Диссертация (Химический состав и биологическая активность гидрофильных фракций из соцветий бархатцев распростертых), страница 10

Линейность методики устанавливали, используя 5 растворованализируемого извлечения различной концентрации. Мерой линейности служиткоэффициент корреляции [30,32]. Результаты представлены в таблице 29.Таблица 29 – Результаты определения линейности методики количественногоопределения суммы флавоноидов в Э-40%EtАликвота, Va, мл0,51,01,52,02,5Оптическая плотность, А0,1640,3560,5870,8341,102Коэффициент корреляцииКонцентрация, С, мг/мл0,12060,13090,14380,15330,16210,995983Далее по полученным результатам строили градуировочный графикзависимости оптической плотности от концентрации суммы флавоноидов ванализируемых извлечениях (рисунок 35).y = 22,273x - 2,557r = 0,9959Оптическая плотность, А1,210,80,60,40,200-0,20,12060,13090,14380,15330,1621Концентрация, мг/млРисунок 35 – График зависимости оптической плотности от концентрации приспектрофотометрическом определении суммы флавоноидовВизуальная оценка графика свидетельствует о его линейности, уравнениеградуировочного графика имеет следующий вид: y = 22,273x – 2,557 ихарактеризуется высоким коэффициентом корреляции (r = 0,9959), что позволяетиспользовать данную методику для количественного определения флавоноидов.Точность (правильность)Этот показатель определяет близость результатов, полученных при помощиданной методики, к истинному значению.

Определяют правильность путеманализа модельных образцов с известной концентрацией. Сущность методазаключается в изучении зависимости концентрации, открытой в ходе измерений,от ожидаемой концентрации [30,32]. В качестве исходного раствора использовалиизвлечение из навески Э-40%Et с концентрацией на верхнем пределе линейностиметодики (0,1621 мг/мл). Из этого извлечения готовили разведения всоотношении 1:2; 1:1; 1:0,5. На каждом уровне концентраций рассчитывалиоткрываемость (R).

Результаты приведены в таблице 30.84Таблица 30 – Результаты определения правильности методики количественногоопределения (исходное содержание суммы флавоноидов 0,1621 мг/мл)Разведениемодельнойсмеси1:21:21:21:11:11:11:0,51:0,51:0,5ТриНайденноесодержаниесуммыфлавоноидов0,05310,05500,05270,08280,08060,08170,10980,10720,1065уровняРасчетноесодержаниесуммыфлавоноидов0,05400,05400,05400,08110,08110,08110,10810,10810,1081концентрацийимеютОткрываемостьR, %Метрологическиехарактеристики98,3101,997,6102,199,4100,7101,699,298,5R = 99,9SD = 1,69RSD = 1,70сопоставимыерезультатыприотносительном стандартном отклонении 1,7%.ПрецизионностьСходимость характеризует прецизионность методики при ее выполнении водних и тех же условиях, в частности, одним и тем же аналитиком или группойаналитиков в течение небольшого промежутка времени [30].Критериемприемлемостиэтогопоказателяявляетсяотносительноестандартное отклонение (RSD), которое не должно превышать 3,0% [32].Готовили 6 испытуемых растворов из Э-40%Et из разных навесок, но врамках аналитической области методики.Определяли оптическую плотность полученных растворов, рассчитывалисредний результат, стандартное отклонение (SD), относительное стандартноеотклонение (RSD) отдельного результата и доверительный интервал (P = 95%)среднего результата.Полученные результаты представлены таблице 31.85Таблица 31 – Результаты исследования сходимости результатов количественногоопределения суммы флавоноидов в пересчете на патулетинНавеска, г0,24930,25150,25210,25140,25090,2519Оптическаяплотность, А0,7490,7710,7810,7640,7220,785Содержание суммыфлавоноидов, %2,882,942,972,922,762,99МетрологическиехарактеристикиXср = 2,91SD = 0,08RSD = 2,85Таким образом, результаты исследований показали, что данная методикаобладаетудовлетворительнойсходимостью,относительноестандартноеотклонение (RSD) результатов количественного определения составило 2,85%.Таким образом, данная методика спектрофотометрического определениясуммы флавоноидов в Э-40%Et в пересчете на патулетин является специфичной,линейной, правильной и прецизионной.86Выводы по главе 41.

