Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - 2001), страница 12

со!|. Хечег|Ье1еая йе ипргочетепЫпаде япсе |Ье !а|е !970а Ьаче еПпипа|е|1 йе еЕ6с)епсу оЕ СгапаЕоппа6оп аа а ро|еп6а1!итбп8 Еас|ог 1п то!еси1аг с!опш8. ТЬеге аге гчно ъчаув |о оЬга)п а|ос)са оЕ сЬеписаПу )п|1исе|1 сотре|еп| Е. со!1. ТЬе Еггаг ор|юп Ь го ригсЬаае Егохеп со|пре|еп| Ьас|епа Его|п а сопипегс)а! аоигсе. ТЬеае ргог!ись аге чегу геПаЫе ап|1 ПепегаПу у)е1|1 ггапаЕогтапь а| Егег!иепс)еа )!Оа со!оп)еаг)|8 оЕ я|регсоПе|1 р!аяп|6 РХА. Ночченег, |Ьеу аге тапу йпеа пюге ехрепяче йап сотре|еп| сеПа ргерагег) 1п |Ье 1аЬогасогу.

Сопипегс|аПу ргог!исег) сотре|еп| сеПа аге печег|Ье1еаа ап ехсеПеп| уагг)аг)с)с |о п|еааиге |Ье ей|с)епсу оЕ!осаПу Пепегаге|1 Яос)са оЕ сотре|еп| сеПа — апг! |Ьеу аге а Пог)аепд |о )пчеа68а|ога ччЬо саггу ои| ггапаЕогтаг)опа ао шЕгег!иеп6у |Ьас п 1а по| есопоппса1 Еог |Ьет |о ехреп|1 |Ье ейог| гег)и)ге|1 |о рго|)исе йе)г очно сотре|еп| си1|игея 1п адйг)оп, вечега! сотрап)еа аеП сотрегеп| а!ос)са оЕ агга)па оЕ Е. соП йас саггу арес)Е|с Пепе|к таг!сега апд аге иаес) Еог раг|ки1аг ригроаеа |и гпо1еси1аг с!оп)п8. Ехатр1еа оЕ |Ьеае шс1и|1е (!) Я)ПЕ а|га)пя ччЫсЬ саггу йааЫ|п8 тигагюпа |и РХА-гера)г рагЬъчауа геаропяЫе !ог |Ье Ь18Ь гасе оЕ геаггап8етепс оЕ сегса|п еи1|агуо|к Пепогпк ае|1иепсея апс) (2) ягаша с1еЕ|с)епг 1п те|Ьу1ааеа я|сЬ аа Ра|п ап|1 Рсгп.

Р1аат1|Ь ргора8а|ег) ш ГЬеае а|га)па сап Ье с1еаче|1 Ьу геа|пс6оп епхутеа |чЬоае ас|п6|у 1а погтаПу Ыос)сег! Ьу тейу!аиоп оЕ очег1аррш8 Рат ог Рст я|ея 1| Ь сонг-еЕЕесг)че ап|Е Еаг 1еаа а88гачаг)п8 |о ригсЬаае сотресеп| яос)са оЕ ягаша аисЬ аа |Ьеае, |нЬ|сЬ аге гг)с!су |о Пгочн ап|1 сПЕ6си1| |о ггапаЕогт. Рог 1аЬога|опеа ияп8 агапе)агд аггаша оЕ Е. со!6 П та)сеа аепае |о ргераге яос!са оЕ со|пре|еп| Ьас|еПа 1п-Ьоиае. ТЬе ргосе|1иге Еог Ь18Ь-ейк)епсу ггапаЕогтаг)оп 1НапаЬап !983), г)еасг)Ье|1 1п Рго|осо1 23, |ног)са |чеП ън1|Ь К-12 яга)па оЕ Е. соП аисЬ аа РН 1, РН5, ап|1 ММ294 апс! у)е1|Ь со|пре|еп| си1шгез |Ьа| сап Ье еПЬег иве|1 1ттес!)аге1у ог агогег! 1п япаП а1прюга а| — 70 С ип|П гес)и)гей 1Е ргерагег) сагеЕиПу, |Ьеае согпре|еп| Ьас|епа сап у)е1|! ир |о 1О |гапя Еогтег) со!оп!еа))г8 оЕ вирегсоПе|1 р1аат)г) РХА. 51гш!аг ейк)епс)еа сап Ье асЬ!енег) ъч1|Ь йе гпе|Ьод иа)п8 "и1|га-со|пре|еп|" Ьас|епа (!попе е| а1.

