Диссертация (Лиганды рецептора NKG2D в комплексной оценке иммунитета у онкологических больных и разработка метода адоптивной иммунотерапии), страница 11

В последние десятилетия повышенный интерес возник поотношению к вопросу культивирования лимфоцитов, так как исследования в области противоопухолевой активности лимфоцитов животных и человека, адаптированных к росту in vitro дают ряд преимуществ: возможность получать нужное количество клеток для любых экспериментов, позволяющих проводить манипуляции с ними и осуществлять контроль способами, невозможными для исследований in vivo, возможность изучать специализированные свойства лимфоцитов в строго контролируемых условиях окружающей среды вне коррелятивных влияний целостного организма и, наконец, существование банков постоянных линий опухолевых клеток создает условия для проведения исследований поцитотоксической активности лимфоцитов, что важно для выработки стандартных подходов к решению ряда проблем в биологии и медицине.Не вызывают сомнения перспективы использования клеточной ИТ, втом числе активированными лимфоцитами, которая, по мнению журналаScience, продолжает занимать лидирующие позиции по числу публикаций в48последние годы [148].

Однако к настоящему времени многие аспекты, характеризующие применение в клинической практике АЦЛ, остаются мало изучены, а данные литературы часто противоречивы.Как известно методы ИТ, основанные на стимуляции лимфоцитов опухолевым антигеном, цитокинами, индукторами пролиферации и дифференцировки или сочетанием данных воздействий достаточно известны и хорошо себязарекомендовали при лечении различных злокачественных новообразований[151, 383]. Однако в подавляющем большинстве исследований их применениепредставляло собой этап в лечении опухолевых заболеваний, обычно следующий за оперативным и/или специфическим лечением.

Данные исследований последних лет доказывают, что совместное применение ИТ с химио- (ХТ) и / илилучевой терапией (ЛТ) позволяет достигнуть лучший результат в показателяхвыживаемости больных, чем при проведении монотерапии. Также показано, чтопредварительное лечение противоопухолевыми вакцинами, наоборот, можетповысить ответ на последующий курс ХТ, при этом индуцированный ИТ Т-клеточный ответ не только не подавляется стандартными дозами химиопрепаратов,но и приводит к увеличению показателей выживаемости больных [87]. Мы полагаем, что данный подход к применению ИТ может уступать в эффективностиодновременному использованию комплекса методов лечения, поскольку приналичии перерыва в терапии может восстановиться ряд механизмов иммуннойтолерантности опухоли и произойти её диссеминация.

Поэтому возникает вопрос, как скомбинировать проведение иммунотерапии с основным лечением.Иммунотерапия на основе NK-клеток является перспективным направления в терапии опухолей. Использование NK-клеток не ограничено опухолевымиантигенами, которые должны быть предварительно получены и охарактеризованы. На этом принципе основано применение ДК вакцин и CTL для активации,которых необходимо наличие опухолевого антигена.

NK-клетки имеют антигеннезависимую цитотоксическую активность против опухолевых клеток. В рядеисследований было показано, что увеличение количества NK-клеток, инфильтрирующих различные гистологические типы опухолей, такие как глиобластома,49метастазы солидных опухолей в легкие, рак желудка, толстой кишки, головы ишеи, В-клеточная лимфома коррелирует с задержкой развития опухоли и ассоциировано с хорошим прогнозом [210, 214, 232, 284, 371].

Тем не менее, успешное применение терапии с использованием NK-клеток встретило несколько препятствий. Помимо стратегий уклонения опухоли от иммунного надзора, секреции иммуносупрессивных цитокинов и подавления активирующих лигандов, существуют другие трудности, присущие солидным опухолям; NK-клетки должныне только прибыть на место локализации заболевания, но и проникнуть в капсулуопухоли, чтобы проявить свои эффекторные функции. Кроме того, клетки-мишени по своей природе должны быть восприимчивы к NК-опосредованной цитотоксичности. Фактически перспектива соединения ИТ с использованием NKклеток с нацеливанием на иммуносупрессивное микроокружение опухоли илииммунологические «ключевые точки» – «чек пойнты» (check point), такие, какблокада KIR, особенно актуальна для лечения солидных опухолей [284].

Несколько ранних стадий клинических испытаний продемонстрировали целесообразность АИТ с аутологичными (полученными из самого организма) или аллогенными (полученными от донора) активированными ex vivo NK-клетками у пациентов с рефрактерными солидными новообразованиями [184]. Однако в настоящий момент недостаточно данных, подтверждающих клиническую эффективность NK-клеток в лечении солидных опухолей.Особый интерес проявляется в отношении к клеточной ИТ. Клиническиеисследования демонстрируют, что АИТ эффективна при лечении рака [162, 323],так как генетические механизмы ускользания опухоли от иммунной атаки цитотоксических лимфоцитов одинаковы для большинства нозологических форм злокачественных новообразований.

