin-234 trifluoroacetatesalt (Sigma, USA)ПоказательИндекс созревания (ЕД)СлизьКариопикнотическийиндекс (%)Эстрогенная стимуляцияДиэструс (пролонгированный), днинаблюдения после введения блокаторакисспептинергических рецепторовСмешаннаяцитологическаякартина1-й3-й5-й7-й9-й11-й0/0/0++-0/0/0+++-0/0/0+++-0/0/0++-30/34/36++15,6±3,310/23/67+55,7±3,9↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↑Дальнейшее наблюдение за животными опытной группы на протяжении 10 дней показалопостепенную нормализацию цитологической картины содержимого влагалища и восстановлениеобычного эстрального цикла, что, на наш взгляд, следует объяснить физиологическимресинтезом кисспептинергических рецепторов и восстановлением регуляции эстрального цикла.Наоснованииполученныхданныхможноговоритьотом,чтоблокадакисспептинергических рецепторов приводит к длительному нарушению эстрального цикла,ановуляции и снижению эстрогенной стимуляции у самок крыс линии Wistar.Выявленное в ходе исследования увеличение фазы диэструса с 2 до 5 дней после введенияживотным обеих подгрупп 10 мкл раствора (2х10-3 Моль) блокатора кисспептинергическихрецепторов расценивали как «экспериментальное нарушение эстрального цикла» — отсутствиеовуляции.Последующее введение на 5-е сутки кисспептина самкам крыс на фоне диэструса привелок резкой активизации функции яичников и к возникновению в цитологической картиневлагалища через 16 ч ярко выраженного эструса (Рисунок 2), продолжительность которогоувеличивалась почти до 2-х суток.11БВАРисунок 2 — Цитологическая картина влагалищного содержимого крыс 1-й группы,10х20,окраска метиленовым синим: А – после введения блокатора кисспептинергических рецепторови до введения кисспептина (диэструс); Б – через 16 ч после введения кисспептина(проэструс/эструс); В – через 24 часа после введения кисспептина (эструс)Введение физиологического раствора крысам контрольной подгруппы не вызывалоизменений эстрального цикла.Полученные данные свидетельствуют о том, что экзогенное введение кисспептина у самоккрыс с нарушением эстрального цикла восстанавливает нормальную функцию яичников.В клинической части работы характеристика обследуемых женщин по социальномустатусу представлена в Таблице 3.Таблица 3 — Социальный статус обследованных женщинСоциальный статусСостоит в бракеНе состоит в бракеГражданский бракРаботающиеДомохозяйкиОбразование:- высшее;- среднеспециальное;- среднееУчащиесяI группа,n=82абс.%78,56984,267,378,5-II группа,n=85абс.%8092,757,36981,21315,3III группа,n=37абс.%3183,8616,21951,41129,7IV группа,n=33абс.%2987,9412,12369,7721,2617,31,237341145,141,513,4255-67,613,5-29-87,9-7591,533,5718,9412,1Все пациентки проживали в Самаре, в собственном жилье, изолированно от родителей.

ВI клинической группе было больше учащихся, чем во II, III группах и особенно в IV. Среднийвозраст женщин в сравниваемых группах составлял 20,1±0,7; 25,9±1,6; 25,9±2,2 и 30,7±2,6 годасоответственно. Большинство женщин сравниваемых групп были нормовесны. НормальныйИМТ, равный 18,5–24,9 кг/м2 имели 76,8%, 74,4%, 86,5% и 84,8% женщин I–IV групп12соответственно. У 10% пациенток отмечены экстрагенитальные заболевания, протекающие в«легкой форме» и вне обострения.Частота встречаемости гинекологических заболеваний у женщин исследуемых групппредставлена в Таблице 4.Таблица 4 — Частота гинекологических заболеваний у женщин, обследованных группI группа,n=82II группа,n=85III группа,n=37IV группа,n=33абс.5335%6,13,73,76,1абс.4534%4,75,93,54,7абс.2332%5,48,18,15,4абс.2323%6,19,16,19,1Истинная эрозия11,222,4----Эктопия44,955,938,1412,1Чистота влагалища на моментвключения в группы:1 степень2 степень582470,729,3503558,841,292824,375,7221166,733,3ВульвитБартолинитВагинитЭндоцервицитЭндометритСальпингоофоритБактериальный вагинозГинекологических операций в анамнезе, включая артифициальные аборты и оперативноеродоразрешение, у женщин зарегистрировано не было.Принципиальных межгрупповых различий по возрасту менархе, продолжительностименструаций, их болезненности и количеству кровопотери не установлено.