1990), г)еасг!Ъед ш Рго|осо1 24, |и |чЫсЬ йе Ъас|епа1 си1гиге Ь Пгоччп а| гоот |еп|рега|иге. Ноччечег, аа г!1асиааег) аЬоче, аисЬ Ь18Ь Егес)иепс!еа оЕ |гапа!оггпаьоп аге гег!и)гег! оп1у гаге1у; Еог тоаг гои6пе с!оп)п8 гаа!ся сотре|еп| Ьас|епа ргерагег! Ъу аппр1ег ргоседигеа аге гпоге йап аде|)иаге. Аа а Пепега! ги1е, |Ье тоге аорЬ)я)сагед йе те|Ьод иаег! |о ргераге сотре|еп| сеПя |Ье пюге 1псопяяепг |Ье геаи1|я ТЬе 6па1 те|Ьос) )п |Ье вепеа оЕ ггапаЕогтаг)оп ргогосо1а (Ргогосо! 25) (СоЬеп е| а!. 1972) Ь Ьой гоЪия апд дигаЫе апг) у)е1сЬ согпре|еп| сеПа |Ьа| Пепегаге 1Оч |о !Ог ггапаЕогтес) со!оп)еа/)|8 оЕ аирегсоПе|1 р1аяп)г! Р)ч)А. Р!|у51са! Еч1е1г|ос|8 Ехроаиге |о ап е1ессгка1 сЬаг8е деагаЬП)ген йе тегпЪгапеа оЕ Е.

соП апг! шг)исеа йе Еогтаг)оп оЕ |гапяеп| тегпЬгапе ригеи |Ьгои8Ь ~чЫсЬ РХА гпо1еси1еа сап рааа (Ыеитапп ап6 йоаепЬес)г 1972; Еог геч)е|чя р!еаае атее Епптегтап 1982; Т|юпц ! 99 1; 'чЧеачег 1993). ТЬЬ |пейо|1, |чЬ~сЬ ь )лоччп аа е1ес|горога|юп, чгаа ог181паПу г)ече!прес) со 1пггог)исе РХА |п|о еи1|агуо|к сеПа (Хеитапп е| а!.

!982) апг! гчаа аиЪаес)иеп|1у аг!ар!ее) Еог ггапауогтаг)оп оЕ Е. соП (Ро|чег е| а1. !988; Та1|е|о 1988) апг) о|Ьег Ъас|епа Ьу р!ааппсЬ 1СЬааау апг) рПс)с)п8ег !987; р)ег!1ег ап|1 Ъ|г)г|Ь 1988; М|Пег е| а!. !988). 1| Ь гЬе еаяеаг, Еаяея, тоаг еЕЕ|с)епь апг) тоя гергодис)Ые те|Ьод Еог ггапаЕогтаг)оп оЕ Ьас|епа1 сеПа |ч1|Ь РХА. ° ТгапаЕогтаг)оп ербс|епс|еа ш ехсеаа оЕ 10ь ггапаЕогтапгаl!|8 оЕ РХА Ьаче Ьееп асЬ)ечег) Ьу ор|ип)хш8 чагю|ь рагате|егя шс!исПп8 йе ягеп8|Ь оЕ |Ье е1ес|Пса1 ПеЫ, йе 1еп8|Ь оЕ |Ье е!ес|пса1 ри1ае, |Ье сопсеп|га|юп оЕ !ЭХА, апг) йе сотроя|юп оЕ йе е1ес|горога|юп ЪиЕЕег (Рогнег е| а1.

