Диссертация (Создание поликомплексных матричных систем с использованием карбополов и противоположно заряженных полиэлектролитов и изучение их фармакологических свойств как носителей лекарственных веществ), страница 10

Измерение размера и поверхностного заряда частицинтерполиэлектролитных комплексовИзмерение размера и заряда частиц было необходимо для объяснениямеханизмов мукоадгезии. Была приготовлена суспензия из образцов ИПЭК вконцентрации 0,01%, диспергирована, затем проводили измерение заряда иразмера частиц на приборе Zetasizer Nano ZS (Malvern, Англия) методомдинамического светорассеяния.2.2.9. Технология получения быстродиспергируемых таблеток иопределение времени их дезинтеграцииДля получения быстродиспергируемых таблеток были приготовленысиропы мальтодекстрина в различной концентрации (81,8%, 62%, 40,9%). В этомсиропе диспергированы ИПЭК NAA-1-EPO 1-2, NAA-1-EPO 1-1, C71g-EPO 1-1 вконцентрации 6, 10, 18, 20, 30 %.

Затем высушены лиофильно в течение суток притемпературе -20°С (в аппарате для лиофильной сушки Labconco). С цельюснижения образования пузырей в процессе сушки были подобраны ПАВ: спан-80и твин-80. Все этапы получения быстродиспергируемых таблеток приведены нарис. 2.Оптимальный составкомпонентовПодбор оптимальнойконцентрации ИПЭКПодбор оптимальнойконцентрациисиропамальтодекстринаПодбор оптимальногоПАВ, егоконцентрацииРис. 2.

Этапы получения быстродиспергируемых таблеток.57Быстродиспергируемыетаблетки,полученныенаосновесиропамальтодекстрина DE 38 40,9%, содержащие ИПЭК C71g-EPO 1-1, NAA-1-EPO 12, спан-80 0,5%, были помещены в сосуд, содержащий 200 мл деионизированнойводы. Фиксировалось время от момента помещения таблетки в среду до ееполного разрушения. Оценка полного или неполного разрушения таблетокпроводилась визуально.

Испытания были проведены в 5-кратном повторении[78].Фармакологические исследования2.2.10. Исследование токсичностиДля«острой»проведения фармакологических исследования по определениютоксичностиитоксикологическиххарактеристикполученныхлабораторных образцов ИПЭК были отобраны 145 белых беспородных мышейсамцов массой 17-25 г. и 145 крыс. Исследования проволились согласно«Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новыхфармакологических веществ (под редакцией Хабриева Р. У., 2005)», «Руководствупо проведению доклинических исследований лекарственных средств» (МироновА.Н., Бунатян Н.Д.

и др., 2012).До начала экспериментов все животные содержались в стандартныхусловиях вивария с естественным световым режимом на полнорационнойсбалансированной диете (ГОСТ Р 50258-92) с соблюдением Международныхрекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных,используемых при экспериментальных исследованиях (1997), а также правиллабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ(ГОСТ З 51000.3-96 и 51000.4-96). Все исследования были согласованы скомитетом по этической экспертизе.Было исследовано 5 образцов ИПЭК и 6 образцов индивидуальныхполимеров на основе которых они получены:1 –я группа состояла из образцов ИПЭК:Образец №1: Carbopol® 71g/ Eudradit® EPO (С71g/ EPO);58Образец №2: Carbopol® 10 Ultrez/ Eudradit® EPO (С10/ EPO);Образец №3: Carbopol® 2020/ Eudradit® EPO (С2020/ EPO);Образец №4: Noveon® AA-1/ Eudradit® EPO (N AA-1/ EPO);Образец №5: Carbopol® 71g/ Хитозан (С71g/ ХТЗ);2 –я группа состояла из образцов полимеров:Образец №6: Carbopol® 71g;Образец №7: Carbopol® 10 Ultrez;Образец №8: Carbopol® 2020;Образец №9: Noveon® AA-1;Образец №10: Eudradit® EPO;Образец №11: Хитозан.Были приготовлены образцы композиций в дозах 1000, 2000 и 3000 мг/кг вкрахмальнойслизи,которыевводилисьвжелудоксиспользованиемспециального зонда с целью определении «острой» токсичности.

