Заключение диссертационного совета о присуждении ученой степени (Прогнозирование метаболитов рилизинг-пептидов гормона роста в организме человека для разработки методики их определения в целях антидопингового контроля)

ЗАКЛ1ОЧЕНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОГО СОВЕТА Д 212.131.06 на базе Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Московский технологический университет» (Институт тонких химических технологий имени М.В.Ломоносова) Министерства образования и науки Российской Федерации ПО ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ХИМИЧЕСКИХ НАУК аттестационное дело № решение диссертационного совета от 09 октября 2017 г., протокол № 16 О присуждении Зверевой Ирине Олеговне, гражданке Российской Федерации, ученой степени кандидата химических наук.

Диссертационная работа «Прогнозирование метаболитов рилизинг-пептидов гормона роста в организме человека для разработки методики их определения в целях антидопингового контроля» в виде рукописи по специальностям 02 00.10— биоорганическая химия, химические науки и 02.00.02 — аналитическая химия„ химические науки, принята к защите 13 июля 2017 г., протокол № 1', диссертационным советом Д212.131.06 на базе Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Московский технологический университет (Институт тонких химических технологий имени М.В.

Ломоносова) Министерства образования и науки Российской Федерации (119571, Москва, пр-т Вернадского, д.86, приказ о создании диссертационного совета №935/нк от 14.07.2016). Соискатель, Зверева Ирина Олеговна, 1990 года рождения, с отличием окончила Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова» в 2013 г., с присвоением квалификации «биохимик» по специальности <сбиохимия», направлению <сбиоорганическая химия». С 2013 г. Зверева И.О.

работает в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Антидопинговый центр» с'ФГБУ АДЦ), в настоящее время — в должности старшего научного сотрудника. Диссертация Зверевой И.О. выполнена на базе ФГБУ АДЦ. Научные руководители: 1. Кротов Григорий Иванович — кандидат биологических наук„ Федеральное государственное бюджетное учреждение «Государственный научный центр «Институт иммунологии» Федерального медико-биологического агентства России, научный сотрудник. До 01 июля 2016 г.

работал в ФГБУ АДЦ в должности начальника отдела пептидного допинга и анализа крови; 2. Ефимова Юлия Александровна — кандидат химических наук, доцент кафедры аналитической химии им. И.П. Алим арина, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский технологический университет» < Институт тонких химических технологий имени М.В.Ломоносова) Министерства образования и науки Российской Федерации.

Официальные оппоненты: Згода Виктор Гаврилович - доктор биологических наук, профессор, заведующий отделом протеомных исследований и масс-спектрометрни Федерального государственного бюджетного научного учреждения <сНаучно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича»; Савельева Елена Игоревна — доктор химических наук, заведующая лабораторией аналитической токсикологии Федерального государственного унитарного предприятия «Научно-исследовательскнй институт гигиены, профпатологии и экологии человека» Федерального медико-биологического агентства 1ФГУП «НИИ ГПЭЧ» ФМБА России)», дали положительные отзывы на диссертацию.

Ведущая организации — Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Кубанский государственный университет» Министерства образования и науки Российской Федерации (ФГБОУ ВО «КубГУ»), г. Краснодар, в своем положительном заключении, составленном заведующим кафедрой аналитической химии д.х.н., проф. Темердашевым Зауалем Ахлоовичем и утвержденном ректором ФГБОУ ВО с<КубГУ» к.п.н., доц. Астаповым Михаилом Борисовичем, отмечает, диссертация Зверевой И.О. представляет собой завершенное актуальное научное исследование по разработке и внедрению методики определения ОНКР и их метаболитов в моче человека методом СВЭЖХ-МС/МС.

В основу разработанной методики легли данные по метаболизму (ЗНКР, полученные соискателем с использованием различных моделей ш лп.о и сп ~л о. Показана эффекгивность микросомальной почечной и 89 печеночной фракций человека в качестве модельных систем ш лГго для прогнозирования метаболитов ОНКР, выявлены закономерности биотрансформации гл 1по 5 наиболее широко известных препаратов (ЭНКР в человеческом организме <'для 4 из 5 препаратов — впервые).

