Диссертация (Изучение травы Inula Viscosa (L.) с целью создания экстракта и геля для местного и наружного применения), страница 13

Хроматограмма извлечения из I.viscosa (летучиевещества)В извлечении 70% спирта из сырья из сырья I.viscosa обнаружено 225пиков веществ. Из них идентифицировано по библиотеке спектров 8281соединения, относящихся к различным группам БАС. Результаты поидентификации веществ с помощью автоматического поиска показали, что длябольшей части найденных веществ вероятности совпадения их масс-спектровс библиотечными значительно ниже 90 %.

Это говорит о том, что найденныесоединения, возможно, относятся к тем же группам веществ, что ибиблиотечные, но имеют иное строение, например, являются изомерами.Количественное соотношение летучих компонентов, в процентах отсуммарногосодержаниявсехкомпонентов,определенометодомнормализации площадей пиков (приложение 3).Доминирующими терпеновыми соединениями среди летучих веществявляютсясесквитерпеноидтоментозиниегоизомер(3,93%),сесквитерпеновые соединения эйдесманового типа - 4a,5,6,7,8,8a-гексагидро6-[1-(гидроксиметил)этинил]-4,8a-диметил-2-нафталенон(1,92%),6-(1-гидроксиметилвинил)-4,8a-диметил-3,5,6,7,8,8a-гексагидро-1H-нафтален-2он и его изомеры (1,578%).

Содержатся пентациклический тритерпеноид (9β)9,19-циклоланостан-3β-ол ацетат (циклоартенол ацетат) (2,161%), терпеноидыкариофиллен оксид (0,636%) и его изомер (0,190%), альфа-эудесмол (0,341%),изоаромадендрен эпоксид - (0,331%) леден оксид- (0,134 %), транс-неролидол(0,115%), можжевеловая камфора (0,115%), цис-ланцеол (0,114 %), 4.4диметил-тетрацикло[6.3.2.0(2,5).0(1,8)]тридекан-9-ол(0,172%),Найденытакже бета-патчулен, альфа-копаен-11-ол, геранилацетон, ментафуран и др.Содержится 1(22)7(16)диэпокси-трицикло[20.8.0.0(7,16)] триаконтан (2,17%), 2-(7-гептадецинилокси)тетрагидро-2H-пиран (0,325%), производныежирных кислот - альфа-линоленовой кислоты этиловый эфир (0,701%),линолевойкислотыэйкозатетраеновойэтиловыйкислотыэфирметиловый(0,461%),эфир(0,193%),(Z)-5,11,14,175,8,11,14,17-эйкозапентановой кислоты изо-пропиловый эфир (1,34%) и др.Проведенное изучение состава летучих веществ с помощью метода ГЖХподтверждает, что метаболом I.viscosa имеет сложный состав терпеноидов,углеводородов и других групп природных соединений, обладающих82свойством перегоняться с водой.

Подобные соединения могут оказыватьвлияние на химиотерапевтическое и фармакологическое действие галеновыхи новогаленовых препаратов из сырья растения. Это требует дальнейшегоуглубленного изучения летучих веществ в целях более полной характеристикиих состава и для совершенствования стандартизации качества сырья ипрепаратов на его основе.Такимобразом,изучениеБАСнизкомолекулярногофрагментаметаболома I.viscosa с помощью ГЖХ выявил, что изучаемый вид сырья вбольшом разнообразии и значительных количествах содержит такие группысоединений, как углеводороды, терпеноиды и другие летучие компоненты.3.5.

Числовые показатели травы I.viscosaПри получении экстракта используетсяизмельченноесырье,фракционный состав которого приведен в таблице 3.8.Таблица 3.8 – Фракционный состав частиц измельченной травы I.viscosaЧастицы сырья, оставшиеся на сите сотверстиями размером3 мм2 мм1 мм0,5 мм0,1 ммЧастиц, прошедших сквозь сито сотверстиями размером 0,1 ммСодержание фракции, %0,28±0,00241,65±0,4232,23±0,8215,68±0,068,32±0,081,84±0,04Данные таблицы 3.8 показывают, что в измельченном сырье I.viscosa90% составляют частицы размером крупнее 2 мм, но не менее 0,5мм.

Фракцияизмельченного сырья из мелких и пылевидных частиц находится на уровне10%.Результаты определения некоторых числовых показателей сырьяI.viscosa приведены в таблице 3.9.Как видно из таблицы 3.9, влажность травы I.viscosa не превышала 6%,что соответствует уровню значений, не более 14%, для высушенного83официнального сырья морфологической группы. Содержание золы общей втраве около 10 %, а золы, не растворимой в 10 % растворе HCl до 1%.Таблица 3.9 – Некоторые числовые показатели травы I.viscosaСодержание, %Числовой показательВлажностьЗола общаяЗола, нерастворимая в растворе HCl 10 %,5,23±0,310,22±0,40,868±0,02В результате проведения исследований на наличие в сырье тяжелыхметаллов и мышьяка, а также остаточных количеств пестицидов, полученыданные, представленные в таблице 3.10.Таблица 3.10 - Результаты определения тяжелых металлов, мышьяка иостаточных пестицидов в сырье I.viscosaОпределяемые показателикадмийртутьсвинецмышьякДДТ и его метаболитыГХЦГ (α, β, γ изомеры)Трава I.viscosaТяжелые металлы, мг/кг0,035±0,0070,014±0,0040,710±0,0020,002±0,001Пестициды, мг/кгменее 0,001менее 0,001Нормыболее…содержания,не1,00,16,00,50,100,10Исследование травы I.viscosa на соответствие стандартам безопасностипо показателям «Содержание остаточных пестицидов» и «Содержаниетяжелых металлов и мышьяка» показало, что сырье соответствуеттребованиям, предъявляемым к чистоте ЛРС в ГФ РФ ХIII изд.

