Автореферат (Экспрессия генов транскрипционных факторов LXRalpha, LXRbeta, PPARgamma и транспортера ABCA1 при атеросклерозе), страница 2

PDF-файл Автореферат (Экспрессия генов транскрипционных факторов LXRalpha, LXRbeta, PPARgamma и транспортера ABCA1 при атеросклерозе), страница 2 Биология (46084): Диссертация - Аспирантура и докторантураАвтореферат (Экспрессия генов транскрипционных факторов LXRalpha, LXRbeta, PPARgamma и транспортера ABCA1 при атеросклерозе) - PDF, страница 2 (46084)2019-06-29СтудИзба

Описание файла

Файл "Автореферат" внутри архива находится в папке "Экспрессия генов транскрипционных факторов LXRalpha, LXRbeta, PPARgamma и транспортера ABCA1 при атеросклерозе". PDF-файл из архива "Экспрессия генов транскрипционных факторов LXRalpha, LXRbeta, PPARgamma и транспортера ABCA1 при атеросклерозе", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "биология" из Аспирантура и докторантура, которые можно найти в файловом архиве СПбГУ. Не смотря на прямую связь этого архива с СПбГУ, его также можно найти и в других разделах. , а ещё этот архив представляет собой кандидатскую диссертацию, поэтому ещё представлен в разделе всех диссертаций на соискание учёной степени кандидата биологических наук.

Просмотр PDF-файла онлайн

Текст 2 страницы из PDF

Данные, представленные в диссертации, опубликованыв виде четырех статей в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК.Материалы работы также были представлены на международных и российскихконференциях: Европейской конференции по генетике человека (Барселона,Испания, 2008), Международной конференции «Биология: от молекулы добиосферы» (Харьков, Украина, 2008), V съезде Вавиловского обществагенетиков и селекционеров (Москва, 2009), III конгрессе FEBS “ABC Proteins”(Инсбрук, Австрия, 2010), 4-й Международной конференции молодых ученыхИМБ «Молекулярная биология: проблемы и перспективы» (Киев, Украина,2011), Российском национальном конгрессе кардиологов (Санкт-Петербург,2013), Европейском конгрессе общества атеросклероза (EAS) (Гамбург,Германия, 2010; Милан, Италия, 2012; Мадрид, Испания, 2014).Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа состоит изследующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методыисследования, результаты и обсуждение, заключение, выводы и списоклитературы, включающий 195 источников. Работа изложена на 116 страницах,содержит 22 рисунка и фотографии, 5 таблиц.СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериалы и методы исследованияХарактеристика обследованных группДля оценки вклада вариантов (–17)G > C (SNP ID rs2740483), 319ins < G(SNP ID rs1799777), R219K (G655A) (SNP ID rs2230806) гена АВСА1 в развитиеатеросклероза была отобрана группа пациентов, которая состояла из119 человек (79 % мужчин и 21 % женщин) с атеросклерозом, подтвержденнымангиографическим исследованием (средний возраст – 51,41 ± 6,21 года).7Первые клинические проявления атеросклероза у пациентов наблюдалисьв возрасте 47,87 ± 7,05 года. Локализация пораженных атеросклерозом артерийбыла обнаружена как минимум в одном из трех артериальных бассейнов(церебральном, коронарном или бассейне артерий нижних конечностей).Контрольная группа состояла из 300 человек (63 % мужчин и 37 % женщин)без ССЗ в анамнезе и соответствовала группе пациентов по полу и возрасту(средний возраст 45,60 ± 6,30 года).

Возраст контрольной группысоответствовал возрасту начала заболевания у пациентов.Для оценки вклада уровня мРНК генов ABCА1, LXRα, LXRβ, PPARγ, MMP-9и уровня белка ABCА1 в развитие атеросклероза была отобрана группапациентов, которая состояла из 15 мужчин с атеросклерозом, подтвержденнымангиографическим исследованием (средний возраст – 53,87 ± 6,78 года).Первые клинические проявления атеросклероза у пациентов наблюдалисьв возрасте 47,73 ± 4,33 года. Пораженные атеросклерозом артериирасполагались в коронарном бассейне.

У всех больных был выявлен стенозболее 50 % как минимум в одной артерии коронарного бассейна.Контрольная группа состояла из 19 человек без ССЗ в анамнезеи соответствовала группе пациентов по полу и возрасту (средний возраст –52,05 ± 6,05 года).Все пациенты, вошедшие в выборки, не принимали ни статинов, ни какихлибо иных гиполипидемических средств. Все представители контрольныхгрупп проходили обследование врача-кардиолога. Данные выборки являютсяслучайными и принадлежат к тому же географическому региону, чтои включенная в анализ группа лиц, больных атеросклерозом.Методы исследованияДля получения макрофагов свежесобранную кровь смешивали в равномсоотношении с фосфатно-солевым буферным раствором (PBS).

