66240 (Понятие о пищевых добавках и их характеристика), страница 11

Сущность метода основана на реакции с реактивом Грисса с образованием азосоединения.

Приборы и реактивы: фотоэлектрокалориметр, редукционная колонка с губчатым кадмием, CdSO₄ 20%, цинк металлический гранулированный, 0,14 н NaOH, ZnSO₄ 0,45%-ый, 2,5% NH₄OH, 0,1 н НС1, [кислота сульфаниловая, кислота уксусная 12% раствор, ά-нафтиламин], 0,14 н КMnO₄, H₂SO₄, натрий серноватокислый, крахмал 0,5% раствор, KI, вода дистиллированная. Стандартный раствор Na(K)NO₃: 0,1 г соли (перекристаллизованной и высушенной до постоянной массы при 105°С) взвешивают на аналитических весах, переносят дистиллированной водой в мерную колбу на 1000 мл, доводят водой до метки и тщательно перемешивают. Затем 25 мл этого раствора переносят пипеткой в мерную колбу вместимостью 500 мл, доводят до метки и перемешивают. Стандартный раствор NaNO₂. Отвешивают 1,0204 г ч.д.а. реактива, переносят в мерную колбу на 1000 мл и ее объем до метки. Затем переносят пипеткой 100 мл в мерную колбу на 1000 мл и объем ее доводят до метки. Из него переносят пипеткой 100 мл в мерную колбу на 500 мл и доводят до метки (раствор I). 5 мл раствора I переносят в мерную колбу на 100 мл и объем ее доводят до метки (образцовый). 1 мл его содержит 0,001 мг азотистокислого натрия.

Ход работы: Построение калибровочной кривой. В 12 мерных колб на 100 мл микробюреткой или пипеткой отмеряют раствора III последовательно 0; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 4,0; 4,5; 5,0; 6,0; 7,0; 8,0 мл. В каждую колбу добавляют 5 мл 5%-ного раствора аммиака, 10 мл 0,1 н раствора соляной кислоты и объем доводят водой до метки. Из приготовленных растворов пипеткой переносят по 15 мл в конические колбочки и туда по 15 мл реактива Грисса и после 15-мин. настаивания (при н.у.) колориметрируют на фотоколориметре с зеленым светофильтром, в кювете с толщиной слоя 2 см, используя в качестве раствора сравнения контрольный раствор на реактивы в первой колбе. Затем вычерчивают кривую, откладывая на оси ординат оптическую плотность, а на оси абсцисс — концентрацию азотистокислого натрия, выраженную в мкг/мл измеряемого раствора.

Навеску пробы 20,0 г помещают в химический стакан, заливают 35—40 мл нагретой до 50—60°С дистиллированной воды и настаивают, периодически перемешивая в течение 10 мин. Затем вытяжку фильтруют через ватный фильтр в мерную колбу на 200 мл. Навеску несколько раз промывают декантацией и переносят на фильтр, где еще промывают водой и после охлаждения объем в колбе доводят до метки дистиллированной водой. 20 мл вытяжки помещают в мерную колбу на 100 мл, добавляют 10 мл 0,1 н раствора едкого натра и 40 мл 0,45%-ного раствора сернокислого цинка для осаждения белков. Смесь в колбе нагревают 7 мин на кипящей водяной бане, после чего охлаждают, объем колбы доводят до метки водой, перемешивают и фильтруют через беззольный бумажный фильтр. В две конические колбы на 100 мл помещают по 5 мл прозрачного фильтрата, по 1 мл 5%-ного раствора аммиака, по 2 мл 0,1 н раствора соляной кислоты, по 2 мл дистиллированной воды и для усиления окраски, по 5 мл образцового стандартного образцового раствора NaNO₂. Затем в каждую колбу приливают по 15 мл реактива Грисса и через 15 мин измеряют интенсивность окраски на фотоколориметре с зеленым светофильтром в кювете толщиной слоя 2 см. Одновременно ставят две контрольные колбы, куда вместо фильтрата добавляют дистиллированную воду. Содержание нитрита Х в мг/100 г продукта находят:

Х=200 ·100 ·100 · 30С / 20 · 5 ·1000m,

где С – содержание нитрита в 1 мл исследуемого раствора в мкг,найденное по калибровочной кривой за вычетом контроль-опыта в мкг, m – навеска продукта, г.

Для удаления нитрита из фильтрата, полученного после осаждения белков, пипеткой переносят в две конические колбы по 20 мл фильтрата, туда же добавляют по 5 мл этилового спирта и по 10 эдл 0,1 н раствора соляной кислоты. Накрыв колбы часовыми стеклами, содержимое нагревают до легкого кипения и кипятят в течение 10 мин. Затем быстро добавляют к кипящим растворам по 4 мл 2,5%-ного раствора аммиака. Для восстановления нитрата в нитрит горячий раствор (80—70^*С) пропускают через подготовленную редукционную колонку, собирая фильтрат в мерную колбу на 100 мл. Затем колонку промывают горячей дистиллированной водой до получения 70—80 мл фильтрата. Содержимое колбы охлаждают и доводят водой до метки. 15 мл полученного раствора смешивают с 15 мл реактива Грисса и через 15 мин колориметрируют на фотоколориметре. Одновременно готовят контрольный раствор, для этого в колбу берут 15 мл дистиллированной воды и 15 мл реактива Грисса. В случае слабого окрашивания растворов в колбы к 15 мл испытуемого раствора добавляют по 5 мл образцового стандартного раствора азотистокислого натрия, содержащего 1 мкг в 1 мл, и 20 мл реактива Грисса. Содержание нитрата Х₁ в мг /100 г продукта вычисляют по формуле:

Х₁ = 200 · 100· 30 · 100 · 1,23 · 100С / 20· 15 · 1000 · 20m,

где С – содержание нитрата в 1 мл исследуемого раствора, мкг, найденное по калибровочной кривой за вычетом контроль-опыта в мкг, m – навеска продукта, г

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Основная

1. Булдаков А. Пищевые добавки. — СПб.: «Vt», 1996.

2. Голубев В.Н. Пищевые и биологически активные добавки: Учеб. для студ. высш. учеб. завед. /В.Н. Голубев, Л.В. Чичева-Филатова, Т.В. Шленская.—М.: Академия, 2003

3. Пищевая химия: Лабораторный практикум. Пособие для вузов / А.П. Нечаев, С.Е. Траубенберг, А.А. Кочеткова и др.; Под ред. А.П. Нечаева.—СПб.:ГИОРД, 2006

Дополнительная

1. Люк Э., Яир М. Консерванты в пищевой промышленности. — СПб.: Гиорд, 1998.

2. ОБЖ. Основы Безопасности Жизни / Ежемесячный научно-методический и информационный журнал. № 3 [141], март 2008.

3. Поздняков В.М. Гигиенические основы питания, безопасность и экспертиза продовольственных товаров / Учебник. 2-е изд. Изд-во Новосибирского университета.— 1999

4. Пищевые ароматизаторы и красители / Е. В. Смирнов, Г. К. Викторова, Н. М. Метелкина и др. // Пищевая промышленность. — 1996.

5. Сарафанова Л. А., Кострова И.Е. Применение пищевых добавок. СПб.: Гиорд, 1997.

6. Тужилкин В. И., Кочеткова А.А., Колеснов А. Ю. Пектины. Теория и практика применения // Известия вузов. Пищевая технология. — 1998.