Выписка из протокола заседания диссертационного совета (Хромосомная, клеточная и тканевая специфичность гидроксиметилирования ДНК в проэмбриональный и эмбриональный периоды развития человека)

ВЫПИСКА из протокола заседания совета Д 212.232.12 по защите докторских и кандидатских диссертаций при Санкт-Петербургском государственном университете № 34.06-! 2-1-6 от 29 марта 2018 года Состав Диссертационного совета утвержден в количестве 25 человек. П Р И С У Т С Т В О В А Л И; 19 из 25 членов диссертационного совета Г!редседатель д.б.н., академик РАН Инге-Вечтомов Сергей Георгиевич Заместигель председателя д.б.н„проф, Дондуа Арчил Карпезович Заместитель председателя д.б.н., проф.

Харазова Александра Давидовна Ученый секретарь к.б.н. Галкина Светлана Анатольевна Члены совета: Д.м.н. Ьаранов Владислав Сергеевич Д.б.н. Боголюбов Дмитрий Сергеевич Д.б.н. Гагинская Елена Романовна Д.б.н. Десницкий Алексей Григорьевич Д.б.н. Ересковский Александр Вадимович Д.б.н. Журавлева Галина Анатольевна Д.б,н. Краснощекова Елена Ивановна Д.б.н. Кудрявцев Борис Николаевич Д.б.н. Лутова Людмила Алексеевна Д.б.н. Мамон Людмила Андреевна Д.б,н. Матвеева Татьяна Валерьевна Д,б.н. Обухов Дмитрий Константинович Д.б.н. Падкина Марина Владимировна Д.б.н.

Самбук Елена Викторовна Д.б.н. Чекунова Елена Михайловна С Л У Ш А Л И: Председателя экспертной комиссии Совета д-ра биол. наук Е.Р. Гагинскую (состав комиссии; д-р биол. наук Е.Р. Гагинская, специальность 03,03.05 — биология развития, эмбриология; д-р биол. наук А.Ф, Смирнов, специальность 03.02.07 — генетика д-р биол. наук Л.А. Мамон, специальность 03.03.05 — биология развития, эмбриология) о диссертации Тихонова Андрея Владимировича «Хромосомная, клеточная и тканевая специфичность гидроксиметилирования ДНК в проэмбриональный и эмбриональный периоды развития человека», представленной на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.02.07 — «генетика», выполненной на кафедре генетики и биотехнологии биологического факультета ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет» и в лаборатории пренатальной диагностики наследственных и врожденных болезней ФГЬНУ «Научно-исследовательский институт акушерства„ гинекологии и репродуктологии им.

Д.О. Отта» (научный руководитель — доктор медицинских наук, член-корреспондент РАН, профессор Баранов В.С.), ПОСТАНОВИЛИ: 1. Утвердить заключение комиссии по решению вопроса о допустимости выявленного объема текстовых совпадений между текстом диссертации Тихонова Андрея Владимировича «Хромосомная, клеточная и тканевая специфичность гидроксиметилирования ДНК в проэмбриональный и эмбриональный периоды развития человека», и источниками, авторство которых установлено, и признать диссертацию авторской оригинальной работой.

Утвердить заключение комиссии по решению вопроса о соответствии диссертации Тихонова Андреи Владимировича «Хромосомная, клеточная и тканевая специфичность гидроксиметилирования ДНК в проэмбриональный и эмбриональный периоды развития человека» профилю Диссертационного совета Д 2! 2.232.12 н заявленной теме. Принять диссертацию на соискание ученой степени кандидата биологических наук к защите, Назначить официальными оппонентами: Боголюбова Ирина Олеговна кандидат биологических доцент наук утвердить в качестве ведущей организации Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Институт экспериментальной медицины».

Назначить дату защиты диссертации на 21,0б.2018 г. в 14.00. Утвердить список организаций и лиц для рассылки автореферата. Рекомендовать представленный вариант автореферата на правах рукописи к печати, б. 7, РЕЗУЛЬТАТЪ1 ГОЛОСОВАНИЯ: «ЗА» - 19, «ПРОТИВ» - нет, «ВОЗДЕРЖАЛСЯ» - нет. Решение Диссертационного совета принято единогласно. С.Г. Инге-Вечтомов Ученый секретарь Диссертационного совета Д212.232.12 канд. биол. наук С.А. Галкина Председатель Диссертационного совета Д212.232.12 д-р биол. наук, профессор, академик РАН оюджетного научного учреждения ~ «Федеральный научный центр животноводства — ВИЖ имени академ Л.К. иста» старший научный сотрудник лаборато морфологии клетки Федеральн государственного бюджетн учреждения науки Институт цитологии Российской академии наук ЗАКЛЮЧЕНИЕ экспертной комиссии Диссертационного совета Д 212.232.12 по диссертации Тихонова Андрея Владимировича «Хромосомная, клеточная и тканевая специфичность гидроксиметилирования ДНК в проэмбриональный и эмбриональный периоды развития человека», представленной на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.02.07 — «генетика» Экспертная комиссия Диссертационного совета Д 212,232.12 в составе председателя комиссии — доктора биологических наук, профессора Гагинской Елены Романовны, членов комиссии — доктора биологических наук, профессора Смирнова Александра Федоровича, доктора биологических наук Мамон Людмилы Андреевны, представляющих в Совете специальность 03,02.07 — генетика и специальность 03.03.05— биология развития, эмбриология, рассмотрела рукопись кандидатской диссертации Тихонова Андрея Владимировича «Хромосомная, клеточная и тканевая специфичность гидроксиметилирования ДНК в проэмбриональный и эмбриональный периоды развития человека», выполненную на кафедре генетики и биотехнологии биологического факультета ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет» и в лаборатории пренатальной диагностики наследственных и врожденных болезней человека ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им.