Смесьнаслаивали на фиколл-верографин (р = 1,077, БиоЛот, Санкт-Петербург),центрифугировали (1 500 об/мин, 30 мин), мононуклеары промывали в PBS,центрифугировали (1 500 об/мин, 15 мин). Затем клетки ресуспендировалив культуральной среде (альфаMEM, 10 %-ная эмбриональная сыворотка,5 мкг/мл антибиотиков (пенициллин G, стрептомицин)) и инкубировалив СО 2 - инкубаторе в течение 2 ч. После чего прикрепившиеся к чашкам Петримоноциты культивировали в присутствии колониестимулирующего факторамакрофагов M-CSF 15 нг/мл (R&D Systems, США) в течение 5 сутокс ежедневной заменой питательной среды.

Далее моноциты и макрофаги былииспользованы для определения содержания мРНК ABCA1, LXRα, LXRß, PPARγи MMP-9 и белка ABCA1.8Для выделения тотальной мРНК и проведения реакции обратнойтранскрипции применяли наборы RNeasy Minikit (Qiagen, Германия) и cDNAsynthesis kit (Fermentas, Литва). Уровень мРНК генов ABCA1, LXRα, LXRß,PPARγ и MMP-9 определяли методом количественной ПЦР в режиме реальноговремени с флуоресцентными зондами TaqMan на приборе CFX96 Touch(BioRad, США). В качестве референсного гена был использован конститутивноэкспрессирующийся в клетках ген β-актина.Содержание белка ABCA1 в макрофагах оценивали методом вестернблоттинга с использованием первичных кроличьих антител к ABCA1 (1 : 1 000;ab7360, Abcam, Великобритания).

Результаты нормировали относительноокрашивания β-актина (1 : 10 000; ab8227, Abcam, Великобритания). Клеткилизировали, количество общего белка определяли по методу Бредфордас использованием реагентов фирмы «Силекс» (Россия) на спектрофотометреSmartSpecTMPlus (Bio-Rad, США). В экспериментах использовали вторичныеантикроличьи антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (1 : 3 000;ab6721,Abcam,Великобритания).РезультатыидентифицировалиTMс использованием набора Amersham ECLPlus System (Amersham,Великобритания) и фотопленки CEA (Швеция).Геномную ДНК выделяли из лейкоцитов периферической крови методомфенольно-хлороформной экстракции. Идентификацию вариантов (–17)G > C,319ins < G, R219K гена АВСА1 проводили методом ПЦР с последующимрестрикционным анализом, как описано ранее (Zwarts et al., 2002).Концентрацию общего ХС и ХС в составе ЛПВП (Х-ЛПВП) в плазме кровиизмеряли на автоанализаторе А-15 (BioSystems, Испания) с использованиемнаборов фирмы BioSystems.Статистический анализ был проведен с использованием программыStatistica 6.0.

Для качественных данных определяли частоты встречаемости в %.Проверку соответствия полученного распределения генотипов равновесиюХарди – Вайнбергаосуществлялиприпомощинепараметрическогокритерия χ2. Соответствие полученных данных нормальному распределениюпроверялось с помощью критериев Шапиро – Уилка или Колмогорова –Смирнова в зависимости от размера выборки. Для сравнения количественныхданных использовали метод дисперсионного анализа ANOVA для несколькихгрупп и непараметрический метод U-теста Манна – Уитни. Значения p < 0,05считались статистически значимыми.

Для определения относительного рискаиспользовали показатель соотношения шансов (odds ratio, OR),рассчитываемый по формуле9OR=a×d,b×cгде a – количество пациентов, имеющих более редкую аллель; b – количествопациентов, не имеющих более редкую аллель; c – количество индивидуумов изконтрольной группы, имеющих более редкую аллель; d – количествоиндивидуумов из контрольной группы, не имеющих более редкую аллель. Дляопределения корреляции между количественными характеристикамипользовались корреляционным анализом по Спирмену.

