Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - 2001), страница 12

ТЬезе рптег-зрессбс гезспс6оп ясез аге сгапзЕеггег( со йе сегииш оЕсЬе !агнес РХА с)ипп8 агпр!г6сасюп (5сЬагЕ ес а1. 1986) апд сап йеп Ье йеачег! ън!сЬ арргорпасе гезспс6оп епгутез со Вепегасе атр1сбес1 зеупепь оЕ РХА ъч!сЬ соЬеяче сепи!п!. Весаые сЬе гезспс6оп ясез гиау Ье Ыеп6са) ог сбйегепс !и йе съно рптегз, сЬь тос66са6оп а!1оъчз сЬе !ичезс!Васог со са!1ог сЬе сепшш оЕ сЬе агир1г6ес1 РХА Ь.аупепс со сЬе чессогз Ьезс зи(сес( со сЬе саз)с ас Ьап<$. Рог уеагз, сЬгз тесЬоь! оЕ с!оп!и8 РСК ргос!иссз ъчаз р!а8иег! ъчКЬ сгарз йас, сЕ пос ачоЫ- ес1, ънои14 епзпаге епиге ехрегпиепсз апс( чгяс зЬагр гпЬегу ирои сЬе 1пчезс(8асог. ТЬезе 1пс1ис)ед сЬе шаЬсбсу оЕ зогпе геяпссюп епгугпез со с!саче ясез еСТксепс!у пеаг йе сепшш оЕ РЕ4А исо1еси1ез апс1 сЬе розяЫе ргезепсе оЕ !псегпа1 гезспссюп з!сез ъч!сЫп атр66ес( Р)ъ)Аз ъчЬозе шсегпа1 зес!иепсез ъчеге ип1споъчп (Сгоые апс1 Аиюгезе !986; !ип8 ес а1. 1990; Каи6иап апс( Ечапз !990).

ТЬе ргоЫеиь Ьаче 1аг8е1у Ьееп зо!нег! Ьу !тргоч)пц йе ъ(ея8п оЕ о11цогсис1еосЫе ргииегз; Ъу ипг(егзсапйп8 йе ягеп8йз апс1 !ипиа6опз оЕ гезспс6оп еигутез; Ьу соичег6п8 Сегпипа1 гезгпс6оп яСез Со !пгегпа! ягез Ьу сопсагегпепга6оп оЕ атр66ед Р14Аз; апс1 Ъу с)еч!яп8 Ьеиег тесЬос)з со е1ип!пасе ргпиеь, с(1чТРз, апд йеггпозсаЫе РХА ро!утегазе !гоги сЬе атр1!Есег! Ргоь!исс ЪеЕоге г(!8езс)оп илсЬ геяпс6оп епгуте(з). Рог а гпоге с)еса!1еъ( с)!зсизз!оп, р(еазе зее йе !исгос)исс!оп со Ргососо! 6. 1п агЫ!сюп со йе Ьаяс тесЬос(з с)!зсиззес! зо Еаг, а 1аг8е ъ апесу оЕ гиоге езосепс сесЬпщиез со с!опе агпрВЕсег! Егаупепь оЕ Р14А Ьаче Ьееп г(езспЪед !и Ьипс(герлз оЕ рарегз риЫ!зЬег! очег сЬе уеагз.

ТЬезе сесЬп!с!иез шс!ис!е 1!8ас(оп-!идерепс)епс с1оп)п8 (Аз1апЫь апъ( г(е !оп8 1990; Яш1сбиег ес а1. 1991; Наип ес а1. 1992; Ка!иг апг! Нспс 1994; Тегпез8еп апс( ЕзсЬпсЬ 1996; Яш1сбпег апг) Таппег 1997), ()РС с1оп!п8 (И!ззоп ес а!. 1991; КазЫсЬсап ес а1. 1992; 5пий ес а!. !993; Еог геч)еън, р!сазе зее !.ечЬ !995), сбгессюиа! с1оши8 ияп8 ехопис1еазе И1 (Ка!иг ес а1. 1992), ги чсчо с!оп!и8 (!опез апг! Ноъчагъ1 1991; О1!пег еС а!.