Каждая дозабыла введена 6 мышам и 6 крысам. Параллельно контрольная группа животныхполучала крахмальную слизь в том же объеме. Был проведен анализ картиныобщего действия (наличие угнетающего или возбуждающего действия со стороныцентральной нервной системы, отличительные особенности в поведении всравнении с животными контрольной группы).Оценку действия композиций на центральную нервную систему проводилипо изменению ориентировочно-исследовательской реакции и двигательнойактивности животных. Метод «открытое поле» на установке «Открытое поле»былиспользовандляизучениядвигательнойиисследовательской(ориентировочной) реакции животных [82]. В «открытом поле» в течение 3 минрегистрировали следующие параметры: 1) - количество пересечений линий ивертикальных стоек, что отражает неспецифический уровень возбуждения; 2) количество заглядываний в отверстия как показатель исследовательскойактивности животного.Результаты экспериментов обрабатывали статистически с вычислением tкритерия Стъюдента.592.2.11.

Определение концентрации диклофенака натрия в плазме кровикроликов методом высокоэффективной жидкостной хроматографииДля фармакокинетическихисследований были отобраны12 кроликов-самцов породы Шиншилла со средним весом 3,70 кг после ночного 12-часовогоголодания [32]. Каждому кролику было введенопо 1 таблетке (массой 0,15,состава: диклофенака натрия 0,1; ИПЭК 0,05). Через определенные интервалывремени:1; 2; 4; 8; 12 и 24 ч с момента введения отбирали пробы крови из ушнойвены кроликов по 0,5-0,7 мл. Затем после получения сыворотки крови к нейдобавляли 0,2 мл 0,1 н раствора соляной кислоты, 3 мл хлороформа,центрифугировали. Затем к 2,6 мл нижнего органического слоя добавляли 150 мкл0,1 н раствора гидроксида натра, центрифугировали при 5000 об/мин 10 мин.После получения щелочного реэкстракта вводили через дозатор в хроматограф.Измерения проводились на хроматографе LC-20 Prominence (Shimadzu,Япония) со встроенным УФ/Вид-спектрофотометрическим детектором при длиневолны 280 нм.

Используемые в работе спирт этиловый ректифицированный,уксусная кислота и фосфорная кислота – фармакопейного чистоты. Анализпроводился с подвижной фазой – 96% спирт, 0,15 М водный раствороднозамещенного фосфата натрия, уксусная кислота в соотношении 55:40:5.Хроматографическое разделение проводили при комнатной температуре (25±2ºС)на аналитической колонке с привитой фазой С18 размером 4,6х250 мм (зернениесорбента 10 мкм). Объемная скорость элюирования составляла 1 мл/мин, времяпоявления хроматографического пика составляло 11-12 мин. Концентрацию ДНрассчитывалипометодуабсолютнойкалибровки.Основныефармакокинетические показатели рассчитывались в программе по прикладнойфармакокинетике Thermo Kinetica® (Version 5.0, Build 5.00.11; Thermo FisherScientific, США).Концентрацию препарата рассчитывали по методу абсолютной калибровки.Для этого к 0,5 мл интактной сыворотки крови, полученной обычным способом,добавляли известное количество препарата (стандартный раствор в этиловом60спирте) для получения растворов с концентрацией 0,5, 1, 2, 4 и 7.5 мкг/млсыворотки(5растворов)[31].Полученныекалибровочныерастворыобрабатывали и анализировали описанным выше способом.

Калибровочныйграфик в изученном интервале концентраций представлял собой прямую линию.61ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ3.1. Обоснование выбора полимеров и метода получения ИПЭКДля получения ИПЭК была выбрана рПАК, выпускаемых под торговоймаркой Carbopol®, а именно 71g, 2020, Ultrez 10, Noveon AA-1 в качествеполианиона. В качестве поликатиона использовался линейный ПЭ Eudragit® EPO,противоионом была выбрана каждая из вышеуказанных марок Carbopol®.

Кромеэтого в качестве еще одного поликатиона был использован ХТЗ, а в качествепротивоиона – один из марок Carbopol® 71g. Используемые марки полимераCarbopol® отличаются друг от друга расстоянием между сшивками, молекулярноймассой полимера, вязкостью растворов, а также типом (А, B, C). Так как полимерC71g имеет наибольшее расстояние между сшивками, интересным былоисследовать возможность его взаимодействия с линейным жесткоцепочечнымполимером ХТЗ, с перспективой встраивания линейного полимера в пространствомежду поперечными сшивками рПАК.Выбор этих (со)полимеров был обусловлен их оптимальными физикохимическими характеристиками (таблица 2).Carbopol® является рПАК, то есть имеет поперечные сшивки междуполимерными цепями.

