Диссертация (Влияние бариатрических операций на содержание витаминов у больных ожирением), страница 8

Однако у значительной части(26%)обследованныхИМТпревышал46кг/м2,чтотребовалонезамедлительной коррекции. Средний ИМТ у обследованных женщиноказался 44,7±47,2 кг/м2, а у мужчин- 40,3 ±9,5 кг/м2.Таблица 1. Распределение обследованных больных по ИМТИМТ (кг/м2 )КоличествоКоличествоВсегомужчинженщин35-394232740-4512354746-506202646Таким образом, 27% обследованных имели ожирение 1I степени, 47% ожирение III степени, а 26% - ожирение IV степени (морбидное).Уровень витаминов у каждого пациента определялся до и через 1 годпосле хирургического лечения. В исследование ретроспективно также быливключены пациенты, оказавшиеся некомплаентными к лечению и непринимавшие назначенные витамины после БО.Больные были разделены на 3 группы, в зависимости от видаперенесенногооперативноговмешательства.Видоперативноговмешательства определялся исходя из показателей ИМТ и желания больного.Бандажирование желудка проведено 20 пациентам (14 женщинам и 6мужчинам (средний возраст - 32,3± 6,5 лет, средний ИМТ -41,3±6,8 кг/м2).Продольную резекцию желудка перенесли 40 больных (38 женщин и 2мужчин, (средний возраст - 37,3± 11,8 лет, средний ИМТ - 41,1±17,8 кг/м2).Гастрошунтирование было выполнено 40 пациентам среди которыхбыло 26 женщин и 14 мужчин (средний возраст - 42,7±10,3 лет, средний ИМТ– 45,9 ± 4,0 кг/м2).Дополнительная группа исследуемых:Дополнительнуюгруппуобследованныхсоставили30больныхожирением, у которых изучалось влияние приема витамина В6 в течение годапосле оперативного лечения.Основанием выделения данной группы послужил тот факт, что внастоящеевремяуказывающихнаимеетсядостаточноенеобходимостьприемаколичествоисследований,препаратов,восполняющихнедостаток витаминов С, В1 и D у пациентов в послеоперационный период[86].Однако отсутствуют данные о восполнении дефицита витамина В6 послепроведения бариатрических операций.47В связи с этим, нами проведено исследование витамина В6 удополнительной группы больных, которой был назначен данный витаминпосле всех видов бариатрических операций (РБЖ=10, РРЖ=10, ГШ=10).Эту группу составили 18 женщин и 12 мужчин со средним возрастом38,5±3,1 года (рис.

5).35  30  25  20  Женщины  15  Мужчины  10  5  0  19-­‐29  Рисунок5.30-­‐39  40-­‐49  50-­‐59  Распределениепо60-­‐69  возрастумужчиниженщинвдополнительной группе.50  40  Женщины  30  Мужчины  20  10  0  35-­‐39  40-­‐45  46-­‐50  Рисунок 6. Распределение по ИМТ мужчин и женщин в дополнительнойгруппе.48Средний ИМТ до лечения составил 40,6±5,3 кг/м2 и статистически неотличался от основной группы (рис. 6, таблица 2).Таблица 2. ИМТ в основной и дополнительной группах в зависимости отвида операции (до лечения).ГруппыИМТ у больных до различныхбариатрических операций (кг/м2)РБЖРРЖГШОсновная (n=100)41,3±8,241,1±17,845,9±6,2Дополнительная (n=30)40,9±6,1*41,7±5,3*45,0±3,9**- р>0,05, при сравнении с основной группойЧерез год после РБЖ ИМТ в дополнительной группе составлял 33,8±2,6,после РРЖ -29,0±7,4 , после ГШ-26,7±2,0, что статистически не отличалосьот показателей основной группы (таблица 3).Таблица 3. ИМТ в основной и дополнительной группах в зависимости отвида операции (после лечения).ГруппыИМТ у больных через год после операций(кг/м2)РБЖРРЖГШОсновная (n=100)34,5±5,129,3±8,326,0±4,1Дополнительная (n=30)33,8±2,6*29,0±7,4*26,7±2,0**- р>0,05, при сравнении с основной группойКонцентрация витамина В6 в крови также, как и в основной группеизмерялась как до, так и через год после операции.49Контрольную группу составили здоровые люди (n=10) с нормальнымИМТ (средний ИМТ составил 24,9±4,2 кг/м2).

