И.П. Ашмарин, А.А. Каменский, Г.С. Сухова - Руководство к практическим занятия по физиологии человека и животных, страница 46

Сопоставляются функциональные параметры нервных и мышечных волокон в контроле и на 14-е сутки после раздавливания малоберцового нерва. Задача выполняется на белых лабораторных мышах. Для статистического анализа измеряемых параметров требуется не менее Часть И. Практические задачи по патофизиологии (на протяжении 2 мм от сухожилия), аккуратно отделяют от рядом лежащих сухожилий и мышц с помощью тонкого стеклянного крючка (см. рис. 2). Сухожилие перевязь1вают лигатурой длиной около 10 см и перерезают ниже места перевязки. Аналогичную процедуру проводят на правой конечности.

Далее препаруют нерв в области бедра левой конечности. Поверхность бедра освобождают от шерсти, делают разрез кожи, раздвигают края раны и рассекают подлежащие мышцы, чтобы обнажить нервный ствол(п.регопеиз), который также с помощью глазных пинцета и ножниц максимально освобождают от соединительной ткани. На отсепарированный нерв накладывают лигатуру. Аналогичную процедуру проводят и на противоположной конечности. В последний момент прикрепляют дистальное сухожилие ЕОЬ (с помощью шелковой нити) к тензодатчику, при этом нить должна быть натянута так, чтобы длина мышцы соответствовала естественной(степень растяжения мышцы должна составлять 10% от исходной длины).

На экране бумажного самописца (либо экране осциллографа) регистрируют сократительные ответы мышцы. Функциональные параметры нерва и мышцы исследуют в следующей последовательности. 1. Определяют минимальную(пороговую) силу раздражения нерва (в вольтах), вызывающую минимальный сократителный ответ мышцы при разных длительностях раздражающего стимула (0,1— 10мс). Данные заносят в таблицу для построения кривой "сила- длительность", характеризующей пороговую чувствительность нерва к электрическим стимулам, 2.

Регистрируют одиночные сократительные акты мышцы в ответ на супрамаксимальное раздражение нерва стимулами длительностью 0,1мс. При обработке результатов измеряют длительность Т (мс), время нарастания ~ (в мс), время полуспада «„„„(в мс) одиночных мышечных сокращений и заносят результать измерений в суммарную таблицу. 3. Проводят раздражение нерва ритмическими серями импульсов 7 и 50 Гц (сила раздражающих стимулов — сверхпороговая, длительность — 0,1 мс) и регистрируют тетанические сокращения мышцы. Измеряют амплитуды тетанусов (А) и вычисляют отношение А,„„/А5О„„.

2. Регистрация суммарного потенциала действия (М-ответа) КВЬ мыши 1п вИи (миограмма) и определение длительности и латентного периода М-ответа. Эта часть эксперимента является непосредственным продолжением первой части и проводится сразу по ее окончании на том же животном. Мышцу прошивают двумя нихромовыми отводящи- Тема У1. Методики оценки порогов болевой чувствительности ких слоях кожи и в висцеральных органах. Ао более специфичны к виду болевого стимула. Выделяют механо-, термо- и хемочувствительные Ао-ноцицепторы. Для С-волокон не характерна избирательная чувствительность к типу ноцигенного раздражителя. В подавляющем большинстве С-волокна полимодальны по отношению к стимулам: поток импульсации возникает при сверхсильных химических, механических и термических воздействиях.

Эти волокна имеют более высокий порог стимуляции; для них характерно более медленное развитие толеранности и, напротив, более быстрое развитие сенситизации к стимулам. При повреждении тканей из клеток и капилляров выделяются медиаторы воспаления (брадикинин, серотонин, ионы К', простагландины и др.), которые остаются в месте повреждения в течение достаточно длительного времени и активируют преимущественно окончания С-волокон. Ао — и С-волокна при входе в спинной мозг оканчиваются преимущественно на нейронах 1, 11 и Упластин (по Рекседу), при-- чем наблюдаются достаточно четкие соматотопические различия в распределении разных типов ноцицепторов внутри спинного мозга.

Часть интернейронов, на которых оканчиваются болевые афференты, непосредственно активируют мотонейроны вентральных рогов. Этим обеспечивается рефлекторная двигательная реакция животного на болевое воздействие. В дорсальных рогах спинного мозга формируются также восходящие пути болевой чувствительности, направляющиеся в головной мозг — спиноталамический тракт. Нейроны, на которых оканчиваются преимущественно Аоафференты, идут в головной мозг в составе неоспиноталамического тракта и оканчиваются на так называемых специфических ядрах таламуса (вентро-базальная группа ядер). Отсюда волокна направляются в соматосенсорные области коры больших полушарий (Б1 и Я1). Вторичные нейроны, на которых оканчиваются С-волокна, формируют филогенетически более древний палеоспиноталамический тракт.