Разработан хроматомасс-спектрометрический способ определения ОНДЕР н их метаболитов, что позволило увеличить временное окно детектирования после приема допинга и достоверность идентификации для выявления и предотвращения использования данного вида допинга в спорте. Впервые детектирован самый долгоживущий из описанных ранее метаболитов ОНКР-1(2-4)ОН, мониторинг которого позволяет выявлять случаи злоупотребления (зНКР-1, который не обнаруживается в моче в исходном виде. Проведена валидация предложенной методики в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО/МЭК 17025, а также оценка влияния физиологических особенностей человеческого организма и способов приема на метаболизм ОНКР (на примере приема препаратов ОНКР-2 и ОНКР-б).

Результаты исследований Зверевой И.О. могут бьггь использованы в целях антидопингового контроля различными фармакологическими компаниями, занимающиеся изучением метаболизма соединений пептидной природы, аналитическими лабораториями и научными организациями. Практическая значимость не ограничивается территорией Российской Федерации, а выходит за ее пределы, что,несомненно, увеличивает ценность представленной работы. Соискатель имеет 7 публикаций по теме диссертации„ среди них 4 статьи в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК и входящих международную базу цитирования Ясорив и %'еЬ о1 Яс1епсе, все по теме диссертации.

Наиболее значимые научные работы по теме диссертации: 1. 1.О. 7легеъа, Е.Х. Бетешвгауа, ОЛ. Кхо1оь, О.М. КодсЬепЬж Сотраг1воп оГ ъап1опв т ъ11то тоде! вув1етв о1 1Ье те1аЬо11вт о1' вупгЬейс дорт8 рерйдев: рго1ео1у6с еп7утев, баштан Ыоод веппп, 11ъег апд Ыдпеу ппсговогпев апд 11ъег $9 1гас6оп // У. Рго1еоппсв. — 201б. — ъ/о1.

149. — Р. 85 — 97. 2. Е. 8етеп1в1ауа, 1. Ул егеь а, О. Кго1оь, О. КодсЬепЕоь. Бо1Ы-рЬаве ех1гасйоп о1' вта11 Ь1о1о81са11у асйь"е рертЫев оп саг1гЫ8ев апд т1сгое1пт1оп 96-ъъе11 р1а1ев йоп Ьшпап иппе // 1Эгщ, Тев1. Апа1. — 201б. — Х~о1. 8 — Хо 9. — Р. 940 — 949. 3. Р. Регго, О. Кхогоь, 1. 2Легеъа, С1. КодсЬеп1гоь, У. 8е8пга. Ятпсшге-ас11ъ11у ге1а11опвЬ1р 1ог рерт1д1с 8гоъътЬ Ьоппопе весге1а8о8иев // Огп8 Тевт. Апа1. — — 2017. — Уо1. 9. — 'Хо 1.

— Р. 87 — 95. 4. Е. Яетешвгауа,?. Хъ егьа, А. ТЬотав, М. ТЬеъ1в, О. Кготоъ, (3. КодсЬепЬж Ре1егт1па6оп о1' 8гоъътЬ Ьоппопе ге1еав1п8 рерйдев те1аЬо111ев т Ьптап пт1пе айег пава1 адппшв1гайоп о1' ОНКР-1, ОНКР-2, (яНКР-б, Нехаге1т, апд 1ратоге1т // Опц Тев1. Апа1. — 2015. — Чо1. 78 — 1ъ1о 10. — Р. 919-25. На автореферат диссертации поступило б положительных отзывов. Отзывы от Скрипникова А.Ю., к.б.н., старшего научного сотрудника лаборатории химии пептидов ИБХ РАН; от. Степаненко В.Н., к.б.н., начальника опьпного биотехнологического производства ИБХ РАН; от Беловой Н.А., д.б.н., проф., заместителя декана биотехнологического факультета МГУ имени М.В.Ломоносова, замечаний не содержат.

Отзыв Колеснова А.Ю., д.т.н., руководителя лаборатории фундаментальных и прикладных исследований качества и технологий пищевых продуктов Центра коллективного пользования Российского университета дружбь| народов содержит замечания о том, что: в сравнении с методом анализа СВЭЖХ-МС/МС не полностью отражено значение метода «наноВЭЖХ-МСВР» в общем методическом подходе для идентификации метаболитов и маркеров приема спортсменами соединений пептидной природы; отсутствуют сведения о возрасте добровольцев, которые участвовали в исследовании; данные по концентрациям метаболита ОНКР-2 (1-3) ОН и исходного пептида ОНКР-2 при исследовании серии проб одного добровольца после однократного внутривенного введения не совсем очевидны.