Данный способ получения патулетина позволит решить проблему отсутствиядоступныхобразцовсравненияданногофлавоноидаирациональноиспользовать растительное сырье.2. Физико-химическимипатулетина,аитакжехимическимиопределенаметодамимолекулярнаядоказанаструктурамасса.Проведенастандартизация патулетина по показателям: температура плавления (Тпл 267268˚С), удельный показатель поглощения 729,0 ± 10,9, удельный показательпоглощения с добавлением алюминия хлорида 679,9 ± 15,0.

УФ-спектрсодержит максимумы поглощения при 258 и 371 ± 2 нм, методом ВЭЖХдоказана чистота патулетина, Количественное содержание патулетина висследуемой субстанции составляет 98,03%.3. Представленные результаты по стандартизации патулетина соответствуюттребованиям к фармацевтическим субстанциям, приведенным в ГФ XIIIиздания.4. Методом УФ-спектрофотометрии с использованием удельного показателяпоглощения проведено количественное определение суммы флавоноидов в Э40%Et в пересчете на патулетин и составляет 2,98 ± 0,06%. Методикавалидирована по показателям специфичность, линейность, правильность,прецизионность.5. Материалы по технологии получения и аналитическим характеристикамстандарта патулетина, выделенного из соцветий бархатцев распростертыхсорта «Carmen», направлены и приняты к рассмотрению Центром фармакопеиимеждународногосотрудничестваФГБУздравоохранения Российской Федерации.«НЦЭСМП»Министерства87Глава 5 Физико-химические характеристики пектиновых веществ,выделенных из шрота соцветий бархатцев распростертых5.1 Выделение полисахаридных комплексовС целью комплексного использования сырья нами были выделеныполисахаридные комплексы из шрота соцветий бархатцев распростертых,остающегося после получения Э-40%Et, по методу Н.К.

Кочеткова и M. Sinner(рисунок 36) [112,145].Водорастворимые полисахариды представляют собой порошок светложелтого цвета, с характерным запахом, кисловатого вкуса, растворимый в воде.Пектиновые вещества представляют собой порошок светло-коричневого цвета,сладковатого вкуса, без запаха, растворимый в воде.Таким образом, нами выделены две фракции полисахаридных комплексов сколичественным выходом: водорастворимые полисахариды – 0,3%, пектиновыевещества – 2,2%. Выделение гемицеллюлозы А и Б не проводили, так как они неимеют практического применения.

Гравиметрически установлено преобладаниепектиновых веществ, поэтому моносахаридный состав определяли именно дляних.С целью установления моносахаридного состава фракцию пектиновыхвеществ подвергали гидролизу 2,5% раствором кислоты серной при 100ºC втечение 15 часов. По окончании гидролиза раствор охлаждали и фильтровали,чтобы удалить непрогидролизованное вещество и нерастворимые продуктыраспада.Получалирастворлимонно-желтогоцвета,которыйдалеенейтрализовали раствором бария гидроксида при энергичном перемешиваниираствора [28,112].Для завершения нейтрализации добавляли суспензию бария карбоната.Методом восходящей БХ (бумага марки MUNKTELL Chrom. – Paper Sheets GradeFN 7 (Germany)) путем сравнения с СО идентифицировали моносахариды.

ВкачествеПФиспользовалиБУВ(4:1:5).Хроматограммыпроявляли88анилинфталатным реактивом. Кислотным гидролизом определены моносахаридыфракции пектиновых веществ – ксилоза, глюкоза, арабиноза, галактуроноваякислота [102,112].Растительное сырье - соцветия бархатцев распростертыхТрехкратная экстракция спиртомэтиловым 40%АнализируемоеизвлечениеШрот соцветий бархатцев послеэкстракции спиртом этиловым 40%Экстракция водой очищеннойв течение 24 часовШрот после воднойэкстракцииВодное извлечениеОсаждениеспиртомэтиловым,центрифугированиеВодорастворимыеполисахариды(ВРПС)Экстракция0,5% (NH4)2C2O4 и0,5% H2C2O4Кислое извлечениеОсаждение спиртомэтиловым,центрифугированиеШрот послеэкстракцииподкисленнымрастворомПектиновые вещества(ПВ)Рисунок 36 – Схема выделения полисахаридных комплексовДля ПВ, выделенных из шрота соцветий бархатцев распростертых,изучались такие физико-химические характеристики, как вязкость растворов,средняя молярная масса, изоэлектрическая точка, поверхностная активность,коэффициент распределения, сорбционная емкость.

