Отзыв официального оппонента 2 (Иммуноадъюванты ветеринарных вакцин на основе водных растворов сополимеров N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина)

ОТЗЫВ официального оппонента Береговых В.В. на диссертационную работу Еремина Дмитрия Викторовича на тему «Иммуноадъюванты ветеринарных вакцин на основе водных растворов сополимеров Х— винилпирролидона и 2 — метил — 5 — винилпиридина», представленную на соискание ученой степени кандидата химических наук по спеииальностям 03.01.06 — Биотехнология ~в том числе бионанотехнологии) и 02.00.0б— Высокомолекулярные соединения Актуальность темы исследования.

Диссертационная работа Еремина Дмитрия Викторовича посвящена актуальной задаче — созданию иммуноадъювантов ветеринарных вакцин. Общая эпизоотическая обстановка по инфекционным болезням в животноводстве и птицеводстве в стране остается напряженной. Основным методом профилактики и лечения инфекционных заболеваний в ветеринарии является массовая вакцинация. Одним из путей повышения иммуногенности вакцин является использование адъювантов, однако, применение минеральных веществ и эмульсий имеет существенные недостатки, среди которых стоит отметить недостаточно напряженный и продолжительный иммунитет, ограниченную видовую эффективность, интенсификацию реактогенности и снижение стабильности. В соответствии с этим, в настоящее время активно проводятся исследования по поиску новых адъювантов, в том числе среди синтетических полимеров, Одним из перспективных синтетических полимеров для этих целей являются сополимеры 2-метил-5- винилпиридина и Х-винилпирролидона, чьи хорошие физиологические свойства наряду с низкой токсичностью обусловливают их перспективность для использования в качестве адъювантов в ветеринарии.

Таким образом, актуальность диссертационного исследования Еремина Д.В. определяется насущной необходимостью поиска и внедрения новых иммуноадъювантов для вакцин. Цель и задачи работы сформулированы четко и в полном соответствии с результатами проведенного автором глубокого анализа литературных данных, относящихся к теме исследования. Целью диссертационной работы Еремина Д.В. было создание иммуноадъювантов ветеринарных вакцин на основе водорастворимых сополимеров Х-винилпирролидо на и 2-метил-5- винилпиридина. Для достижения указанной цели исследования автором были поставлены такие задачи, как синтез водорастворимых сополимеров Х- винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина различного мономерного состава и исследование их физико-химических свойств в широком интервале значений рН, температур, концентраций и вспомогательных соединений, выбор сополимеров, обладающих необходимым комплексом свойств для рекомендации их использования в качестве адъювантов, усовершенствование установки синтеза с автоматической коррекцией состава реакционной массы, а также методологии синтеза сополимеров, изучение иммуностимулирующих свойств синтезированных иммуноадъювантов в составе ветеринарных вакцин и разработка и обоснование новых прописей иммуноадъювантов, полученных на основе сополимеров с вакцинами, и изучение их биологических свойств на лабораторных животных.

Научная новизна исследования Научная новизна диссертационной работы Еремина Д.В. явно видна. Диссертантом впервые выявлены составы сополимеров Х-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина, которые по своим физико-химическим свойствам соответствуют требованиям, предъявляемым к адъювантам, применяемым в составе ветеринарных вакцин. Автором впервые продемонстрировано и полно описано, что на растворимость сополимеров Х-винилпирролидона и 2-метил- 5-вин илпиридина в водной среде влияют рН, температура, массовое соотношение мономеров, присутствие в растворе солей щелочных металлов.

Кроме того, автором установлены диапазоны данных параметров, при которых растворимость исследуемых сополимеров удовлетворяет требованиям к компонентам вакцин. В биологических экспериментах автором показано, что разработанные композиции ветеринарных вакцин с синтезированными иммуноадъювантами создают более продолжительный и напряженный иммунитет по сравнению с консервативным использованием вакцин в отношении таких инфекций, как сибирская язва, вирусная геморрагическая болезнь кроликов и вирус гриппа птиц А. Практическая значимость работы Особого внимания заслуживает практическая ценность данной работы. Созданная автоматизированная установка для синтеза сополимеров за счет более точного контроля мономерного состава реакционной массы в процессе синтеза позволяет воспроизводимо получать сополимеры с заданными свойствами.