!988; Тип8 апс1 СЬочч !995). 1.26 СБарлег 1: Р!алтиБ апг) ТЬегг ЮеЕи!пея т Мо!еси!аг С!отп8 ° Моге |Ьап 8088 оЕ |Ье се1!а !п а си1|иге сап Ье ггапаЕог|пе|1 |о а|пркВ1!и геяяапсе Ъу е1ес|горогаПоп, апг! еЕВс!епс!еа арргоасЬ!п8 |Ье |Ьеогейса1 п|ахппшп оЕ опе ггапаЕогшапг рег пю1- еси1е оЕ р1аяпЫ Е|ХА Ьаче Ьееп герог|е|1 !8пигЬ е| а1. 1990). ° Р1аяп!<Ь гап8!п8 1п яхе !гогп 2.6 )сЬ го 85 1|Ь сап Ъе !плгосЫсе|1 лч!ГЬ ейк)епс!еа гап8!п8 Егогп 6 х 10ь ггапаЕог|папга1)л8 оЕ Ел! )А |о 1 х 10~ ггапаЕог|папга1)|8 Е|! )А, геаресг!че1у ТЬ!а ь 10 — 20 йпеа ЫВЬег |Ьап сап Ье асЬ)ече|1 чч!|Ь согпре|епс се!!а ргерагес) Ьу сЬеппса1 |пе|Ьо|)я Тгап|Еогшаг!оп Егел!цепс!еа оЕ |Ь)а |па8п!гил)е аге еарес!а11у |ьеВл1 ъчЬеп сопа|гисПп8 1аг8е апг! Ь|8Ыу со|пр1ех сЕ|ХА 1!Ьгаг!еа (р1еахе аее СЬар|ег 1!).

° Е1ес|горогаПоп ччог)гз |че!1 ъч)ГЬ |поЯ сопипоп1у цаег! 1аЬога|огу алга!па оЕ Е. соБ (Е|оччег е| а1. 1988; Тип8 ап|1 СЬолч !995). Уп11!ге сЬепцса1 ггапаЕогплаг!оп, йе пшпЬег оЕ ггапаЕогплапь Вепегаге|1 Ьу е!ес|горогаПоп шпаг)сег-г!ерепг!епи Рог ехагпр1е, лчЬеп РВК322, ччЬкЬ сагНеа 8епеа сопЕегпп8 геа!агапсе |о пчо апПЬ|о|ка Еа|пр!с!11!и апг) гесгасус1!пе), Ь 1пггосЫсел! ш|о Е. сой Ъу е1ес|горогаПоп, |Ье пшпЬег оЕ геггасус11пе-геяагапг ггапаЕог|папга ь -100-Ео16 1еаа |Ьап |Ье пшпЪег оЕ агпрк!1!|пгеяагапг сгапвЕогшапга !8|ее!е е| а!.

!994). ТЬЬ ейесг Ь по| аееп лчЬеп |Ье р1аяпЫ ь !псгосйсег) |п|о йе Ьас|еьа Ьу сЬеписа! ггапхЕог|паг!оп. А 11)се!у ехр1апа|юп ь йас г)а|па8е ог л)еро!аг!ха|юп сацае|1 Ьу |Ье ри!ае оЕ е1ес|Нса1 сиггепс ргечепь ог г!е1ауа !паегг!оп Ы|о йе шпег се!1 |петЬгапе оЕ |Ье апПрог|ег рго|еЫ геаропяЫе Еог |е|гасус11пе ге|маисе. ОЕ соигае, йе еаае апд ейк)епсу оЕ е1ес|горогабоп согпе а| а рпсе. Е1ес|горогаПоп ь ап ехрепяче Ьияпеая гес!ц!г!п8 соа|1у е!ес|Нса1 ес)ц)р|пепг апд Ь~ВЫу рг!сег! прес!а!1у г!ея8пе|1 сиче||ея Хечег|Ье!еы, Еог п|апу !пче|68а|огя е1ес|горогаПоп, Ьесацае оЕ |ь гергосЫс!Ь!!!гу ап|Е 1ас1| оЕ ппппЬо-)шпЬо, Ь гЬе ргеЕеггед ор|юп. Рог а |пегЬог! Еог |Ье е1ес|горога|юп оЕ Ъас|еьа1 се1!я аее Рго|осо1 26.