!993), апс1 СигЬо с!оп!пц (Воуг! 1993). Мапу оЕ йезе теСЬос)з гес)и(ге зрес!а1 зггашз оЕ Е. со16 раг6си1аг чесгогз, о!18опис!еоСЫе ргипегз йас сопса)п гиос66ег1 Ьазез, апъ(1ог сЬе ые оЕ зечега! сбйегепс епгугиез. А!сЬои8Ь йезе тесЬос(з ипг(ег зрес!а1 с!гсипьсапсез тау Ьаче юте асЬапса8е, и и ъИЕсси11 со сЬгп1с оЕ с!ошп8 ргес1кагиепсз ънЬеге йе ые оЕ осси!с сесЬи!с)иез ънои16 Ье оЫ18асогу.

ТЬе Ео!!оън!п8 Еоиг ргососо1з дезсг!Ъе Ьоъч со с!опе агпр!с6ес1 6аупепь оЕ Р)ъ)А Ьу Ыипсепс1 1!Ва6оп (Ргососо! 4), аппеа1гп8 со Т чессогз (Ргососо! 5), апс1 асЫиюп оЕ септипа! геягк6оп ясез (Ргососо! 6) апс1 Ьу изе оЕ сЬе рппсгр!ез оЕ 8епе6с епупеепп8 (Ргососо! 7). В!ип1-епд С!оп~пц о1 РСК РгодисЬ т ну гоггочч!нс шслнт лно ямрге ркотосог гоь ропьн!нс гЬе гегпиш оЕ агпр!!Веб РЬ!А, ас!ар!ей Егот ЪЧе1пег (1993) апгЕ СЬиапВ ес а!. !1995Ь Ьш!бь оп гЬе еаг!гег ччог!с оЕ 1ш апс! ЯсЬтчаггг (1992Ь ччЬо ьЬоччес! йаГ гпсиЬа6оп оЕ а 11Вагюп геас6оп 1и йе ргеьепсе оЕ ап ехсеьь апюипс оЕ геьггкбоп епгугпе сап с1гагпагкаНу 1псгеаье гЬе у1е!д оЕ гесогпЬгпапс р1аяшбь. ТЬе го1е оЕ гЬе геьгг!сгюп епгуте 1ь го с1еаче с1гси1аг апгЕ!юеаг сопсагешегь аг геяпс6оп ягеь йаг аге гецепегасес1 ъчЬеп р1аьтЫ пю1еси1еь !!Ваге го ЕЬегиье!чеь.

ТЬе шегЬогЕ гес!шгеь йас 11Ва6оп оЕ гЬе р1аяпЫ го а гагаес РЬ!А ию!еси!е деьггоу гЬе геьггкгюп яге. ТЬ1ь ргечепп гЬе геьгпсбоп епгугпе Егош Веьггоу1пВ гесогпЬ1папгь Вепегагеб сЕиппц йе 11цаг!оп геас6оп. ТЬе пег еЕЕесс оЕ сопяапг тес!агпабоп оЕ ип!г-1епВЕЬ!Епеаг чесгог шо1еси1еь 1ь го с1пче гЬе ес!ш!1Ьпит оЕ ЕЬе 1фа6оп геас6оп ьггопВ1у ш Еачог оЕ гесогпЬгпапп Ьепчееп чесгог апс1 !пьегг. ТЬе шегЬ06 1ь еЕЕк1епг Ьесаиье геаепега6оп оЕ чесгог РЬ!А, 11Вагюп, апс1 ро!1ьЬЕпВ гЬе гегиип! оЕ РСК-Вепегасед ЕгаВтепгь оЕ РТхА аП оссш ьипи1гапеоиь!у !и гЬе ьаше геасбоп пихгиге. МАТЕЙ!АЕБ САЫТЮЬ1: Р1еаье ьее Аррепг11х 12 Еог арргорпаЕе Ьапд11пц оЕ таЕепа1ь гпаг1еег! чч11Ь <1>.