Разработанная диссертантом система ультрафильтрационной очистки сополимеров Х-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина позволяет на практике получать адъюванты высокой степени очистки. Использованный в биологических исследованиях сополимер показал высокую адьювантную активность против сибирской язвы животных, вирусной геморрагической болезни кроликов и вируса гриппа А птиц. Упомянутые выше установки для синтеза и очистки сополимеров Х- винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина успешно используются в учебном процессе кафедры биотехнологии и промышленной фармации Московского технологического университета при подготовке дипломных работ смежных тематик. Оценка содержания и оформления диссертации Диссертационная работа, изложенная на 121 странице компьютерного текста написана в классическом стиле и состоит из введения, обзора литературы, используемых материалов и методов исследования, описания 3 полученных результатов, их обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы и нескольких приложений.

Обзор литературы написан хорошим литературным языком, построен логично и убедительно обосновывает актуальность диссертационного исследования. В обзоре представлены современные данные о распространенности инфекционных заболеваний животных, подробно описаны применяющиеся на настоящий момент в ветеринарной практике адъюванты вакцин, приведены описания их механизма действия и недостатки, связанные с их применением.

Конструктивно обрисована картина разработок новых адъювантов, очерчены проблемы их создания. Приведено описание объекта исследования и схем синтеза различных сополимеров Х- винилпирролидона, а также приведены сравнительные данные по влиянию различных факторов на реакционную активность сомономеров в реакциях полимеризации.

Литературный обзор иллюстрирован 7 таблицами и 3 рисунками. В главе «Материалы и методы исследования» подробно описаны использованные в работе материалы и методики синтеза, выделения и очистки сополимера 2-метил-5-винилпиридина и М-винилпирролидона, методы контроля реакции сополимеризации и анализа мономерного состава, молекулярной массы и других характеристик сополимеров, а также методик определения иммуногенной активности и иммуностимулирующего действия сополимеров на различных животных.

Глава дополнена 7 таблицами и 5 рисунками. В главе «Результаты и их обсуждение» представлены полученные данные и их анализ. Положительно обращает внимание обобщенное детальное представление экспериментальной части и результатов исследования на масштабных графиках, Диссертация заканчивается выводами, соответствующими поставленным задачам, и практическими рекомендациями. В частности, в ходе работы были синтезированы водорастворимые сополимеры Х-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина широкого мономерного состава, исследованы их физико-химические свойства при различных значениях рН, температуры, концентрациях и вспомогательных соединениях, Также было выявлено, что для использования в составе ветеринарных вакцин по физико-химическим свойствам подходят сополимеры, содержащие от 25 до 35 моль'!4 МВП.

Для получения сополимеров заданного состава была модифицирована автоматизированная установка для контроля мономерн ого состава реакционной массы в процессе синтеза: новая методика ВЭЖХ позволила уменьшить время анализа состава реакционной массы более чем в два раза, что позволило уменьшить колебания концентрации МВП в реакторе с 10 до 5 ',4. Составлена база экспериментальных данных по динамике расхода мономеров в зависимости от состава РМ и конверсии. Создан алгоритм вычисления необходимого количества смеси мономеров, который учитывает изменения в кинетике сополимеризации за последний час синтеза, что позволяет получать сополимеры точного состава и молекулярной массы с отклонениями не более, чем на ~ 0,7 моль',4 МВП.

В опытах ш и~о было показано, что сополимер Х-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина обладает выраженным иммуностимулирующим действием. Так, введение морским свинкам сополимера повышало эффективность известной вакцины против возбудителя сибирской язвы в 2,0 — 2,9 раза. Совместное использование вакцины против вируса геморрагической болезни кроликов с сополимером позволило повысить титр специфических антител в 4 раза по сравнению с использованием только вакцины.

Комбинация сополимера с антигеном вируса птичьего гриппа титр повысило титр антигемагглютининов практически в 11 раз в сравнении с консервативным использованием вакцин. Выбраны оптимальные схемы введения иммуноадъювантов на основе Х-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина: е одновременное введение вакцины и адъюванта в дозе 2 млн спор/мл и 1 мг/кг, соответственно, в случае сибирской язвы (на т л~о модели морских свинок); ° однократное введение вакцины ВГБК в разведении 1:50 с сополимером в дозе 150 мкг/кг в случае геморрагической инфекции кроликов; е одновременное введение сополимера дозе 2 мг/кг и антигена ВГП с исходным титром 1:512 ГАЕ ~о,смз в случае птичьего гриппа А. Представленные данные демонстрируют хорошо спланированный дизайн диссертационного исследования, полностью отвечающий его цели и задачам, логичность и последовательность всех этапов работы. В Приложения предусмотрительно вынесены описания установки для получения и очистки сополимеров на основе 1М-винилпирролидона.