Средний возрастначала половой жизни женщин I–IV групп составил 18,5±1,6; 18,9±1,4; 18,1±1,6 и 18,6±1,9 годасоответственно.При изучении акушерского анамнеза обследованных установлено, что у женщин IIIклинической группы беременность протекала физиологично, родоразрешение произошлоестественным путем на доношенных сроках. У 18,9% из них диагностировали анемию легкойстепени тяжести; у 8,1% — рецидивирующие вагиниты и невоспалительные заболеваниявлагалища; а у 27% — хронический пиелонефрит.Характеристика акушерского анамнеза обследованных пациенток представлена вТаблице 5.13Таблица 5 – Характеристика репродуктивной функции обследованных женщинI группаn=82II группаn=85III группаn=37IV группаn=33абс.0%0абс.36%42,4абс.13%35,1абс.0%02 и более нормально протекающихбеременности в анамнезе004957,62464,900Роды срочные самопроизвольные00853710000Одна нормально протекающаябеременность в анамнезеВ ходе исследования установлено, что у женщин I и II групп уровень кисспептинаколебался в пределах от 2,5 нг/мл до 9,56 нг/мл и не имел достоверных различий на протяжениифаз менструального цикла.

При этом у 68,1% женщин уровень кисспептина колебался в болееузких пределах — от 5,2 нг/мл до 7,7 нг/мл.При изучении акушерского анамнеза у женщин II группы выявлено, что несмотря наналичие в анамнезе нормально протекавшей беременности, которая завершилась срочнымиродами здоровым ребенком, сроки наступления беременности от момента начала регулярнойполовой жизни без применения средств контрацепции значительно колебались — от несколькихмесяцев до 1,5–2 лет. Корреляционный анализ между уровнем кисспептина в сыворотке крови исроками наступления беременности (Рисунок 3) выявил прямую сильную корреляционную связь(r=0,98).С учетом установленной взаимосвязи между уровнем кисспептина и сроками наступлениябеременности все женщины первой и второй групп были подразделены на несколько подгрупп:А — с уровнем кисспептина выше 9,0 нг/мл; Б — с уровнем кисспептина от 7,0 до 9,0 нг/мл; В —с уровнем кисспептина от 4,5 до 7,0 нг/мл; Г — с уровнем кисспептина от 2,5 до 4,5 нг/мл.Уровень кисспептина выше9,0 нг/мл6,7Уровень кисспептина от 7,0до 9,0 нг/млСредний срок наступлениябеременности11,2Уровень кисспептина от 4,5до 7,0 нг/мл18,3Уровень кисспептина от 2,5до 4,5 нг/мл24,60510152025Экспоненциальная(Средний срокнаступлениябеременности)30Рисунок 3 — Взаимосвязь между уровнем кисспептина и сроками наступления беременности уженщин I группы14Средние значения уровня кисспептина сыворотки крови здоровых небеременных женщин(I и II группы) представлены в Таблице 6.