91472 (Изучение обменных свойств мягких контактных линз по отношению к ципрофлоксацину), страница 5

b = ;

a =

Оценивают точность параметров a и b, для этого оценивают дисперсию S²_yx экспериментальных точек:

S²_yx (n – 2) =

Дисперсию констант a и b вычисляют по уравнениям:

S²_b = ;

S²_a =

Зная дисперсии констант a и b, можно рассчитать доверительные интервалы:

= ;

=

Окончательный вид уравнения прямой:

y = (a ) + (b )x

Вычисление метрологических характеристик, результатов анализа:

x_ан = ;

S_x =

Доверительный интервал результата анализа:

Предел обнаружения (x_min):

;

x_min = C_min =

3.4 Методики проведения эксперимента

1. 3.4.1 Методика определения содержания ципрофлоксацина в глазных каплях спектрофотометрическим методом

За основу была взята методика, описанная в разделе 2.5.3., с некоторыми изменениями.

1 мл испытуемого раствора вносили в стандартную мерную колбу объемом 50 мл, разбавляли до полного объема 0,1 М хлористоводородной кислотой (раствор А). Затем 2 мл полученного раствора переносили в мерную колбу объемом 50 мл и доводили до метки 0,1 М хлористоводородной кислотой (раствор В). Снимали показания поглощения в ячейке l = 1 см при длине волны 277 нм против 0,1 М HCl в качестве раствора сравнения.

Массу ципрофлоксацина находили по формуле:

m = c_ан×K×V×10^-3, мг (3.1)

с_ан – концентрация ципрофлоксацина в растворе, установленная по уравнению градуировочной зависимости, мкг/мл;

К – коэффициент разбавления;

V – фиксированный объем раствора ципрофлоксацина, мл;

Построение градуировочной зависимости

Методика приготовления первичного стандарта для построения градуировочной зависимости

Точную навеску массой 0,0350 г порошка ципрофлоксацина растворяют в 10 мл воды (вода бидистиллированная). Полученный раствор хранят в темном и холодном месте.

Построение градуировочной зависимости

Опираясь на имеющуюся методику 3.4.1, градуировочную зависимость получали следующим образом. В колбу объемом 100 мл вносили первичный стандарт и доводили до метки 0,1 М хлористоводородной кислотой (раствор А). Растворы для фотометрирования готовили сериями. В мерные колбы объемом 50 мл вносили разные по объему (от 0,5 до 12 мл) аликвоты раствора А. После этого растворы доводились до метки 0,1 М хлористоводородной кислотой, тщательно перемешивались и фотометрировались относительно раствора сравнения (0,1 М хлористоводородная кислота) при длине волны 277 нм. Градуировочная зависимость была построена в интервале концентраций от 9,00*10^-7 моль/л до 2,17*10^-5 моль/л (0,3 мкг/мл до 7,2 мкг/мл).

Проверка влияния физраствора (0,9%-ого раствора NaCl)

на градуировочную зависимость

Чтобы проверить влияние физраствора на градуировочную зависимость, необходимо внести в раствор А насыщенный раствор NaCl.

Насыщенный раствор NaCl готовили, растворяя порошок NaCl в 50 мл воды (вода бидистиллированная) при нагревании до того момента, пока не прекратится растворение.

В колбу объемом 100 мл вносили 5 мл приготовленного насыщенного раствора NaCl, 1 мл раствора А, затем добавляли 10 мл 1 М HCl и доводили до метки бидистиллированной водой.

Растворы для фотометрирования готовили сериями. В мерные колбы объемом 50 мл вносили разные по объему аликвоты раствора А с физраствором. После этого растворы доводились до метки 0,1 М хлористоводородной кислотой, тщательно перемешивались и фотометрировались относительно раствора сравнения (0,1 М хлористоводородная кислота) при длине волны 277 нм.

1. 3.4.2. Методики исследования сорбции и десорбции

2. Ципрофлоксацина

Определение сорбции и десорбции ципрофлоксацина мягкими контактными линзами проводили с использованием спектрофотометрической методики.

Исследование обменных свойств мягких контактных линз проводили по схеме:

1. измерение массы линз в сухом и набухшем состоянии (табл. 3.1);

2. определение концентрации ципрофлоксацина в исходном растворе капель;

3. насыщение мягких контактных линз препаратом при различном времени сорбции и определение концентрации ципрофлоксацина в растворе после насыщения;

4. вытяжка ципрофлоксацина из мягких контактных линз в воду или физраствор и определение его концентрации в вытяжках;

5. расчет массы поглощенного ципрофлоксацина по разности его масс в исходном растворе капель и в растворах после вымачивания линз;

6. расчет сорбции и десорбции ципрофлоксацина мягкими контактными линзами.