Определение этих параметровпозволятустановитьвозможностьиспользования растительного сырья.наиболееэффективногокомплексного895.2 Определение средней молярной массыДля определения средней молярной массы нами готовилась серия водныхрастворов ПВ методом разведения в пределах концентраций (0,03-0,5%).Измерялось время истечения воды и растворов ПВ через капиллярныйвискозиметр Оствальда и вычислялись значения различных видов вязкостей.Плотность растворов определялась пикнометрически, однако, ввиду близостиплотностей анализируемых растворов и воды их не учитывали при расчетеотносительной вязкости [1,112].Для расчета относительной вязкостиη /η0использовали соотношение(формула 10) [108]:ηотн = η/η = t x ρ ,0t0 x ρ0(10)где t0, t – время истечения воды и раствора ПВ, сек;ρ0 , ρ – плотность воды и раствора ПВ соответственно, г/см3.Рассчитывалисьвязкости:относительная,удельнаяиприведенная.Экстраполяцией приведенной вязкости к нулевой концентрации находилосьпредельное число вязкости – характеристическая вязкость.

Эта процедурапозволяет исключить из величины характеристической вязкости взаимодействиемежду молекулами.Удельнуювязкость,тоестьотносительноеприращениевязкостирастворителя (η0) при введении в него полимера, находили по разнице(формула 11):ηуд = ηотн - 1,(11)С ростом концентрации раствора увеличивается взаимодействие междумакромолекулами и ее в расчетах необходимо учитывать. Поэтому далееопределяем приведенную вязкость как отношение (формула 12):ηпр = ηуд/С,где С – концентрация раствора.Результаты представлены в таблице 32.(12)90Таблица 32 – Результаты измерения вязкости водных растворов ПВ из шротасоцветий бархатцевС, %t, сек14,3516,6120,5227,5147,15132,51ηуд00,03130,06250,1250,250,5η отн1,1571,4111,9173,2869,234η уд0,1570,4110,9172,2868,234ηпр5,0166,5767,3369,14416,468987654321000,03130,0625C, % 0,1250,250,5Рисунок 37 – Зависимость удельной вязкости от концентрации растворов ПВИз графика, представленного на рисунке 37 видно, что в области малыхконцентрацийудельнаявязкостьплавновозрастает,однако,ужеприконцентрации 0,5% она резко возрастает, при этом кривая обращена выпуклостьюк оси абсцисс.Очевидно, даже при такой невысокой концентрации раствора ПВначинаетсянекоеструктурированиювзаимодействиемеждумолекулами,раствора.этогоследует,Изчтоприводящеекопределениехарактеристической вязкости необходимо проводить экстраполяцией к нулевойконцентрации, когда зависимость ηпр от С будет линейной.Характеристическую вязкость [η] находили графически по зависимостиηпр = f (C).На рисунке 38 представлена указанная зависимость приведенной вязкостиот концентрации.

Найденная величина [η] составила 4,25.9118161412η пр10864[η] = 4,252000,10,20,30,40,50,6С, %Рисунок 38 – Зависимость приведенной вязкости от концентрациирастворов ПВРасчет средней молярной массы проводили по уравнению Марка-ХаувинкаКуна (формула 13):[η] = K x Mα ,(13)где K, α – константы, M – молярная масса.α – величина, характеризующая форму макромолекулы и ее взаимодействие смолекулами растворителя. Для непригодных растворителей α.K – коэффициент, постоянный для раствора данного полимерного ряда вданном растворителе. В расчетах использовали данные констант, характерных длябольшинства полисахаридов: K = 1,1 ∙ 10-5; α = 1,2 [53].Расчет показывает, что средняя молярная масса ПВ составила 45272 г/моль.О степени взаимодействия макромолекул полимера и растворителя, оструктурных свойствах макромолекулы, степени ее разветвленности можносудить по величине константы Хаггинса.