Таблица 6 — Средний уровень кисспептина у женщин первой и второй группГруппы наблюденияУровень кисспептина в сыворотке крови нг/млДоля в группе, %I А подгруппа, n=119,37± 0,15II А подгруппа, n=179,45± 0,13IБ подгруппа, n=347,22± 0,17ХIIБ подгруппа, n=287,43± 0,28*IВ подгруппа, n=225,55±0,26ХIIВ подгруппа, n=245,89±0,63**IГ подгруппа, n=153,35±0,62ХХIIГ подгруппа, n=163,21±0,53***Хр≥0,001 между показателями IА и IБ подгрупп, IБ и IВ подгрупп;ХХр≥0,01 между показателями IВ и IГ подгрупп;*р≥0,001 между показателями II Б и IIА подгрупп;**р≥0,05 между показателями II Б и IIВ подгрупп;***р≥0,01 между показателями II В и II Г подгрупп16,217,838,237,331,630,814,014,1Сравнение средних показателей по группам выявило отсутствие статистически значимыхразличий между уровнем кисспептина у здоровых рожавших и нерожавших женщин (Таблица 7).Таблица 7 – Уровень кисспептина у женщин первой и второй группI группа, n=82Уровень кисспептинав сыворотке крови, нг/мл6,45± 2,27II группа, n=856,68±2,23*Критерий Стьюдента0,072Примечание — *р≥0,05 между показателями первой и второй группДля подтверждения нормального гормонального фона у женщин первой и второй группнаблюдения слепым методом в выявленных пропорциях были сформированы две когорты по 50человек.

Первую составили 8 (16,0%) человек из IА подгруппы, 19 (38,0%) человек из IБподгруппы, 16 (32,0%) человек из IВ подгруппы и 7 (14,0%) из IГ подгруппы. Соответственно вовторую вошли 9 (18,0%) человек из IIА подгруппы, 19 (38,0%) — из IIБ подгруппы, 15 (30,0%) —из IIВ подгруппы и 7 пациенток из IIГ подгруппы (14,0%).Уровень половых и гонадотропных гормонов сыворотки крови женщин первой когортыиз I группы женщин представлен в Таблице 8.У женщин второй когорты имели место сходные значения уровня гонадотропных иполовых гормонов (Таблица 9). Таким образом, изучение уровня гонадотропных и половыхгормонов у этих женщин подтвердило наличие у них на момент исследования двухфазногоменструального цикла.15Таблица 8 — Уровень гормонов сыворотки крови женщин первой когорты (n=50)Фолликулярная фазаЛютеиновая фазаФСГ, мЕд/мл5,89± 1,8312,32±1,67*ЛГ, мЕд/мл8,52±1,1235,3±2,24**Пролактин, мЕд/мл98,77±4,69Эстрадиол пмоль/л228,92±34,69337,43±42,34***0,63±0,213,4±1,12***Прогестерон, нмоль/лПримечание:*р≤0,01 по сравнению с аналогичным показателем в фолликулярную фазу;**р≤0,001 по сравнению с аналогичным показателем в фолликулярную фазу;***р≤0,05 по сравнению с аналогичным показателем в фолликулярную фазу.Таблица 9 — Уровень гормонов у женщин второй когорты (n=50)Фолликулярная фазаЛютеиновая фазаФСГ, мЕд/мл6,23± 2,1411,87±1,92**ЛГ, мЕд/мл9,99±2,2333,64±2,59*Пролактин, мЕд/мл108,25±6,34Эстрадиол, пмоль/л232,34±45,23359,88±46,67**0,75±0,244,63±1,76**Прогестерон, нмоль/лПримечание:*р≤0,001 по сравнению с аналогичным показателем в фолликулярную фазу;**р≤0,05 по сравнению с аналогичным показателем в фолликулярную фазу.Поскольку высокий уровень кисспептина в сыворотке крови женщин сильно коррелирует(r=0,98) со сроками наступления беременности, было высказано предположение о наличиивзаимосвязи кисспептина с количеством овуляторных циклов у женщин, поскольку именнокисспептин участвует в регуляции процесса овуляции в норме.