Средний возраст больныхданной группы был равен 46,4±4,3 лет.Критерии включения в группу-контроль:-возраст >16 лет-ИМТ<30 кг/м2-отсутствие заболеваний, нарушающих пищеварение и всасывание-отсутствие хронических заболеваний в состоянии декомпенсации-наличие заболеваний, сопровождающихся синдромом нарушенноговсасывания.2.2. МЕТОДЫ ОБСЛЕДОВАНИЯ2.2.1. Методы оценки клинического состояния больныхВсем больным проводилось обследование, соответствующее протоколуведения бариатрических больных в МКНЦ.

Были проанализированы жалобы,анамнез заболевания. Клиническое состояние больных оценивали поспециально разработанной карте (см. приложение 1).При оценке жалоб больного особое внимание уделялось клиническимпроявлениям витаминной недостаточности, а также оценивались общиежалобы, в том числе, указывающие на изменения в состоянии ЖКТ. Ванамнезе больных обращали внимание на давность течения заболевания,возможный пусковой механизм (изменение образа жизни, беременность ироды,приемгормональныхпрепаратов),появлениесопутствующихзаболеваний, попытки медикаментозной терапии, эффект или отсутствиеэффекта от диетотерапии.

Объективное осмотр включал изменение массы50тела, объема талии и бедер, распределение жировой клетчатки. Изучалисостояние дыхательной, сердечно-сосудистой, мочевыводящей системы иопорно-двигательного аппарата.2.2.2. Клинико-лабораторные методы исследованияИсследуемымбольнымпроводилисьлабораторныеисследования,включающие общеклинические и биохимические анализы крови, а такжеобщий анализ мочи. В общем клиническом анализе крови определялиуровень гемоглобина, гематокрита, эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов слейкоцитарнойформулой,скоростьоседанияэритроцитов.Такжеопределялись показатели свертывания крови, анализы крови на anti-HBs, antiHCV, RWи ВИЧ, а также определялась группа крови и резус-фактор.В биохимическом анализе крови определяли уровень белка, альбумина,билирубина, щелочной фосфатазы, калия, натрия, хлора, аспарагиновой иаланиновой аминотрансфераз, кальция, железа.

Исследования проводилисьна автоматическом анализаторе OlympusAU-400 c использованием реактивовфирмы Olympus.Исследования выполнялись в клинико-диагностической лабораторииМКНЦ под руководством зав. лабораторией к.м.н. К. К. Носковой,сотрудникам которой автор выражает искреннюю признательность.2.2.3.Определение уровня витаминов2.2.3.1.Определение уровня витамина С51В сыворотке и плазме крови витамин С обнаруживается как в видеаскорбиновой кислоты, так и в окисленной форме - дегидро-аскорбате. Обеформы биологически активны. При данном методе оценки, окислениевозникает до измерения результата, поэтому определяется концентрацияобеих форм.

Концентрация витамина определяется по калибровочнойкривой. Принцип метода: образцы крови вносят в лунки и добавляют 50 млсвежеприготовленного рабочего раствора. Пластину микротитра покрываютфольгой и выдерживают в течение 3 часов при Т 37 С. Далее добавляют 150мл сто-раствора в лунки. Далее взбалтывают пластину микротитра вгоризонтальном шейкере в течение 20 минут при температуре 15- 30 С(предварительно убрав фольгу). Абсорбция измеряется при длине волны 492нм.2.2.3.2.Определение витамина В6Принцип метода: предварительно обработанные образцы крови вносят влунки микропланшет с Saccharomycescerevisiae.Добавление витамина,присутствующего в стандартах или образцах, приводит к витаминзависимому росту, до тех пор, пока витамин не израсходуется.

