Автореферат (Экспериментально-теоретическое исследование лекарственного растительного сырья, содержащего нафтохиноны, и его стандартизация), страница 6

nigra – кариофилленоксид 44,37 %, спатуленол 8,53 %, (e)-кариофиллен 6,60 %.Дальнейшее фармакогностическое изучение J. nigra и J. regia позволилоразработать для нового в медицинской практике ЛРС проекты ФС «Ореха грецкого листья», «Ореха чёрного листья», Инструкции по их сбору и сушке, которые прошли экспертную оценку и утверждены в ФГБНУ ВИЛАР (г. Москва).Результаты фитохимического исследования коры J. cinerea, J.

nigra и J. regiaпослужили основанием для получения патента на «Способ получения БАД изкоры ореха».При составлении раздела «Подлинность» проектов ФС «Ореха грецкоголистья» и «Ореха чёрного листья» использованы выявленные внешние и микроскопические диагностические признаки ЛРС цельного, измельчённого и порошка.Для разработки норм качества раздела «Испытания» проектов ФС «Орехагрецкого листья» и «Ореха чёрного листья» анализировали образцы ЛРС цельного, измельчённого и порошка. В разделе «Определение основных групп биологически активных веществ» в листьях ореха грецкого и ореха чёрного предложено определение нафтохинонов методом ТСХ, в разделе «Количественноеопределение» – методом фотоколориметрии (сумма нафтохинонов в пересчётена юглон).Данные по некоторым показателям качества ореха чёрного листьев цельных, полученные экспериментально, представлены в таблице 9.Таблица 9 – Результаты анализа некоторых показателей качества листьев орехачёрного цельныхПоказатель и нормаВлажность, %Номер партии сырья1234566,80±0,01 5,58±0,02 7,01±0,01 6,92±0,02 5,71±0,01 7,11±0,01Зола общая, %5,23±0,02 7,41±0,02 6,18±0,01 6,32±0,01 7,23±0,02 6,65±0,01Зола, нерастворимая в растворе хлористоводородной 0,14±0,01 0,12±0,01 0,18±0,02 0,17±0,02 0,21±0,01 0,13±0,02кислоты, %Измельчённость сырья:частицы,проходящие3,21±0,11 3,76±0,08 2,33±0,02 4,11±0,08 3,89±0,03 3,76±0,02сквозь сито с отверстиямиразмером 3 мм, %30Показатель и нормаНомер партии сырья123456Посторонние примеси:части сырья, изменившиеокраску (побуревшие, вы- 1,38±0,02 1,41±0,01 2,09±0,01 1,76±0,02 1,58±0,02 2,11±0,03цветшие и т.д.), %другие части растения, несоответствующие уста0,54±0,02 0,44±0,01 0,38±0,01 0,39±0,02 0,65±0,01 0,72±0,02новленному описанию сырья, %органическая примесь, %0,64±0,02 0,77±0,02 0,23±0,02 0,15±0,01 0,44±0,01 0,52±0,02минеральная примесь, %0,12±0,02 0,24±0,01 0,11±0,02 0,08±0,02 0,13±0,01 0,13±0,02Количественное определение: содержание нафтохи0,24±0,01 0,22±0,01 0,20±0,02 0,28±0,01 0,22±0,02 0,21±0,01нонов в пересчёте на юглон, %Определение норм для прочих разделов проекта ФС проводилось согласно требованиям соответствующих ОФС ГФ XIII.Исходя из полученных экспериментальных данных, в проекте ФС «Орехачёрного листья» в разделе «Количественное определение» нормирование содержания суммы нафтохинонов для цельного, измельчённого сырья и порошкаустановлено как «не менее 0,1 % в пересчёте на юглон».В проекте ФС «Ореха грецкого листья» в разделе «Количественное опр еделение» нормирование содержания суммы нафтохинонов для цельного, измельчённого сырья и порошка установлено как «не менее 0,05 % в пересчёте наюглон».Стандартизация фармацевтических субстанций и лекарственных форм,содержащих нафтохиноныВ ходе фармако-технологических исследований ЛРС, характеризующегося значительным содержанием нафтохинонов, нами разработаны технологические схемы производства новой фармацевтической субстанции – экстрактакорней синяка русского, а на его основе – масляного раствора, мази для наружного и местного применения и таблеток для рассасывания.

