Отзыв официального оппонента 2 (Хромосомная, клеточная и тканевая специфичность гидроксиметилирования ДНК в проэмбриональный и эмбриональный периоды развития человека), страница 2

Полученные результаты в этом разделе позволяет несколько по-новому увидеть роль процессов метилирования и гидроксиметилирования в гаметогенезе человека. Удивительно, что распределение антител к 5ЬпС и 5гпС в яйцеклетке разительно отличается от таковых в зиготе и не только в зиготе, но и при дальнейшем развитии.

Следует иметь в виду, что хромосомы в метафазе И и в зиготе совершенно отличаются как по структуре, так и по функции. Но самые интересные данные получены при анализе содержания 5птС и 5п1С в сперматозоидах, выделенных из эякулята человека. Впервые диссертант получил данные о связи процесса гидрокиметилирования ДНК с нарушением репродуктивной функции, что имеет важное теоретическое и практическое значение. Эти результаты были дополнительно подтверждены данными спермограммы и анализом фрагментированной ДНК. Дополнительный анализ иммуногистохимической детекции 5-метилцитозина и 5-гидроксиметицитозина в тестикулярной ткани убедительно продемонстрировал наличие 5гпС во всех тестикулярных клетках, тогда как 5пгпС отсутствует в делящихся митозом сперматогониях, делящихся мейозом сперматоцитах, а также в сперматозоидах.

Анализ гидраксиметилирования и метилирования ДИК метафазных хромосом у эмбрионов человека 5-12 недель развития. На стадии развития эмбриона до 12 недель можно четко раличить две разнодифференцированные ткани: эмбриональная ткань - цитотрофобласт хориона и дифференцированная — клетки легкого.

Есть ли взаимосвязь процессов метилирования и деметилирования со степенью дифференцированности клетки? Как показали результаты, полученные диссертантом однозначного ответа нет, но в процессе развития эмбрионов идет ассиметричное наследование гидроксиметилирования у дочерних клеток, что характеризует уникальный характер деметилирования. Выводы полностью отражают полученные результаты. Автореферат адекватно отражает содержание работы. Замечания и пожелания.

На микрофотографиях не указано увеличение, Было бы желательно изучать иммунофлуоресцентное окрашивание с помощью антител к 5йгпС и 5гпС на хромосомах не триплоидных зигот а на диплоидных, а также провести подобный анализ в мужском и женском пронуклеусах в динамике их преобразований. учитывая тот факт, что к эпигенетическим изменениям относятся не только модификации цитозина, было бы целесообразно в дальнейшем дополнить полученные данные и на молекулярном уровне проследить процессы метилирования и деметилирования у ряда ключевых генов в процессе эмбриогенеза. Заключение. Полученные автором научные данные вносят вклад в понимание сложнейших процессов репрограммирования генома, выявление эпигенетических маркеров как в половых клетках, так на разных этапах эмбриогенеза человека.

Достоинством диссертации является изучение процессов метилирования и деметилирования ДНК на разных уровнях организации половых и эмбриональных клеток: на хромосомном, клеточном, тканевом и отчасти организменном. Для полной картины недостает изучения подобных процессов на молекулярном уровне.

Получены уникальные данные о негативном влиянии на фертильность использования высокоЙ доли сперматозоидов в эякуляте, содержащих 5-гидроксиметилцитозин, что в практическом аспекте в дальнейшем позволяет применять в центрах пренатальной диагностики.

Полученные новые результаты рекомендуется использовать при чтении курсов лекций по генетике и молекулярной цитогенетике человека, во всех университетах и медицинских научных учреждениях России. Результаты исследований полностью отражены в 7 научных работах, две из которых в УУеЬ о1 5с~епсе. А.В. Тихонов является соавтором одной из глав монографии, а также принимал участие в 4-х Всероссийских и Международных конференциях. Диссертационная работа Тихонова Андрея Владимировича является законченной научно-исследовательской работой, выполненной на современном уровне, содержит новые данные о сложнейших эпигенетических преобразованиях в геноме человека в половых и эмбриональных клетках, их функциональной значимости на протяжении эмбрионального развития. Диссертационная работа «Хромосомная, клеточная и тканевая специфичность гидроксиметилирования ДНК в проэмбриональный и эмбриональный периоды развития человека» по актуальности выбранной темы, новизне исследований, теоретической и практической значимости полученных результатов, их объективности и достоверности соответствует требованиям «Положения о порядке присуждения ученых степеней», предъявляемым к диссертациям на соискание ученой степени кандидата биологических наук, а ее автор Андрей Владимирович Тихонов, несомненно, заслуживает присуждения искомой степени кандидата биологических наук по специальности 03.02.07 — генетика.

Ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярной генетики ВНИИ генетики и разведения с.х, животных, филиал ФГБНУ «Федеральный научный центр животноводства — ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста», д.б.н. ~- г.",' ' Л.В. Козикова 05.06.2013 .