Д.О.Отта» (научный руководитель — член-корр. РАН„з.д.н., д.м.н., профессор Баранов Владислав Сергеевич). Представленная диссертационная работа получила положительное заключение экспертной группы ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет», заседание которой состоялось 5 марта 2018 года. На основании ознакомления с кандидатской диссертацией Тихонова А.В. и состоявшегося обсуждения комиссия приняла следук)щее заключение.

Работа посвящена актуальной теме, имеющей фундаментальное и прикладное значение. Метилирование ДНК является ключевой эпигенетической модификацией генома и участвует не только в регуляции генетической активности, но и контролирует множество биологических процессов в клетке. 5-метицитозин может подвергаться ферментативному окислению, которое является механизмом активного (ферментативного) деметилирования ДНК вЂ” одного из ключевых этапов эпигенетического репрограммирования генома гамет и эмбрионов млекопитающих. Одним из промежуточных продуктов реакции окисления является 5-П1дроксиметилцитозин. 5- гидроксиметилцитозин — не только маркер процесса активного деметилирования, но и стабильная модификация цитозина со своими собственными функциями. Ответ на вопрос о том, когда устанавливается„как поддерживается и каким образом изменяется в геноме человека распределение 5-гидроксиметилцитозина, представляет, как фундаментальную, так и практическую значимость.

При этом, наибольшего внимания заслуживают периоды гаметогенеза и эмбриогенеза, когда происходит репрограммирование генома и становление эпигенетических профилей, регулирующих дальнейшую реализацию программы развития. В диссертационном исследовании А.В.Тихонова впервые проведен анализ гидроксиметилирования ДНК метафазных хромосом из половых клеток, зигот, бластомеров и клеток эмбриональных и экстраэмбриональных тканей постимплантационных эмбрионов человека. Установлено, что на стадии зиготы метафазные хромосомы отцовского происхождения подвергаются активному деметилированию с образованием 5-гидроксиметилцитозина в большей степени, чем метафазные хромосомы материнского происхождения. Гидроксиметилпрованная ДНК распределена неравномерно в метафазных хромосомах зигот человека: 5- гидроксиметизщитозин преимущественно локализован в К-, но не О- и С-сегментах.

При делениях дробления вплоть до стадии бластоцисты происходит пассивная потеря 5- гидроксимстилцитозина с образованием гемигидроксиметилированных хромосом и сохранением сегментоспецифичного распределения 5-гидроксиметилцитозина в гидроксиметилированных хроматидах. Получены уникальные данные о межхромосомных, межклеточных и межтканевых различиях гидроксиметилирования ДНК метафазных хромосом эмбрионов человека 5-12 недель развития, обусловленные случайным сочетанием гидроксиметилированных, гемигидроксиметилированных и негидроксиметилированных сестринских хроматид и гомологичных хромосом.

Впервые установлена связь между параметрами спермограммы и характером гидроксиметилирования сперматозоидов в эякуляте: увеличение доли гидроксиметилированных сперматозоидов ассоциировано со снижением качества эякулята и нарушениями фертильности. Результаты настоящей работы вносят вклад в понимание механизмов эпигенетической регуляции и организации работы г енома в онтогенезе человека. Описанные изменения гидроксиметилирования ДНК в половых клетках, в доимплантационных и постмиплантационных эмбрионах позволяют приблизиться к пониманию биологической роли 5-гидроксиметилцитозина в процессах репрограммирования генома человека в онтогенезе.

Полученные результаты вазкны для разработки и совершенствования методов оценки функционального состояния генома. Оценка характера гидроксиметилирования мужских гамет может стать новым информативным критерием качества эякулята, что будет иметь существенное значение для повышения эффективности вспомогательных репродуктивных технологий. В настоящем исследовании использован комплексный подход с применением цитогснетических, молекулярно-цитогенетических, гистологических и иммунофлуоресцснтных методов, флуоресцентной микроскопии и ряда статистических методов. Данные, составляющие основу диссертации, получены и обработаны автором лично. Название диссертации, сформулированные автором выводы и положения, выносимые на защиту, соответствуют основным результатам, полученным в диссертационной работе.