ВпЕЕегь апг! йо!пЕ1опВ Р!еаье ьее Аррепг!!х ! Еог согпропеп1ь оЕ ьгос!г ьо!и6опь, ЬиЕЕегь, апд геаВеп1ь. Р11и1е ьЕос$с ьо1и6опь Ео йе арргорг1аЕе сопсеп1гапопь. АТР 110 гпм! сЕТ4ТР ьо!ипоп 12 тм! сопгаЕиЕпВ аН Еош гЕЛ!ТРь !Ох Е!пЕчегьа! КСВ Ьиууег ! м рогаьяшп асегаге гьо гпм тгепасегаге (рн 7.61 100 гпм шаьпеь1шп асегаге геггаЬудгаге 5 шм 0-шегсаргоегЪапо1 <1> 100 Иайв1 Ъоч!пе ьегшп а1Ьогшп Епкуптеь апг! ВпЕЕегВ Васгег!орЬаВе Т4 1ЭХА ВВаье ВасьегЕорЬаде Т4 О!0А ро!утегаье Оо пог ые гЬе К!спой Егаьшепг о! Е.

соВ ОХЛ ро1угпегаье аь а ро11ьЬ1па епгуше Ьесаше Ь сагпеь ап епс1оцепооь гепшпа! ггапьуегаье асг1ч1гу. РГО1ОСО! 5 С!оп~пц РСК Ргодис1ь ~про Т Чес1огь нс хснсст 3' лвкнохчс ехтсньсон скнсаатссс Ьу Тас( Ес!4А ро1ушегаае ргочЫеа а ЬсцЫу е(6- с)епс шесЬос1 со с1опе РСК ргог1псп шсо а чессог (Т чессог) сопсашшд а сошр1егпепсагу ипра(тес( 3' сЬугпЫу1 геаЫие (Но1соп апс1 бгаЬагп 1991; МагсЬЙ ес а!. 1991). Т чессога шау Ъе сгеасес! Ьу йе Со!1осч(па сЬгее шейосЬ (Меге! апс! В!ого 1994): ° Ег(аеас а чессог ъч(СЬ геаСНссюп епкугпеа яюЬ аа Хгпс1, НРЫ, апс1 МЬоп сЬас Вепегасе 3'-сегпипа1 ипра(тес( ссеохуСЬупийпе геяоиеа (Коча11с еС а!. 1991; Меас! еС а!.

1991; СЬпапВ ег а1. 1995; Рогач'гоч апс1 К(ч)ап 1997). ° Нае сепп!па1 сгапасегаае апс( с(!оеохуТТР со агЫ а япа1е ргосгийпц Т геядие со сЬе 3' сегпи'- ш ог а 1шеагсхес( чеесог (Нопоп апс1 бгаЬаш 1991). ° (Ле сЬе сешр!асе-шс(ерепс(епс сегпипа! сгапасегаае аессчссу о1 Тас( ТЗЫА ро!успегаае со сага!ухе сЬе аййсюп оу а Т гекЫие со сЬе сегпипа1 3'-Ьус(соху! агоира о( а 1(пеагскес! чеесог (МагсЬи(с ег а1. 1991). А1сегпапче1у, Т чессол сап Ье ригсЬааес( геас(у-шас(е Сгош шапу сошшегсса! сшрр1(ега аа сошропепп о(с1опшВ Ыса (е.ц., РСК-Всгсрс (5К+] (гпмнп Всгасааепес РСК11 ш йе ТА С!опспВ 1ас (гош 1пчпгоВеп; РСЕМ-Т Столп Ргоспеаа) (Непаеп 1995а). МАТЕК!А15 Епкугпеь апс! Вийегь ВаесепорЬаце Т4 ОсчА (салаге Се!ь АВагохе де! Р!еаае аее Яер 5.