Волокна этого тракта также оканчиваются преимущественно в таламусе, но до этого имеют многочисленные ответвления и переключения в различных ядрах ствола и среднего мозга. Волокна этого тракта в таламусе оканчиваются на медиальных и интраламинарных ядрах (неспецифическая группа ядер), откуда волокна распространяются диффузно по коре головного мозга, обеспечивая эмоциональный компонент болевой реакции. Часть волокон из состава палеоспиноталамического тракта оканчиваются также в области моста и среднего мозга на нейронах, которые являются частью эндогенной антиноцицептивной системы (нейроны ретикулярной формации, гигантоклеточное и парагигантоклеточное ядра, нейроны околоводопроводного серого вещества, ядро шва и др.).

240 Часть И. Практические задачи по патофизиологии При исследовании физиологических механизмов, лежащих в основе болевой чувствительности,и при создании новых анальгетических препаратов очень важно точно ю объективно оценить порог болевой чувствительности (ПБЧ). С этой целью проводятся опыты на животных, к которым неприменим метод опросного листа, применяемый в клинике, где человек сам оценивает интенсивность своих болевых ощущений в баллах.

Более подходящим методом для оценки болевой чувствительности у животных оказалось градуальное увеличение болевого стимула„до появления какойто поведенческой реакции, обусловленной этим стимулом. В качестве таких реакций обычно используются реакции отдергивания хвоста — при нанесении термического болевого стимула, лизания лап — при помещении животного на горячую поверхность, реакция вокализации (писка) — при сдавливании лапы или нанесении электрического раздражения, абдоминальных "корчей" (специфических сокращений брюшных мышц и характерного изменения позы) — при внутрибрюшинном введении едких веществ, поджимание лапы и ее лизание — пои подкожном введении слабого раствора формалина.

Важно отметить, что тестируется именно порог возникновения болевой реакции, наносится минимальный по интенсивности болевой стимул. Среди вышеперечисленных реакций можно выделить 4 группы тестов, отличающихся типом раздражителя, вызывающего болевой ответ: 1) тепловые стимулы (в тестах "отдергивания хвоста" и "горячей пластины*'); 2) механические стимулы (тесты сдавливания лапы грузом увеличивающейся массы и наложения зажимов с определенной силой сдавливания); 3) электрические стимулы (нанесение электрического разряда нарастающей интенсивности на основание хвоста или лапу экспериментального животного); 4) химические стимулы ("формалиновый'* тест и тест "корчей").

Такое разнообразие тестов для оценки порога болевой чувствительности обусловлено двумя причинами. Во-первых, всевозможные болевые реакции реализуются на разных уровнях центральной нервной системы (ЦНС). Принято считать, что реакция отдергивания хвоста реализуется на уровне спинного мозга, в то время как все остальные реакции реализуются с участием супраспинальных структур.

Во-вторых, первые три типа раздражителей моделируют острую (фазическую) боль, в то время как химические стимулы моделируют стойкую (тоническую) боль. Анальгетические препараты разных групп по-разному влияют на порог болевой чувствительности, оцененный разными методами, поэтому Тема М. Методики оценки порогов болевой чувствительности 241 в тщательных научных исследованиях, оценивающих возможную анальгетическую активность новых соединений, применяются как минимум две методики.

Среди применяемых тестов для определения порога болевой чувствительности выделяют две основные группы — по типу оцениваемой боли. К первой группе относятся тесты, в которых моделируется острая (быстрая) боль, а ко второй — хроническая (медлеиная) боль. Для комплексной оценки действия анальгетика обычно оценивают его действие в нескольких тестах. Для моделирования острой боли в качестве источника болевого воздействия используют дозированные механические (тест сдавливания лапы/хвоста) и термические раздражители (тест отдергивания хвоста — »ад-фсЦ или тест горячей пластины — Ьо»-р1а»е, которые активируют преимущественно специфические высокопороговые механо- и термочувствительные АЬ-волокна; реже в качестве источника острой боли используют электрическое раздражение хвоста или лап животного. В качестве источника хронической боли в основном применяют химические раздражители, активирующие полимодальные С-волокна.