Рог пюге г!ела!!я р1еаае аее |Ье !и!оппабоп рапе1 оп н.еСт8ОРО8Ат!Оа|. ЯСКЕЕ!ЧПЧС РОК КЕСОМВПЧА)ЧТ РЕАЬМ!0$ Оп!у гаге1у Ь 11 рова!Ые |о г)егегш!пе Ъу !ооЫп8 ччЬе|Ьег а со1опу оЕ ггапаЕог|пег! Ьассепа сагНеа а гесогпЬ|пап| р1аяпЫ ог ап егпр|у чессог. 1п а Еечч ехсер|юпа1 сааея со!оп!еа соп|ашш8 а гесо|пЬ!пап| р!аяпЫ |пау Ье япа11ег йап поппа! Ъеса|ье |Ье р!аяпЫ ехргеахев а Еоге|8п рго|е!и |Ьа| гесагг!а 8гоччгЬ оЕ йе Ьоаг се!1я ТЬ!а ягиаг!оп сап аНве лчЬеп Еоге!8п 'гл!4А аесрлепсеа епсог!!п8 ге8ц!асогу ог те|пЬгапе рго|е!пя Еог еха|пр1е, аге с!опт !п р1аяпЫ ехргеаа!оп чес|огя Ноччечег, Еоге!8п ргоге)па аге погта!!у пос ехргеаае|1 |о я8п16сапг )ече)х !и р1аяпЫ чесгоь сопипоп!у иаег! Еог с1ошп8.

Очег |Ье уеагя гпапу |пе|Ьода Ьаче Ъееп г!еч!ае|1 |о и!аг)п8ц!аЬ Ьас|еНа ггапаЕог|пег! Ьу гесо|пЬ!пап| р!аяшсЬ Егоп| |Ьоае саггу|п8 еп|р|у чч!16-гуре р1ааш!сЬ. ТЬе пюя |1игаЫе ап|1 Вепега! оЕ гЬеае |пе|Ьос!а |ьеа а поп|)еаггисг!че ЬыосЬепцса1 ргосейше со г!егесг Д-Ва1асгояйаае асг!ч!гу |и ггапзЕог|пед Ьас|епа.

ТЬ!а ргоседше Ь сопцпоп1у цаег! аз а |ея |о |1!я!п8ц!аЬ со!оп!еа оЕ ЬассеНа! се1!а |Ьа| саггу гесо|пЬ|пап| р!аяпнЫтот |Ьоае йа| г)о пос. А!гегпаг!че1у, ш я|и ЬуЬг!йхагюп |пейо|Ь гпау Ье лье|1 |о Ыепг!Еу лч!|Ь сег|а|п|у Ьас|епа1 со!оп!еа |Ьас Ьаче Ьееп Ггап|Еог|пег! лч!ГЬ гесогпЬ|пап| р1аяпЫа лчЬ|сЬ саггу арес|Вс аег)иепсеа оЕ Еоге)8п ЕЛКА. О|Ьег 8епега11у иаеуи1 |пе|Ьог!я аге ача|1аЫе |о апа1ухе |Ье яхе оЕ гесоп|Ь|папс р1аяпЫа апг! |о асгееп ггапаЕоггпег! со!оп!ез Ьу РСК. 'чче Ьаче пос !пс1идед Ьеге апу ргогосо1з |1еа11п8 чч!|Ь йе |ье оЕ апу оЕ |Ье "роя|!че-ае1ес|юп ауагепыЬа| а11о|ч Ьас|еНа ггапаЕог|пес) Ьу гесо|пЪ|пап| р1аяп!|Ь го Вгочч ччЫ1е ацрргехя !п8 |Ье 8голч|Ь оЕ Ьас|еНа ггапаЕогшег! Ьу попгесотЪ|пап| р1аяпЫя ТЬеае роябче ае1есг!оп ауагепь аге гаге1у иаед, апд, !п|1ее|1, п ь роаяЫе |о арепг! ап епьге Ьре|ппе лчогЫп8 лч!|Ь гесот- Гпггодиспоп !.27 Ь)пап| РЫА лч!|Ьоиг ечег пеесПп8 |Ьеш. 1пчеап8а|ога чгЬо Ьаче ап аррегпе Гог еао|епса оГ гЬ!а суре аЬои!д геад |Ье |1ьси|ьюп оп ра8е !.!2 оГ |Ье |п|го|1исдоп |о |Ь!а сЬар|ег ап|1 |Ье рарега спед |Ьеге|п.