Ь(ис!е1с АспЬ апс! О!фопссс!еоссс!еь Тагаег 0счА (25 ссВ7т(), атр(сусег( Ьу РСВ ЪчЬеп йе РСК пихшге сои!а!па тоге йап опе ог ссчо Ьагн(а от агар!сВег! СтЬСА, риг!Ту йе сагаес (гаагпепс Ьу е!ессгор1согеаа сЬгоиаЬ !о1ч те!сспфце!!!пц сетрегасиге ааагоае (р!еаае аее СЬарсег 5, 8.35 8.36 СЬаргег 8: 1и (7!гго Атр11!ссаг(оп оГОЬГА Ьу РСРс Ргососо! 6). !Г вос рипйес1 Ьу ае! е!ессгорЬогеяи рсрч-атр!!Гсес) РЫА айова!о Ье ргерагес) Гог 1ййасюп Ьу ехсгассюп ю!сЬ рЬепойсЫогоуопп апс( о!сгай1сгайоп сйгооаЬ а Сепсгкоп-700 й!сег (р!еасс гее Ргососо1 3). ЧесГоуй Т чесгог рог ап оос!Ые оГ йе йепегас!оп оГ Т чессогя р)еасе сее сйе спиойисйоп со сЫг ргососо1. '!' чессогг аоо' сагаес РЬСАс сепо' со !осе йесг ыпрасгей 3' геаЫиег счйеп стогеп апо' сйасчег( 1иапу йгоеа прес!а! Ес!и!рпсеп$ Игагег Ьай ргеаег Со 74 С Ас!с!!Г!опа! КеацепЬ 5сер 3 оГ йса ргососо1 гес)и(гег ГЬе геа8епса!Гасед гп СЬарсег 7, Ргогосо1 25 ог 26 апд Ргогосо1 2 7.

5гер 6 оГ СЬ15 ргогосо! гес)и(гег йе геа8епгг !Гагед Гп СЬаргег 72, Ргогосо) б, ог СЬаргег 6, Ргогосо! 70. МЕТНО0 1. !п а писгоййе сиЬе, аес ир сЬе Го!!очч!пц!!8ас!оп иихсиге: 25 Ссй)тп! агпр1!йей СагйеС Р)4А ! сс! Т-са!!ео р!аяиЫ 20 па !Ох !!аас!оп Ьойег си! Ьассегюрйаае Т4 РХА !!часе 3 ишь НО со сор! ! Г песеыагу айй А1Р со а йпа) гоп сепсгасюп оГ ! псм. А 15 п1о1аг гасю оГ чессогагпрййей РЫА Ггарпепс и гесопипепс)ес).

5ес ир а сопсго! геассюп йас сои!а!па а!1 сЬе геаиепь 1ьсес1 аЬоче ехсерс сЬе ашр1!йед сагаес ВЫА. 2. 1псиЬасе йе 1!8ас!оп иихшге Гог 4 Ьоига ас 14"С. 3. %1и(е 5 р1 оГ еасЬ оГ йе ссчо 1!пас!оп иихшгеа чч!ГЬ 10 )с! оГ Е1 О апс1 !сапа(опп а яисаЫе яга!п оГ сошресепс Е. со1! со апйЬюйс геыасапсе аа деаспЬед ш СЬарсег 1, Ргососо1 25 ог 26. Р1асе йе сгапаГоппес) си1шгеа оп шед!а соп(а!и!па 1РТС апс1 Х-да1 (р1еаае аее СЬарсег 1, РгоСосо! 27) апс) йе арргорпаге апПЪюйс. 4. Са!си1асе сЬе пшпЬег оГ со!оп!еа оЬса!пес( Ггогп еасЬ оГ ГЬе 1сцайоп пихсигея Рк1с а пшпЬег оГ счЬие со!оп!еа оЬсашед Ьу сгапаГоппас!оп чч!ГЬ сЬе!!8ас!оп геассюп сои!а!п!08 сЬе сагйес Г))ч)А.

Сопйпп йе ргеаепсе оГ йе ашр1!йед Ггайшепс Ьу (О !50!а!!па йе р1ааш!с( Г)ЫАа апд д!8еас!пи йегп чч!ГЬ геаспсйоп епгушеа ччЬоае ясеа йап1с йе !паегс ш сЬе пш1П- р!е с!оп!08 яге ог (!!) со!опу РСК (Ргогосо1 !2). ТЬе гасю о!ЫоеочЫсе со!ошес чаг!ег Ьесюееп с:5 апо 2:!. 5. Ргасс!опасе йе геасг!ссес) Г))ч)А Ьу е!ессгорЬогеяа ГЬгоииЬ ап ацагоае ие! иа!пц арргорпасе Г)ЫА яге шаг)сегя Меагиге йе яге оГ йе с!опед Ггадпепгя 6.