При изученииособенностей развития I.viscosa зарубежными учеными [124,125] былоустановлено, что девясил липкий накапливает тяжелые металлы и мышьяк вподземных частях, но такие элементы не проникают в надземные органырастения. На основании этого предложено использовать девясил липкий дляочищения почв от загрязнений, вызванных антропогенным воздействием.843.6 Разработка методик количественного определения действующихвеществ в сырье I.viscosa приемлемых для сквозной стандартизацииДанные литературы, позволяют считать, в качестве действующихвеществ травы I.viscosa - фенольные соединения, и в частности, флавоноиды.РезультатыизученияБАСцелевогонизкомолекулярногофрагментаметаболома подтверждают их наличие в исследуемом сырье. При разработкежидкого экстракта из травы I.viscosa проводилась оценка содержания всейсуммы фенольных соединений для анализа эффективности головной стадиитехнологического процесса.3.6.1.

Разработка методики определения содержания суммыфенольных соединенийРаствор СО хлорогеновой кислоты. Точную навеску СО хлорогеновойкислоты (около 0,01 г) помещают в мерную колбу на 50 мл, доводят 70%спиртом объем раствора до метки и перемешивают.

В мерную колбу на 25 млпомещают 1 мл первого раствора и доводят 70% спиртом объем раствора дометки, перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.Испытуемый раствор. 1,0 г сухой измельченной (не более 3 мм) травыI.viscosa помещают в коническую колбу на 250 мл со шлифом. Прибавляют 50мл 70 % спирта, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают накипящей водяной бане в течение 1 ч (после закипания). Смесь охлаждают,фильтруют в мерную колбу на 50 мл через бумажный (синяя лента)складчатый фильтр, доводят объём до метки 70 % спиртом.В мерную колбу на 25 мл помещают 0,5 мл испытуемого раствора,доводят до метки 70% спиртом и перемешивают.

Оптическую плотностьполученного раствораизмеряютнаспектрофотометрев максимумепоглощения при 328±2нм в толщине поглощающего слоя 10 мм. 70% спиртиспользуют в качестве раствора сравнения.Измеряют оптическую плотность раствора СО хлорогеновой кислоты.85Содержание в процентах (Х) фенольных соединений в пересчете нахлорогеновую кислоту вычисляют по формуле: ∙ 0 ∙ 50 ∙ 1 ∙ 50 ∙ 100 ∙ 100∙0 ∙ ∙ 0,5 ∙ 50 ∙ 25 ∙ ∙ (100 − )где А0 - оптическая плотность раствора СО раствора хлорогеновойкислоты;А - оптическая плотность испытуемого раствора;m0 - масса хлорогеновой кислоты, г,m - масса ЛРС, г,W- потеря в массе при высушивании, %P – содержание основного вещества в растворе СО хлорогеновойкислоты.х=УФ-спектр извлечения из сырья девясила в области 280-350 нмсовпадает с таковым хлорогеновой кислоты (рис.3.24).

Для аналитическихцелей выбран максимум поглощения при 328 нм.Рис. 3.24. УФ-спектры извлечения из травы I.viscosa (1), и раствора СОхлорогеновой кислоты (2)В исследуемых образцах травы I.viscosa содержание фенольныхсоединений в пересчете на хлорогеновую кислоту от 6,87 до 7,63%.86Согласноспецифичности,ОФС.1.1.0012.15линейности,валидацияправильностипроведенаинапредметвнутрилабораторнойпрецизионности. Валидационный отчет представлен в приложении 5.Валидация разработанной методики количественного определенияфенольных соединений в пересчете на хлорогеновую кислоту показалапостоянство результатов анализа суммы фенольных соединений в пересчетена хлорогеновую кислоту.Поскольку, детализация состава суммы фенольных соединений методомУВЭЖХ-МС выявила наличие значительного количества флавоноидовдающихсущественныйвкладвпроявлениепротивовоспалительнойактивности, констатируемой в литературных источниках и прогнозируемой insilico, была разработана методика количественного определения суммыфлавоноидов в пересчете на рутин.3.6.2.

Разработка методики определения содержания суммы флавоноидов всырьеФлавоноиды определяли после реакции комплексообразования схлоридом алюминия, являющейся селективной для этой группы фенольныхсоединений и дающей сдвиг спектра в длинноволновую область, что позволяетизмерять содержание преимущественно флавоноидов при наличии визвлечении из сырья других сопутствующих групп фенольных веществ.При сравнении спектров поглощения комплексов флавоноидов из ЛРСI.viscosa и РСО рутина установлено, что в диапазоне 404- 412 нм максимумыпоглощения совпадают, это и определило выбор аналитической длины волны410 нм (рис. 3.25).87Рисунок 3.25. УФ-спектра растворов комплексов флавоноидовизвлечения из травы I.viscosa (1) и рутина с реактивом AlCl3 (2)Раствор стандартного образца рутина.

Около 0,2 г (точная навеска) СОрутина помещают в мерную колбу 25 мл, доводят 70% спиртом объем растворадо метки и перемешивают (раствор А СО рутина). Срок годности раствора 1месяц.В мерную колбу 25 мл помещают 2,0 мл раствора А СО рутина, прибавляют 3мл раствора алюминия хлорида 3% спиртового, доводят до метки 70%спиртом, перемешивают и выдерживают 40 минут (раствор Б СО рутина).Испытуемый раствор. 1,0 г сухого сырья травы I.viscosa (размером не более3 мм), помещают в коническую колбу 250 мл со шлифом, прибавляют 50 мл70 % спирта, и нагревают с обратным холодильником на кипящей водянойбане в течение 1 ч (с момента закипания содержимого).