Для качественного иколичественного анализа нафтохинонов в субстанциях и ЛФ использовалиунифицированные методики, разработанные для анализа ЛРС, изменив процедуру пробоподготовки.31Шиконин и его производные в составе исследуемых образцов ЛФ идентифицировали с помощью реакции с раствором натрия гидроксида 5 % и ТСХ.Количественное определение суммы нафтохинонов в пересчёте на шиконинпроводили методом спектрофотометрии (таблица 10).Таблица 10 – Результаты качественного и количественного анализа суммы нафтохинонов в ЛФЭкстракт корней синякарусскогоRfСумма нафтохинонов в пересчётена шиконинСубстанция0,1; 0,2; 0,4; 0,6(1,03 ± 0,03) %; ε = ± 3,12 %Раствор в масле0,1; 0,2; 0,4; 0,6(0,06 ± 0,002) %; ε = ± 3,50 %Мазь для наружного иместного применения0,1; 0,2; 0,4; 0,6(0,0047 ± 0,0002) %; ε = ± 4,26 %Таблетки для рассасывания0,1; 0,2; 0,4; 0,6(109,8 ± 1,9) мкг/таб.; ε = ± 1,73 %0,2-СО шиконинаКак следует из данных, представленных в таблице 10, во всех исследуемых объектах подтверждено присутствие шиконина и его производных.

Предложенные методики качественного и количественного анализа суммы нафтохинонов в пересчёте на шиконин отвечают всем валидационным критериям приемлемости и позволяют анализировать ЛРС, фармацевтические субстанции иЛФ в рамках т.н. «сквозной» стандартизации.Нами разработаны технологические схемы производства новых фармацевтических субстанций (экстракта листьев ореха грецкого жидкого (1 : 1) иэкстракта листьев ореха грецкого сухого) и лекарственной формы – таблетокпорошка листьев ореха грецкого.Предложены методики качественного анализа юглона и количественногоанализа суммы нафтохинонов в пересчёте на юглон, позволяющие анализировать ЛФ и БАД в рамках «сквозной» стандартизации, которые апробированы наобразцах экстрактов ореха грецкого листьев жидкого и сухого, таблетках с листьями ореха грецкого, полученных в лабораторных условиях.

Для оценки возможности анализа суммы нафтохинонов в сложной смеси ЛРС, а также в комплексных экстракционных БАД совместно с к. фарм. н. А. В. Корочинским изучали БАД производства ООО «Витаукт-пром» (Россия): «Юглон», «Веноспас»и смесь ЛРС для получения БАД «Веноспас».32Для подтверждения подлинности порошка листьев ореха в составе таблеток изучали микропрепараты по стандартным методикам.При просматривании препаратов под микроскопом обнаружены фрагменты листьев, на которых можно наблюдать участок анастамоза жилок, обрывкиэпидермы, сосудов с кристаллоносной обкладкой, фрагменты хлорофиллсодержащего мезофилла, эфирномасличные желёзки, друзы оксалата кальция, простые одноклеточные волоски и головчатые волоски с бурым содержимым.Качественный анализ юглона проводили методом ТСХ, количественноеопределение суммы нафтохинонов в пересчёте на юглон – по оригинальнойунифицированной фотоколориметрической методике.

Методики, используемыедля анализа фармацевтических субстанций и ЛФ, соответствуют применяемымдля стандартизации ЛРС, отличаясь только процедурой начальной пробоподготовки. Результаты экспериментов представлены в таблице 11.Таблица 11 – Результаты качественного и количественного анализа суммы нафтохинонов в пересчёте на юглон в фармацевтических субстанциях и ЛФОбразцы ЛРСRfСодержание суммы нафтохинонов, %Таблетки с листьями ореха грецкого0,8(172,5 ± 2,41) мкг/таб.; ε= ± 1,40 %Экстракт листьев ореха грецкого жидкий0,80,031 ± 0,0012; ε = ± 3,98%Экстракт листьев ореха грецкого сухой0,80,11 ± 0,0043; ε = ± 3,95%БАД «Веноспас»0,80,53 ± 0,001; ε = ± 2,91 %БАД «Юглон»0,80,19 ± 0,008; ε = ± 4,12 %Смесь ЛРС для БАД «Веноспас»0,80,042 ± 0,002; ε = ± 4,57 %СО юглона0,8Как следует из данных, представленных в таблице 11, во всех исследуемых образцах подтверждено присутствие юглона.Полученные экспериментальные данные послужили основой для разработки проектов НД «Ореха грецкого листьев экстракт жидкий 1 : 1» и «Орехагрецкого листьев экстракт сухой».

В разделе «Подлинность» предложено определение юглона методом ТСХ, в разделе «Количественное определение» –суммы нафтохинонов в пересчёте на юглон методом фотоколориметрии. Нормирование содержания суммы нафтохинонов для ореха грецкого листьев экстракта жидкого 1 : 1 установлено как «не менее 0,02 % в пересчёте на юглон»,ореха грецкого листьев экстракта сухого – «не менее 0,09 % в пересчёте на юглон».33Результаты фитохимического исследования листьев Urtica dioica позволили внести изменения в промышленный регламент производства субстанции«Крапивы экстракт жидкий» и ФСП «Аллохол, таблетки, покрытые оболочкой»(ЗАО «ВИФИТЕХ», г.

