Отзыв на автореферат Пащенко В.З. (Флуоресцентные характеристики наномаркеров семейства флуоресцеина в растворах сывороточных альбуминов)

ОТЗЫВ на автореферат диссертации Кулешовой Анны Александровны "Флуоресцентные характеристики наномаркеров семейства флуоресцеина в растворах сывороточных альбуминов", представленной на соискание ученой степени кандидата физ-мат наук по специальности 01.04.05 — оптика и 03.01.02 — биофизика. Диссертационная работа Кулешовой А.А. посвящена исследованию оптических свойств наномаркеров (зондов) семейства флуоресцеинов в растворах альбумина при различных значениях рН среды. Белок альбумин является основным белком плазмы крови, осуществляющим транспорт физиологических метаболитов. Эти белки имеют большую площадь поверхности, на которой локализованы специфические связывающие центры, способные избирательно взаимодействовать с ионами металлов, с лигандами, жирными кислотами и т.д.

Эффективность связывания определяется состоянием плазмы крови, в частности, величиной рН среды. Для определения физико-химических свойств связывающих центров используют флуоресцентные зонды, чувствительные к изменениям свойств окружающей белок среды. Основная задача исследователя свойств альбумина как раз и состоит в том, чтобы по спектральным характеристикам зонда определить состояние связывающих центров белка при различных патологиях. В данной работе автор детально исследовала спектральные характеристики красителей семейства флуоресцеинов — собственно флуоресцеина, а также эозина, зритрозина и бенгальского розового при различных рН среды и разных концентрациях красителя.

Безусловно, такое детальное исследование очень важно как для понимания механизмов взаимодействия белков и наномаркеров, так и для практических применений. Среди результатов, полученных автором работы, отмечу наиболее значимые: а) Установлено длинноволновое смещение спектров флуоресценции связанных с белком наномаркеров, обусловленное как увеличением дипольного момента флуорофора (эритрозин, эозин, флуоресцеин) так и его уменьшением (бенгальский розовый) при их возбуждении. При увеличении рН среды степень тушения флуоресценции галоген-замешенных производных флуоресцеина уменьшается линейно.

Следовательно, по выходу флуоресценции этих зондов можно неинвазивно определять рН раствора. б) Впервые определены константы связывания исследованных флуорофоров с сывороточным альбум ином в физиологическом диапазоне изменения рН. Показано, что эффективность связывания наномаркера тем меньше, чем больше электр оотрицательных атомов находится в его структуре. Наличие сильно электроотрицательных атомов в молекулах галоген-производных флуоресцеина, связанных с белком, объясняет изменение их абсорбционных и флуоресцентных характеристик и проявляется также в увеличении степени анизотропии и времени вращательной релаксации, а также в уменьшении коэффициента вращательной диффузии, Эти данные открывают дополнительные методы исследования природы взаимодействия флуоресцентных зондов с альбуминами.

Широкий спектр использованных методов исследования спектральных характеристик зондов, связанных с белком, и сделанные автором заключения свидетельствуют о прекрасном физическом образовании диссертантки, а также о высокой квалификации исследовательской группы, где выполнялась работа. Считаю, что представленное к защите научное исследование соответствует требованиям, предъявляемым к кандидатским диссертациям по специальности оптика и биофизика, а ее автор Кулешова А.А.

заслуживает присуждения ученой степени кандидата физ-мат наук. Г~ОДЛМ6Ь ЗАЦГРЯ~", „„,„с„„,,„.,„з„.„,Ъ,„„„„, Доктор физпрофессор к Биологическ МГУ имени "1 ,~ ~ ~ ~ В.З. Пащенко Ь.Ъ .