Развитие АИТ началось с генерации клеток лимфокин-активированных киллеров (ЛАК) для лечения рака еще в середине 80-хгодов прошлого столетия [311]. ЛАК-клетки получали из МНК периферическойкрови здоровых доноров и онкологических больных после их культивированияin vitro в присутствии IL-2. Данный интерлейкин действует на пролиферацию иактивирует цитотоксический потенциал NK-клеток и CTL [47].50При различных онкологических заболеваниях ЛАК-клетки вводят каквнутривенно, так и внутрикожно, также при внутрибрюшной и внутриплевральной биотерапии и в комбинированной иммунотерапии с традиционнымиметодами хирургического лечения, ХТ и/ или ЛТ и гипертермией [27, 37, 77,82].

ЛАК-клетки способны избирательно убивать циркулирующие в кровиопухолевые клетки. Поэтому их чаще вводят внутривенно в целях антиметастатического эффекта.На сегодняшний день нет обоснованных клинических рекомендаций поспособу введения клеток в организм. Общепринятые представления подразумевают как внутривенное, так внутрикожное, подкожное, введение в лимфатический коллектор или обкалывание опухоли. Исследования по распределению клеток после различных путей введения были проведены в основном для ДК вначале 2000-х гг.

[176]. Показано, что клетки, инъецированные внутривенно, обнаруживаются в легких, в печени и селезенке, а клетки, введенные подкожно иливнутрикожно, могут мигрировать в сторожевые лимфатические узлы с различной эффективностью, хотя значительное количество клеток остается в месте инъекции. Однако эти эксперименты, были ограничены их чувствительностью идали ответы не на все вопросы по реальному биораспределению клеток. Возможно некоторые сигналы отражали распределение оторвавшейся метки или фагоцитирующих клеток, поглотивших адоптивно перенесенные клетки. Болеетого, способность клеток мигрировать во вторичные лимфоидные органы можетзависеть от их состояния активации.

Во время культивирования клетки увеличивают уровень экспрессии различных молекул адгезии, включая CD44, LFA-1,CD49d, повышается активность CCR7. Однако в некоторых случаях клетки утрачивают экспрессию CD62-лиганда и CCR5. В отсутствие лиганда CD62 такиеклетки, как ожидается, не будут эффективно проникать через высокий эндотелийвен при внутривенном введении и будут накапливаться в легких. Очевидно, чтодолжен быть выбран оптимальный путь введения АЦЛ для того, чтобы такой иммунотерапевтический подход был максимально иммуногенным для больных.51Имея опыт применения ЛАК-терапии в клинической практике, многиеавторы считают, что наиболее эффективным методом для лечения различныхформ лейкоза и злокачественных новообразований (меланома, рак легкого, ракяичников, печени, молочной железы, шейки матки и других) является терапияЛАК-клетками в сочетании с IL-2 [28, 29, 322, 324].

Механизм действия ЛАКсостоит в прямом цитотоксическом поражении аутологичных опухолевых клеток, а также в их способности синтезировать и высвобождать биологическиактивные вещества, такие как цитокины и хемокины [47], действие которыхположительно сказывается на улучшении функций иммунной системы в целом. Другие авторы считают, что цитокины, в том числе и IL-2, при введениив организм пациента в терапевтических дозах часто вызывают побочные эффекты и сопровождаются выраженной токсичностью III и IV степени, чтоограничивает их применение в клинике [31].Первоначально в Национальном институте рака (США) Стивен Розенберг сколлегами использовали ЛАК-клетки (поликлональная фракция NK- и T-клеток),которые были активированы ex vivo с помощью IL-2 и реинфузированы больныммеланомой и почечно-клеточным раком и получили объективную регрессию опухоли у 15-20% пролеченных пациентов [324].

Для активации противоопухолевойактивности лимфоцитов авторы применили высокие дозы IL-2. Полагали, чтобольшие дозы цитокина после инфузии ЛАК-клеток помогут пролонгировать ихперсистенцию и активацию in vivo. Однако лечение показало ограниченную эффективность из-за низкого содержания NK-клеток в циркуляции и наличия некоторой токсичности высоких доз IL-2. Кроме того, в крови больных не было обнаружено адоптивно перенесенных клеток. Также введение IL-2 вызывало ряд побочных эффектов, которые ограничивали проведение комбинированной терапиии в ряде случаев требовали терапевтической коррекции. Результаты рандомизированного исследования показали, что комбинация IL-2 с ЛАК-клетками болееэффективна, чем IL-2-терапия [47]. Введение ЛАК-клеток или внутриполостноговведения IL-2 в низких дозах показали хорошие результаты при лечении опухо-52левых серозитов [75-77, 88].