пд Кесоп|Ь!пап1 Р!а8гппЬ Ьу а-Соплр!еплепЕаЕ!оп Мапу р1аяпЫ чесгога 1е.8., йе рРС аепея В! иеасдр|, ракеш, апд |Ье|г депчадчеа) саггу а аЬогл ае8шепг оГ Е. сой Р)ч)А сопгяп!п8 йе ге8и1асогу лег!иепсел апд йе сосппц ЫЕоппа|юп Гог |Ье Пга| 146 апипо ас)да оЕ (3-Ва1асгоядаае. ЕшЪеддед !п |Ье сосПп8 ге8!оп ь а ро1ус1оп)п8 я|е |Ьа| гпа|п|а|па ГЬе геасПп8 Егап|е апд геях!|а |п |Ье Ьаг|п1е|ь ш|егро1адоп оЕа япаП пшпЪег оЕ апипо ас)дл ш|о |Ье апипо-|егпипа1 Гга8шепг оЕ /3-8а1асгоа!дале.

Чессога оЕ гЬ!а гуре аге ыед !п Ьоаг сеПа |Ьа| ехрге|ь йе сагЬоху-|епшпа! рогдоп оГ )3-Ва1ас|оядаае. А)ГЬоиВЬ пе!йег йе Ьопепсодед Ега8шепга пог |Ье р1аяпЫ-епсодед Гга8шепга оГ !3-Па)асгоядаае аге гЬепье1чеа аспче, йеу сап а|ьос|а|е |о Еопп ап епхуп|а|каПу асдче рго|еш. ТЬ!а гуре оГ сошр1ешеп|а|юп, ш лчЬкЬ де1е|юп шигапга оЕ |Ье орега|ог-ргохппа1 ае8шепг оЕ |Ье !асЛ репе аге согпр1еп|еп|е|1 Ъу /3-Ва1асгоаЫаае-пе8аг!че пш|ап|а ГЬа| Ьаче йе орега|ог-ргохипа1 героп ш|ас|, ь саПе|! а-сошр1ешепсадоп (П1шапп ес а1.

!967) ГГог пюге |пГоппапоп, р!сале аее йе шЕоппа|юп рапе1 оп а-СС|мргемЕ|ч |А| Ю6|). ТЬе !ас' Ьас|еда йа| геяй Егош а-сошр1ешепсаг!оп аге еая1у гесо8- п|хед Ъесаые йеу Гог|п Ыие со!оп)еа ш |Ье ргеаепсе оЕ |Ье сЬго|по8епк я|Ьяга|е Х-8а! !Ноглч)гх е| а1. 1964; Рач|еа апд !асоЬ !968) (р1еаае аее йе !пЕоппапоп рапе1 оп х-СА|.). Нолчечег, !паегг!оп оГ а Ега8шепл оЕ Гоге!8п Р!ч)А )пго |Ье ро!ус1оп1п8 я|е оЕ йе р1аяпЫ а!шпаг !очаг!аЫу геял1ь !п рго|1ис|юп оЕ ап апипо-|егпипа1 Ега8шепг |Ьас !а по 1оп8ег сараЪ)е оЕ асошр1егпеп|апоп.

Вас|еда саггу!п8 гесогпЪ|пап| р1аяп!да йегеГоге Гопп лчЬ!ле со1ошея ТЬе дече!оргпепс оГ йь яшр!е со1ог |ея Ьаа Вгеаг!у а!шр1|Тлед йе Ыеппйса|юп оГ гесошЬ!пап|а сопаггисгед ш р1аяпЫ чес|огя 1| ь еаау |о асгееп гпапу гЬоиаапда оЕ ггапаГогшед со!оп!еа апд |о гесо8п|хе Егош |Ье!г ччЬ!ге арреагапсе |Ьоае йа| саггу ри|абче гесо|пЪ|пап| р1аяпЫя ТЬе алгос|иге оЕ гЬеае гесошЬ!папь сап |Ьеп Ье чепйед Ъу геягкиоп апа1ул!а оЕ пишргерагапопл оЕ чес|ог Р!ч)А ог Ъу ойег сПа8поапс сп|еда. Рог ргоседигеа Еог асгееп!п8 гесошЬ|папЬ ияп8 а-сошр1ешелаг!оп, р1еаае аее Рго|осо! 27. 8сгееп!п8 Ьу а-сошр!еп|еп|адоп ь Ь!8Ыу дерепдаЫе Ьи| по| со|пр1е|е1у !пЕаП!Ые: Иеп1!Еу| ° 1паегдоп оГ Гоге)8п Р)ч)А доел по| аЬчауа !пас|1чаге |Ье со|пр1егпеппп8 ас||чпу оЕ |Ье а-Гга8- шеп| оЕ /3-8а1асгол)дале.