Москва).Обсуждение результатов исследованияНа основании результатов анализа литературы и собственных исследований разработаны методологические подходы к поиску и оценке перспективныхисточников нафтохинонов (рисунок 6) среди представителей 22 семейств, систематическое положение которых представлено согласно современной таксономической классификации цветковых растений APG III (2009) на рисунке 7.Схемы экспериментально апробированы на ЛРС, заготовленном от видовсем.

Boraginaceae, Juglandaceae и Urticaceae.При анализе филогенетических связей можно заключить, что некоторыенафтохиноны могут служить хемотаксономическим признаком отдельных с емейств. Например, шиконин характерен для сем. Boraginaceae исем. Euphorbiaceae, химафилин – для сем. Ericaceae.

Некоторые нафтохиноныраспространены в представителях самых различных семейств, например, юглон, плюмбагин и филлохинон.Также определены методологические подходы к разработке фармацевтических субстанций, ЛФ и ЛРП, содержащих нафтохиноны, и их анализу, которые включают в себя сочетание различных методов экстракции и выделенияцелевой группы веществ, а в ряде случаев применение ЛРС в нативном высушенном виде в составе сборов и чаев (рисунок 8). Апробирована эта схема наобразцах экстракта ореха грецкого листьев жидком и сухом, таблетках с листьями ореха грецкого, БАД «Юглон» и «Веноспас»; экстракте корней синяка русского и лекарственных форм на его основе – масляном растворе, мази и таблеток для рассасывания.Полученные результаты позволяют расширить новыми наименованиямиассортимент отечественного ЛРС, фармацевтических субстанций, ЛРП. Разработанные способы получения СО нафтохинонов решают вопросы импортоз амещения в этой сфере, так как основная часть референтных веществ производится мировым лидером Sigma-Aldrich.34Лекарственное растениеСведения о химическом составе ибиологических свойствах,применении в народной медицинеДанные осодержаниинафтохиноновФармакогностическаяоценкаЛокализация НХ в органах растенияи определение морфологическойгруппы ЛРСРесурсный потенциалСбор (для дикорастущего) или заготовка (для культивируемого) ЛРСНафтохиноны в свободном видеИзвлечение органическимрастворителемКачественный анализ:· Цветные реакции· Микросублимация· ТСХНафтохиноны в виде гликозидовКислотныйгидролизИзвлечение водой илиэтанолом 20%Количественный анализ:· Фотоколориметрия· УФ-спектроскопия· Денситометрия· ВЭЖХЗаключение о перспективности использования ЛРСРазработка и регистрация НД на ЛРСРисунок 6 – Методологическая схема изучения лекарственных растений,содержащих нафтохиноны35КлассПорядокСемействоНафтохинонMonocotsAsparagalesIridaceaeПлюмбагинBoraginaceaeШиконинMalpighialesEuphorbiaceaeFagalesJuglandaceaeЮглонUlmaceae1,4-НафтохинонRosalesUrticaceaeFabalesFabaceaeBrassicalesBrassicaceaeФиллохинонAmaranthaceaeEudicotsDroseraceaeCaryophyllalesNepenthaceaeПлюмбагинPlumbaginaceaePolygonaceaeMalvalesMalvaceaeMyrtalesLythraceaeГемигоссиполонЛавсонBalsaminaceaeEricalesGentianalesEbenaceaeПлюмбагинEricaceaeХимафилинRubiaceae3-гидрокси-1,4-нафтохинон2-карбоновая кислотаBignoniaceaeLamialesЛапахолVerbenaceaeDipsacalesCaprifoliaceaeФиллохинонРисунок 7 – Филогенетическое родство семейств, в которых обнаруженынафтохиноны36Подходы к получениюфармацевтических субстанций и ЛРПЭкстракцияНативное ЛРС и сборыЭкстракцияводой илиспиртом до 30%Экстракцияспиртом от 30%до 80%Экстракцияспиртом от 80%или неполярнымрастворителемРазработка ирегистрация НД наЛРСГликозидынафтохиноновГликозиды иагликонынафтохиноновСложные эфирыи агликонынафтохиноновСуммарный экстракт,очищенная фракция,содержащиеродственныенафтохиноныГидролизОкислениеНафтохиноны всвободном видеАнализ методами ТСХ, спектрофотометрии, ВЭЖХ и др.Препаративноеразделение и очисткаИндивидуальноевеществоСтандартный образецнафтохинонаРазработка и регистрация НД на стандартили субстанциюФармацевтическая субстанцияРазработка лекарственногорастительного препаратаРазработка и регистрацияНД на лекарственныйрастительный препаратРисунок 8 – Методологическая схема получения фармацевтических субстанцийи ЛРП, содержащих нафтохиноны37ОБЩИЕ ВЫВОДЫ1.