Отзыв Борзенко А.Г., к.х.н., доцента кафедры аналитической химии химического факультета МГУ имени М,В. Ломоносова, содержит замечания об отсутствии подробной аналитической методики определения ОНКР в моче методом СВЭЖХ-МС/МС, наличии опечаток. Отзыв от Парфенюк В.И., д.х.н., главного научного сотрудника лаборатории «Новые материалы на основе макроциклических соединений» Института химии растворов им. Г.А. Крестова РАН, содержит замечание о незначительных опечатках. Выбор официальных оппонентов и ведущей организации обоснован тем, что в ведущей организации проводятся исследования по смежному направлению, а выбранные оппоненты являются известными экспертами, эффективно работающими в области аналитической химии, биоорганической химии и биохыиии, близких к тематике диссертационной работы Зверевой И.О.

Диссертационный совет отмечает, что на основании выполненных соискателем исследований: разработан методический подход к получению и выбору наиболее диагностически значимых метаболитов с использованием моделей /л л/го и гл М~о для создания методики определения ОНКР и их метаболитов в целях антидопингового контроля. Разработана новая методика качественного определения ОНКР и их метаболитов в моче человека методом сверхвысокопроизводительной высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией ~СВЭЖХ-МС/МС); предложено выявлять случаи злоупотребления ОНКР не только по соединениям в исходном виде, но и по их метаболитам, что может значительно увеличить чувствительность методики, достоверность идентификации и временное окно детектирования после приема ОНКР; доказана эффективность детектирования не только соединений с допинговым эффектом в исходном виде, но и их метаболитов, а также перспективность использования полученных результатов в практике антидопингового контроля; впервые изучены метаболиты 6НКР-1, 6НКР-2, бНКР-6, гексарелина и ипаморелина в моче человека после однократного ннтраназального приема препаратов волонтерами; Теоретическая значимость исследования обоснована тем, что; доказано, что анализ диагностически ценных метаболитов исходных соединений повышает эффективность антидопинговой методики; применительно к проблематике диссертации результативно использован комплекс экспериментальных методик для получения и идентификации метаболитов ОНКР т пй.о и ш ~ л о, реализованный на современном высокоточном оборудовании с соответствующим программным обеспечением; изложены доказательства эффективности детектирования метаболитов ОНКР в моче человека; раскрыты связи между существующими теоретическими сведениями о влиянии химических модификаций на стабильность соединений пептидно:=.~ природы и полученными экспериментальными данными; изучены метаболизм 8 соединений ОНКР с использованием различных моделей ты//го; закономерности биотрансформации т л~о 5 наиболее широко известных препаратов ОНКР в человеческом организме (для 4 из 5 препаратов— впервые); влияние физиологических особенностей человеческого организма и способов приема на метаболизм ОНКР; разработан хромато масс-спектрометрический способ определения метаболитов ОНКР для выявления и предотвращения использования данного вида допинга в спорте; проведена валидация метрологических характеристик качественного определения ОНКР и их метаболитов в моче человека методом СВЭЖХ-МС/МС, определены параметры селективности/специфичности, линейности, прецизионности в условиях одного дня и между днями, предела обнаружения, степени извлечения, а также влияния компонентов матрицы (эффекта матрицы); определены перспективы практического применения разработанного метода различными антидопинговыми и токсикологическими лабораториями; представлена методика определения ОНЙР и их метаболитов в моче человека методом СВЭЖХ-МС/МС; Значение полученных соискателем результатов исследования для практики подтверждается тем, что: Разработанная методика внесена в область аккредитации (шифр БОР Р1.016), внедрена в практику Федерального государственного бюджетного учреждения «Антидопинговый центр» (ФГБУ АДЦ) и успешно применяется для выявления случаев злоупотребления данного вида допинга среди спортсменов; Оценка достоверности результатов исследования выявила: для экспериментальных работ: работа выполнена на высоком теоретическом и экспериментальном уровне, достоверность результатов не вызывает сомнений.