Методика определения массы МКЛ

Сухие МКЛ поочередно взвешивают на аналитических весах. Набухшие линзы хорошо встряхивают, а затем взвешивают на полиэтиленовой подложке не менее 5 раз каждую. Данные представлены в таблице 3.1.

Таблица 3.1.

Массы МКЛ из материала «Кемерон-1»

Методика определения содержания ципрофлоксацина в исходном препарате

Определение проводилось по методике 3.4.1, описанной ранее.

Перед тем как залить линзы раствором ципрофлоксацина, проводилось определение его содержания в исходном растворе капель.

1 мл испытуемого раствора вносили в стандартную мерную колбу объемом 50 мл, разбавляли до полного объема 0,1 М хлористоводородной кислотой (раствор А). Затем 2 мл полученного раствора переносили в мерную колбу объемом 50 мл и доводили до метки 0,1 М хлористоводородной кислотой (раствор В). Снимали показания поглощения в ячейке l = 1 см при длине волны 277 нм против 0,1 М HCl в качестве раствора сравнения.

Массу ципрофлоксацина m_исх находили по формуле (3.1).

Методика проведения сорбции ципрофлоксацина линзами из материала «Кемерон»

Чтобы посмотреть динамику сорбции ципрофлоксацина, каждая линза отдельно замачивалась в фиксированном объеме капель (2 мл) на определенное время. По истечении этого времени линза извлекалась из раствора.

Анализ раствора после сорбции проводился следующим образом: 1 мл испытуемого раствора вносили в стандартную мерную колбу объемом 50 мл, разбавляли до полного объема 0,1 М хлористоводородной кислотой (раствор А). Затем 2 мл полученного раствора переносили в мерную колбу объемом 50 мл и доводили до метки 0,1 М хлористоводородной кислотой (раствор В). Снимали показания поглощения в ячейке l = 1 см при длине волны 277 нм против 0,1 М HCl в качестве раствора сравнения.

Массу сорбированного ципрофлоксацина (m_погл) находили по разности масс в исходном растворе капель (m_исх) и после сорбции (m_п/погл).

Массу после сорбции m _п/погл находили по формуле (3.1).

m_погл = m_исх - m_п/погл

Степень сорбции определяется как отношение массы поглощенного ципрофлоксацина (m_погл) к массе сухой линзы, а степень извлечения как отношение массы поглощенного ципрофлоксацина (m_погл) к m_исх.

Методика проведения изучения десорбции ципрофлоксацина линзами из материала «Кемерон»

Десорбцию ципрофлоксацина проводили следующим образом: после вымачивания линз в каплях их извлекали из фиксированного объема раствора ципрофлоксацина и помещали в такое же фиксированное по объему количество бидистиллированной воды или физраствора (2 мл). Перед тем как поместить линзу в первый фиксированный объем воды, ее хорошо встряхивали, споласкивали в 2 мл воды, чтобы проанализировать так называемый смыв. Анализ полученного раствора после смыва проводили следующим образом: 1 мл испытуемого раствора вносили в стандартную мерную колбу объемом 50 мл, добавляли 5 мл 1 М хлористоводородной кислоты и доводили до метки бидистиллированной водой. Снимали показания поглощения в ячейке l = 1 см при длине волны 277 нм по отношению к 0,1 М HCl в качестве раствора сравнения.

Через определенные промежутки времени (30 мин) извлекали линзу из первой склянки с водой или физраствором и помещали в следующую склянку с таким же объемом. Для сравнения проводили десорбцию в общий объем воды или физраствора при соответствующем времени выдержки. Опыты повторялись несколько раз.

Анализ полученного раствора после вымачивания линз в воде (физрастворе) проводили следующим образом: 1 мл испытуемого раствора вносили в стандартную мерную колбу объемом 50 мл, добавляли 5 мл 1 М хлористоводородной кислоты и доводили до метки бидистиллированной водой. Снимали показания поглощения в ячейке l = 1 см при длине волны 277 нм против 0,1 М HCl в качестве раствора сравнения.

Массу десорбированного ципрофлоксацина m_возв вычисляли по формуле (3.1).