Послеинкубации при 30 С в течение 44-48 часов, рост Saccharomycescerevisiaeизмеряется турбидиметрически при длине волны 610-630 нм (или,альтернативно, при длине волны 540-550 нм) на микропланшетномфотометре. По полученным значениям оптической плотности для серийныхразведений строится калибровочная кривая. Количество витамина в образцепрямо пропорционально считанному значению оптической плотностиобразца и вычисляется по калибровочной кривой.2.2.3.3. Определение витамина D52Набор для иммуноферментного анализа 25- ОН витамин D ИФА(25OHVitaminDELISA) предназначен для количественного invitro определения25-ОН витамина Dв сыворотке и плазме крови. В набор включены 8луночные стрипы, разделяемые на отдельные лунки, с иммобилизованнымимоноклональными антителами к 25-ОН витамину D. На первой реакционнойстадии в лунках инкубируют калибраторы и исследуемые образцы,разведенные с 25-ОН витамином D, меченным биотином. В течениеинкубации неизвестное количество витамина Dв образце пациента иизвестное количество меченного биотином витамина конкурируют за сайтысвязываниясиммобилизованнымиантителами.Несвязавшийся25-ОНвитамин D удаляется промывкой.

Для выявления связавшегося меченногобиотином 25-ОН витамина Dпроводят вторую инкубацию, используястрептавидин, меченный пероксидазой. Связавшаяся пероксидаза вызываетсяцветное окрашивание во время третьей реакции с субстратом ТМБ(тетраметилбензидином).Интенсивностьформирующегосяокрашиванияобратно пропорциональна концентрации 25-ОН витаминаD в образце.Результаты рассчитываются с помощью стандартной калибровочной кривой.2.2.3.4. Определение ретинол связывающего белка (РБС)Принцип метода: перед определением концентрации РСБ необходимовымыть пластину микротитра специальным буферным раствором. Послеэтого перевернуть пластину и поместить на адсорбирующую бумагу. Далеедобавить поместить образцы крови в лунки с последующей инкубацией притемпературе 15-30 С в течение 1 часа в горизонтальном миксере.Отфильтровать содержимое пластины и вымыть лунки с помощью буферногораствора. Добавить разведенный конъюгат в каждую лунку. Инкубировать втечение 1 часа при комнатной температуре в горизонтальном миксере.Отфильтровать содержимое пластины и вымыть лунки с помощью буферного53раствора.

Добавить 100 мл основного раствора. Инкубировать в течение 1020 минут при комнатной температуре, немного взбалтывая до измененияцвета раствора. Добавить 100 мл стоп-раствора и встряхнуть. Немедленноопределить абсорбцию при длине волны 450 нм.2.2.3.5. Определение витамина В5Принцип метода: предварительно обработанные образцы крови вносят влункимикропланшета,покрытыеLactobacillusplantarum.Добавлениевитамина, присутствующего в стандартах или образцах, приводит к витаминзависимому росту, до тех пор, пока витамин не израсходуется. Послеинкубации при 37 С в течение 24 часов, рост Lactobacilusplantarumизмеряется турбидиметрически при длине волны 610-630 нм (или,альтернативно, при длине волны 540-550 нм) на микропланшетномфотометре.

По полученным значениям оптической плотности для серийныхразведений строится калибровочная кривая. Количество витамина в образцеравно считанному значению оптической плотности образца и вычисляется покалибровочной кривой.2.2.3.6. Определение ниацинаПринцип метода: предварительно обработанные образцы крови вносят влункимикропланшета,покрытыеLactobacilusplantarum.Добавлениевитамина, присутствующего в стандартах или образцах, приводит к витаминзависимому росту, до тех пор, пока витамин не израсходуется.