Главным условием для синтеза образцов ИПЭК являетсяпредварительная экспозиция полимера в растворе, так как это необходимо длясмачивания и набухания порошка полимера. Далее, спустя сутки после выдержкиполимера в водной среде и доведения дисперсии до нужного значения рНвзаимодействия, к нему добавляется покапельно раствор линейного ПЭ. Именнотакой порядок добавления компонентов был выбран в связи с высокой вязкостьюдисперсии Carbopol®. Растворы ПЭ были растворены в водном растворе сдобавлением 1н раствора уксусной кислоты, далее также доведены до рНвзаимодействия. В качестве рН взаимодействия было подобрано значениенаиболее близкое к нейтральному, в то же самое время такое, при котором обавзаимодействующих полимера находятся в растворенном и ионизированномсостоянии и способны к взаимодействию. Далее по мере добавления раствора62Таблица 2Физико-химические характеристики используемых марок Carbopol®МаркаТипВязкость (0,5%, ММ,pH 7,5), Па·сКДаC2020КарбомеринтерполимерТип В(сополимер АКи ЭГ, сшитыйАЭПЭ)КарбомергомополимерТип А(ПАК,сшитая АЭПЭ)Поликарбофил(ПАК,сшитая ДВГ)КарбомерИнтерполимерТип А(ПАК,сшитая АЭПЭ)4 700 – 7 70014 500ММмеждусшивками,КДа11,4400 – 1 1003 000237,6200 – 1 2003 000С71gN AA-1C 10–2–245 000-65 000–2Примечания:1– выпускается частично нейтрализованным;2– данные отсутствуют.поликатиона к полианиону происходит образование ИПЭК в виде осадка,которыйпотомисследуетсякакновыйносительдляпероральнойконтролированной доставки ЛВ.Исходные ПЭ были взяты в мольном соотношении 1:1.

Была приготовленадисперсия в водной среде из Carbopol® различных марок 71g, 2020, Ultrez 10,Noveon® AA-1 после предварительного настаивания их в течение суток в воде63очищенной, что необходимо для полного смачивания и набухания микрогелейэтих полимеров. После чего дисперсии были доведены 0,1н раствором гидроксиданатрия до рН взаимодействия (рН=7,0).EPO был растворен в воде очищенной с добавлением 1н раствора уксуснойкислоты.Далее также доведен 0,1н раствором гидроксида натрия до рНвзаимодействия (рН=7,0) [33,39,78].ХТЗ также был растворен в воде очищенной с добавлением 1 н растворауксусной кислоты. Далее также доведен 0,1н раствором гидроксида натрия до рНвзаимодействия (рН=7,0).После чего раствор EPO/ХТЗ был покапельно добавлен к дисперсииCarbopol® при постоянном перемешивании с помощью лопастной мешалки IKARW16 basic (Германия).Далее полученная смесь, состоящая из осадка ИПЭК и надосадочнойжидкости, была выдержана в течение 7 суток для более полного протеканиявзаимодействия между частицами микрогеля и линейного полимера.Затемосадок ИПЭК был отделен от надосадочной жидкости, промыт водой очищенной,отцентрифугирован (центрифуга ELMI SkyLine CM-6M) в течении 10 минут, прискорости 3500 оборотов/минуту, высушен в вакуум-сушильном шкафу (Binder,Германия) при температуре 60°С под давлением и измельчен.

Все этапыполучения образцов ИПЭК представлены на рис. 3.64ВР1.1.Подготовка производственныхпомещенийВР1.2.Подготовка технологическогооборудованияВР1.3.Подготовка технологическойодеждыВР2.1.Получение воды очищеннойВР. 2.Кх, КмВР3.1.Измельчение компонентовВР. 3.Кт, Кх, КмВР3.2.Просеивание компонентовВР3.3.Отвешивание компонентовТП4.1.ТП4.2.ВР. 1.Кх, КмСанитарная подготовкапроизводстваотходыПодготовка водыПодготовка сырьяПотеримеханическиеРастворение EPO, ХТЗ,набухание Carbopol®ТП 4.Получение растворов полимеровКх, Км, EPO, ХТЗ, дисперсии Carbopol®КтПотеримеханическиеДоведение растворов донеобходимого объема, значениярНТП5.1.Смешивание компонентовреакционной смесиТП5.2.Экспозиция реакционной смесив течение 1, 3, 7 сутокТП5.3.Промывка осадка ИПЭКТП5.4.Сушка осадка ИПЭКУМО 6.1.