Коэффициенткорреляции r > 0,5 при р < 0,05 означал положительную и статистическизначимую корреляцию между признаками, а отрицательное значение rсоответствовало обратной корреляции. В тексте диссертации и в таблицахсредние величины приведены в виде среднего значения ± стандартноеотклонение. В случае достоверных различий дополнительно приведенызначения медианы (минимум – максимум).Результаты и обсуждениеАнализ вклада вариантов гена АВСА1 (R219K, 319ins < G, (–17)G > C)в развитие атеросклерозаЧастоты вариантов гена АВСА1 (R219K (G655A), 319ins < G, (–17)G > C)в группе больных с атеросклерозом и в контрольной группе представлены втабл.

1. В исследуемых группах распределение генотипов гена ABCA1находилось в соответствии с распределением Харди – Вайнберга.В исследовании показано, что в контрольной группе частоты вариантов генаАВСА1 (R219K, 319ins < G, (–17)G > C) были сопоставимы со значениями,полученными в европейских популяциях (Zwarts et al., 2002; Jensen et al., 2007;Ma et al., 2011).Различий в частотах вариантов R219K и (–17)G > C гена АВСА1 междугруппой пациентов с атеросклерозом и контрольной группой обнаружено небыло (табл.

1).В группе пациентов с атеросклерозом наблюдалось достоверное снижениечастоты варианта G319 гена АВСА1 по сравнению с контрольной группой(15,1 % и 25,4 % соответственно, р = 0,03, df = 1). Был установлен пониженныйотносительный риск развития атеросклероза у носителей варианта G319 генаАВСА1 по сравнению с лицами, у которых отсутствует вставка нуклеотида Gв 319 положении гена АВСА1 (OR = 0,55 (95 % ДИ: 0,86–0,35)).10Таблица 1Частоты вариантов гена АВСА1 в группе пациентов с атеросклерозоми в контрольной группеВарианты гена АВСА1R219KRRRKKKf (R аллель)f (К аллель)(–17)G > CCCCGGGf (G аллель)f (С аллель)InsG319NNNG + GGf (N аллель)f (G аллель)Частота аллелей n, %группа пациентовконтрольная группас атеросклерозом60(50,4)52(43,7)7(5,9)150(50,0)131(43,7)19(6,3)0,720,280,720,2868(57,1)44(37,0)7(5,9)156(52,0)131(43,7)13(4,3)0,760,240,740,26101(84,9)18(15,1)*0,930,07224(74,6)75 + 1(25,4)0,870,13* p < 0,05, OR (NG + GG vs NN) = 0,55 (95 % ДИ: 0,35–0,86).Ранее в исследовании Zwarts с соавт.

было показано, что носительствоаллели G в положении 319 гена АВСА1 ассоциировано со снижениемлокального и диффузного атеросклероза по сравнению с вариантом, когдааллель G в положении 319 отсутствовала (Zwarts et al., 2002). Однакомеханизмы, объясняющие функциональный эффект этого варианта на развитиеи прогрессирование атеросклероза, остаются в настоящее время неизученными.Поскольку вариант 319insG расположен в 5`-нетранслируемой области генаАВСА1, возможно предположить, что вставка нуклеотида G в 319 положениигена АВСА1 может затрагивать регуляторные элементы, отвечающие застабильность мРНК гена АВСА1.11Уровень мРНК генов ABCА1, LXRα, LXRβ, PPARγ и MMP-9 и уровня белкаABCА1 в макрофагах, активированных М-CSF, исследуемых группВ настоящем исследовании для измерения уровня мРНК ABCA1, LXRα,LXRβ, PPARγ и MMP-9 был создан банк макрофагов, активированных факторомM-CSF.Было показано, что в макрофагах пациентов с атеросклерозом уровеньмРНК ABCA1 (медиана 1.60 (мин.

– макс. 0,83–2,73)) повышен по сравнениюс макрофагами лиц контрольной группы (медиана 0,66 (мин. – макс. 0,15–1,66))(p < 0,001) (рис. 1).Рис. 1. Относительный уровень мРНК генаABCA1 в макрофагах у пациентовс атеросклерозом (N = 15) и в контрольнойгруппе (N = 19), * – p < 0,001. Ось абсцисс –исследуемые группы; ось ординат –относительный уровень мРНК (отн. ед.)Повышение уровня мРНК гена ABCA1 указывает на измененнуюэкспрессию гена АВСА1 и, соответственно, может модифицироватьэффективность ОТХ и влиять на темпы атерогенеза.

Свежие статьи
Популярно сейчас
Почему делать на заказ в разы дороже, чем купить готовую учебную работу на СтудИзбе? Наши учебные работы продаются каждый год, тогда как большинство заказов выполняются с нуля. Найдите подходящий учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
5288
Авторов
на СтудИзбе
417
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее