Диссертация (Нарушение функции подоцитов и механизмов самозащиты почки - значение в оценке активности и прогноза хронического гломерулонефрита), страница 6

Повышение выработки МСР-1 происходит в ответ на компонентыпротеинурии [330], а также в ответ на стимуляцию провоспалительнымицитокинами [103,250], в том числе ИЛ-1 и фактора некроза опухоли-  (ФНО). Согласно данным, полученным на животных моделях нефрита, а также приразличных заболеваниях почек у человека, CCL2/МСР-1 играет важную роль впрогрессировании гломерулонефрита и формировании почечной недостаточности[324].Хемокины активируют клетки после связывания со специфическимирецепторами на поверхности лейкоцитов, тубулярных клеток и гладкомышечныхклеток сосудов. Стимуляция этих рецепторов является триггером для цепивнутриклеточных реакций, ведущих к образованию инозитол-трифосфата,высвобождению кальция и каскаду внутриклеточных митогенактивированныхпротеинкиназ (МАРК) с активацией NFkB [317].На культуре клеток было доказано, что МСР-1 не только обеспечиваетпривлечение лимфоцитов и моноцитов из сосудистого русла в очаг воспаления,нотакжеявляетсяпровоспалительнымфактором,которыйактивируетрезидентные клетки почки – подоциты и тубулярные клетки с их последующейтрансдифференциацией в миофибробласты, мезангиальные клетки, резидентныефибробласты с активацией синтеза коллагена [51].

Помимо этого, привоздействии на тубулярные клетки in vitro [317], вызывает повышение секрецииэтими клетками провоспалительных цитокинов, таких как ИЛ-6 иTGF β.Повышение экскреции MCP-1 с мочой происходит в дебюте и приобострениях почечного процесса. Увеличение количества МСР-1 в моче выявленоу животных с прогрессирующей нефропатией, уровень МСР-1 в мочекоррелировал с экскрецией белка почечного происхождения [289]. КоличествоМСР-1 в моче больных с волчаночным нефритом коррелирует с клиническими иморфологическими признаками активности нефрита: числомполулуний,степенью интерстициальной инфильтрации макрофагами, тубулярной атрофией,степенью ремоделирования тубуло-интерстиция [325].

Экскреция МСР-1 с мочой30увеличивается при гломерулонефрите у человека, коррелируя с активностьюзаболевания [17,322].МСР-1 играет роль в прогрессировании гломерулярных изменений[235,294]. В экспериментальной модели транзиторного иммунокомплексногонефрита мышей на ранних этапах происходит синтез МСР-1 и его рецепторовклетками клубочка, что проявляется нарастанием протеинурии.

Однако уже напике протеинурии и максимальной лейкоцитарной инфильтрации почечной тканиэкспрессия этого хемокина и его рецепторов клетками клубочка начинаетуменьшаться и возвращается к исходным значениям в случае выздоровления резолюции нефрита [7]. При быстропрогрессирующем нефрите у человека МСР-1экспрессируется клетками полулуний и париетальным эпителием, а такжетубулярными клетками и лимфоцитами, инфильтрирующими интерстиций [276].Введение нейтрализующих антител к МСР-1 в эксперименте приводило куменьшению выраженности мочевого синдрома, проявлявшегося протеинурией,а морфологически отмечалось снижение степени инфильтрации клубочковмакрофагами и накопление склероза [321].Нейтрализация МСР-1 у мышей с нефритом с помощью моноклональныхантител сопровождалось значительным уменьшением количества полулуний вгломерулах и отложения в интерстиции компоненов экстрацеллюлярногоматрикса, в том числе коллагена [183].По современным представлениям традиционно применяемые в нефрологиипреднизолон и ингибиторы кальцийнейрина а также ингибиторы АПФ иблокаторы рецепторов к ангиотензину оказывают антихемокиновое действие, вчастности, через влияние на ядерный фактор NF-kB [236].MCP-1 является профиброгенным хемокином, так как участвует в активациисинтеза клетками лимфоцитарно-макрофагального инфильтрата профиброгенныхцитокинов, в частности трансформирующего фактора роста - (TGF-) [104,272].311.3.2 Интерлейкин-6Интерлейкин-6 – полипептид с молекулярной массой 22-27 кДа, которыйсекретируется активированными моноцитами, макрофагами, фибробластами вответ на провоспалительные стимулы, такие как ФНО-α, ИЛ-1бета, оксидантныйстресс [258].

Резидентные клетки почки – подоциты, эндотелиальные клетки,мезангиальные и тубулярные клетки могут секретировать ИЛ-6. Подоциты –единственные клетки почечной ткани, которые экспрессируют рецепторы к ИЛ-6[68,225]. При добавлении к культуре подоцитов провоспалительных медиаторов(ЛПС, ФНО-альфа, ИЛ-1 бета) отмечено нарастание концентрации ИЛ-6[171,286].

Подоциты являются клетками, которые могут экспрессироватьрецепторы к ИЛ-6, их количество также зависит от провоспалительных стимулов[214]. Anderson M и соавт. определили, что под действием ангиотензина II втечение 6–24 часов, отмечается фосфориллирование STAT3, который являетсяодним из белков-посредников, обеспечивающих ответ клетки на сигналы,поступающие через рецепторы интерлейкинов и факторов роста, в подоцитах, чтовлияет на дифференциацию, клеточный цикл и другие патофизиологическиепроцессы в этих клетках [28,31]. Этот эффект блокируется ингибиторамикальцийнейрина. Во многих экспериментальных моделях делеция гена STAT3 вподоцитах приводит к отсутствию гломерулярного и интерстициальногоповреждения [73,92,185].ИЛ-6 вызывает также пролиферацию мезангиальных клеток и накоплениемезангиального матрикса [106,184].

Взаимодействие ИЛ-6 с эндотелиальнымиклетками стимулирует образование воспалительного инфильтрата - привлечениелейкоцитов и секрецию хемокинов. У мышей с отсутствием ИЛ-6 отмечаетсяуменьшение количества лейкоцитов в области воспаления, а также снижениеэкспрессии адгезивных молекул и продукции хемокинов [262]. В тубулярныхклеткахИЛ-6активируетпродукциюколлагенаIтипаизапускаетинтерстициальный фиброз, что ассоциировано прежде всего с активацией STAT3[252].32В экспериментальных и клинических исследованиях установлено, что ИЛ-6способствует прогрессированию хронического гломерулонефита.

Повышениеэкспрессии ИЛ-6 в ткани почки и повышение экскреции с мочой было выявленопри мезангиопролиферативном гломерулонефрите, что сопровождается высокойактивностью и ухудшением прогноза [119]. В модели волчаночного нефритаповышение экскреции ИЛ-6 с мочой отражает степень повреждения ткани почкии прогрессирование, а у трансгенных мышей с повышенной экспрессией ИЛ-6развивается протеинурия и почечная недостаточность [91,140,179].1.3.3 Матриксные металлопротеиназы (ММП)Баланс между синтезом и деградацией компонентов экстрацеллюлярногоматрикса (ЭЦМ) является основой структурной и функциональной целостностиклубочка.

Изменения экспрессии или активности ММП непосредственноучаствуютвинтенсивностиобменаЭЦМимогутспособствоватьгломерулосклерозу и снижению функции почек.Матриксные металлопротеиназы – многочисленное семейство цинксодержащих и цинк –зависимых эндопептидаз, в настоящее время известно около28 различных ММП. Матриксные металлопротеиназы расщепляют компонентыэкстрацеллюлярного матрикса, главным образом коллаген IV типа – компонентбазальных мембран. Помимо компонентов экстрацеллюлярного матрикса ММПрегулируют активность других, нематриксных субстратов, например ФНО-α,факторов роста, ангиотензина-II, TGF-β, плазминогена, эндотелина и т.д.

и играютцентральную роль в процессах индукции и прогрессировании воспаления, а такжевосстановлении почечной ткани [82,99,264,318].ММП-2 (или желатиназа А) имеет молекулярный вес 72 кДа, расщепляетколлаген IV типа, фибронектин, ламинин, желатин, эластин и нематриксныесубстраты - TGF-β, МСР, эндотелин, плазминоген. ММП-9 (или желатиназа В)имеет вес 92 кДа, расщепляет главным образом коллаген IV типа, а такжетрансферрин, ангиотензин I и II, плазминоген, про- TGF-β, ИЛ-1ра.

ММП-233относится к конституциональным ферментам, в то время как ММП-9активируется плазмином/плазминогеном и регулируется цитокинами и факторамироста [79].Активность металлопротеиназ контролируется эндогенными тканевымиингибиторами (ТИМП). ТИМП (21-28 кДа) – специфические эндогенныеингибиторы, связывающие ММП. Среди них 4 члена семейства (TIMP-1,-2,-3,4)идентифицированы у человека. ММП-2 и ММП-9 формируют проэнзимныекомплексы с эндогенными ингибиторами – ТИПМ-2 и ТИПМ-1 соответственно.Увеличение индекса ТИПМ /ММП свидетельствует о более полном контролепротеолитической активности металлопротеиназ [45].ММП придают важное значение в процессах развития воспаления,формирования протеинурии, гломерулосклероза и тубуло-интерстициальногофиброза.

В модели мышей с дефицитом α3 цепи коллагена IV типа отмечалосьувеличение экспрессии ММП-2 и ММП-9 в клубочках за месяц до появленияпротеинурии. В более поздней фазе заболевания на этапе формированияинтерстициального фиброза было установлено перераспределение экспрессииметаллопротеиназ с переходом на тубуло-интерстиций. В этой модели ингибицияММП-2 и -9 с помощью фармакологических агентов перед появлениемпротеинурии приводило к торможению прогрессирования заболевания иувеличению выживаемости. Напротив, подавление экспрессии ММП послеразвития протеинурии приводила к ускоренному интерстициальному фиброзу.Таким образом, на ранних стадиях болезни почек экспрессия ММП способствуетпрогрессированию заболевания, в то время как на более поздних этапах ММПнеобходимы для расщеплении компонентов ЭЦМ и могут препятствоватьускоренному фиброзу почечной ткани [263,264,357].Повышение экспрессии ММП-2, -9 в почке было показано у мышей сволчаночным нефритом, анти-Thy-1.1-нефритом и у крыс с Хеймановскимнефритом[201,221,287].Подавлениеактивностиметаллопротеиназвэксперименте у животных уменьшает отложения коллагена в ткани почки,34количество миофибробластов и степень гломерулосклероза [205,287].

В моделиФСГС у мышей с отсутствием гена Mpv17 и персистирующим высоким уровнемММП-2отмеченоразвитиетяжелойпротеинуриииускоренногогломерулосклероза [257].Повышенные уровни ММП и ТИМП были также установлены приразличныхформахгломерулонефритаучеловека,включаябыстропрогрессирующие формы (в рамках ANCA васкулита), IgA нефропатию,острыйпостинфекционныйгломерулонефрит[24,128,149,309].Вмоделимембранозной нефропатии было показано повышение экспрессии ММП-9 вклубочках почек, преимущественно в подоцитах [201]. Экспериментальныеданные и результаты, полученные у человека, предполагают, что повышенныйуровень экспрессии ММП способствует прогрессированию заболевания, аповышенная активность ММП – структурным повреждениям в ткани почки приХГН.Немаловажную роль играет участие ММП в привлечении клеток в очагвоспаления [176]. ММП при расщеплении молекул субстрата могут играть рольв экспозиции иммунореактивных эпитопов. ММП-9 поддерживает воспалениепутемраcщепленияхемотаксическимиколлагенасвойствамидлянафрагменты,нейтрофиловикоторыеобладаютстимулируютихквысвобождению еще большего количества ММП-9 [342].

Более того, ММП-9стимулирует миграционные свойства дендритных клеток и могут связываться ско-стимуляторными молекулами на поверхности клеток [122,346]. Ингибицияжелатиназ тормозит пролиферацию лимфоцитов in vitro и in vivo [47].ММПявляютсячастьюпроцессаэпителиально-мезенхимальнойтрансформации (ЭМТ) клеток ткани почки – подоцитов и тубулярных клеток. Впроцессе ЭМТ происходит дедифференциация подоцитов и приобретение имимаркеров мезанхимальных клеток, в том числе экспрессия ММП-9 [177]. ММП-2и ММП-9 локализуются в зонах ЭМТ тубулярного эпителия, индуцируютпоявление миофибробластов [63,298]. Повышение экспрессии ММП-2 в35проксимальномтубулярномэпителиистимулируетразрушениеГБМитубулярную атрофию, а также миграцию клеток, подвергшихся трансформации вмиофибробласты, в интерстициальную ткани почки [64].Синтез, накопление матрикса и утолщение ГБМ происходит под влияниемпровоспалительных факторов , в том числе TGF-β, ФНО, ИЛ-1, в то время какдеградация осуществляется системой ММП/ТИМП.