Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 7
Текст из файла (страница 7)
ТЬе япа11 апипо-тегпнпа1 1га8- гпепт от" (1-Ва1астохттбахе ехргетье6 Ъу р1)С честога !п тгапхуогше6 Ъассепа Ьаа по епдо8епоца !)- Ва1астоаЫахе ас6ч!ту, Нотчечег, тЬе ашшо-тегш!па1 тга8шепт, )тпотчп ах йе а-тга8шепт, сап согпр!ешепт сегсаш пштапь от' 1)-8а!астохЫахе, ччЬкЬ аге тЬешае1чеа (пасбче, ргобцсш8 ап епхуше йат Ьах аЬцп6апт сага!у6с ас6ч(ту.
а-соптр1ешептабоп оссцга тчЬеп рРС р1аяп!6х аге !птгобцсес1 (пто хтга!пх о1 Е. соЛ тЬат ехргеть ап шас6че сагЬоху-тегпппа1 1га8гпепт (тЬе ет-уга8- гпепт) оу !3-8а1астохЫаае. 'тчЬеп а ае8шепт от" 1оге!8п Р!ч)А та с1опе6 тпсо тЬе пш16р1е с!оп!п8 яте оГ р()С чессогя йе ает)цепсе епсо6!п8 тЬе а-1га8тпепт та 6!агцртес1, апс1 а-сотпр!ешепбоп !а еаЬег Вгеат1у хирргегьет( ог аЪо!(аЬет( а!то8етЬег. Вассепа! со!оптеа сопташш8 гесошЬтпапт р1аяпЫа аге тЬеге(оге агттр' апд сопсаш 1611е ог по (1-Ва1астохтЫахе асттчтту. Ву соптгая, Ьастепа! со!оп!еа сопта!и!п8 ешрту р!ахштЫа аге атр' апд аге аЫе то Ьубго1ухе попуеппептаЫе, сЬгошо8епк ацЪхтгатех ацсЬ аа 5-Ьгошо-4-сЫого-3-(пбо1е-!1-й-Ва1астояйе (Х-Ва!) (Ногчч(тх ет а!. 1964; Рагбез апд 1асоЬ 1968; р1еаае хее тЬе тпуогшатюп рапе1а оп Х-САЕ апт! оп а-СОМРЕЕмЕ!9ТАТЮМ). ТЬе ттчо туреа оусо!оп!ет сап йегетоге Ье 6!хт!п8ц!аЬед Ьу а яптр1е, попт1еягцсбче Ь!яосЬештса1 техт (МтПег 1972).
тАтЬеп Х-Ва! ь !ос!ибер !п тЬе а8аг шебтцш, со1оптех саггу(п8 рагепта! попгесошЬтпапт р1аяпиЬ Ьесоше беер Ыце, тчЬегеах тЬоае соптатп)п8 гесогпЬ!пап! р1аяпиЬ еЬЬег гешаш ап ог6!пагу сгеагпу тчЬ!те ог Ъесогпе т!пте6 !п ра1е е88-аЬе11 Ыце (Гог пюге 6есат1я р1еахе хее тЬе тпуогшат!оп рапе1 оп а-СОМРЕЕМЕ!9ТАТЮМ). 1нггогсисгйи 1.11 1983-Ргеьеп1 ТЬе !асеас рЬаае оусопасгис6оп о1 р!аяпЫ чессога Ьаа !пчо1чес! сЬе шсогрога6оп о1 апс!11агу вес)иепсеа йас аге ыес1 1ог а чапесу оу рцгроаея 1пс1цйп8 Вепегасюп о1 а!п81е-асгапгсед РХА гетр!асез !ог Р! !А аес)цепс!и8, сгапаспрс!оп о11оге!8п РХА ае9цепсеа !и чбго, йгесс ае1есс!оп оу гесогпЬспапс с!опея апс) ехргеаа!оп о1 1аг8е апюцпса о1 1оге!8п ргосе!пя ТЬеье арес!а1!хек йпссюпь аге йасиааесс Ъпебу Ьеге апс1 ш тоге с)еса!1 ги 1асег сЬарсега.
Р1аьтЫ Мес1огв Саггуте Огсз о1 Кер!ка11оп Оеггсгег! !гот Кгпв-81гапдед Вас1еггорЬадеь Мапу р1аяпЫ чессога !и сиггепс цье саггу сЬе оп8!п о1 РХА гер!ка6оп !гот сЬе 8епогпе о1 а яп81е-ьггапс!ес! 6!агпепгоы ЬасСепорЬа8е сшсЬ аа М13 ог 11 !р1еаае аее СЬарСег 3). 3цсЬ чесСогя ччЫсЬ аге сютесцпеа саПес1 рЬа8ет)й, согпЪ|пе сЬе Ьеас уеасигеь о1 р1аяпЫ апс1 яп81е-ягапс1- ес1 ЬассепорЬа8е чессога апг) Ьаче сЬе ас!чапса8е оу ичо аерагасе тос)еа оу гер1каооп: аа а сопчепсюпа1 г)оцЫе-асгапг)ес! РЬ!А р!аяпЫ апс1 аа а сегпр1асе со ргойке яп81е-асгапс)ед сор!еа о1 опе оуйе рЬа8егпЫ асгапс)я А рЬа8етЫ сап йеге)оге Ье цаед ш йе аате ччау аа ап огсЬос)ох р1аяпЫ чессог, ог 6 сап Ье иаег) со ргос1цсе 6!апсепсоы ЬассепорЬа8е рагс)с1еа сЬас соиса)п аш- 8!е-зггапс)ес) сор!еа оу с!опес) ве8тепга оу Р!чА.
8!псе йегг !иггос!исС!оп ш СЬе еаг1у 1980я рЬа8ет!сЬ Ьаче е!цп!пасес1 ишсЬ о1 сЬе пеес) со сшЪс1опе ае8тепса о1 1оге18п РХА 1гот р!ая тиЬ шсо сопчепсюпа! а!п81е-асгапдесс ЬассепорЬа8е чессогы Ргос1цссюп оу яп81е-асгапс)ес) РХА !а !пс1цсес1 ччЬеп Ъассепа саггу!п8 а рЬа8етЫ аге !пуессес1 сч!сЬ а Ье1рег ЬассепорЬа8е сЬас сагпеа сЬе Вепеа гес!шгес1 со (1) Вепегасе яп8!е-ягапдес1 РХА угогп а доиЫе-асгапдес) сетр1асе апг! !2) рас1са8е йе яп81е-асгаиг)ег) РХА )псо 61атепсоы чггы рагск1ея ТЬе с)еуесс!че 61атепсоиа чсг!оиа аесгесес) угот а япа11-аса1е сц1шге оу !иуессес! Ьассепа сопсаш сш16с)епс яп81е-асгапс)ес) Р!чА 1ог аес)цепс!п8 !р1еаае аее СЬарсег 12; 1ог ргерагасюп оу гайо1аЪе1ег! а!п81е-асгапссед ргоЬея р1еаае аее СЬарсег 9 ог 1ог а!се-с!!гессес! ишга8епеяя р1еаае атее СЬаргег 13). 1п тиас сааея ра!га оур1аыпЫ чессогь аге ачас1аые сЬас ййег ш сЬе опепса6оп оусЬе ЬассегюрЬа8е ог!8!п о1 гер1касюп.
ТЬе опепсаиоп оуйе оп8!п десегпипеь ыЬ!сЬ о1 сЬе ссчо РХА асгапсЬ сч!11 Ье епсарыс1асес) гпсо ЪассепорЬа8е раг6с1ея Ву сопчеп6оп, а р1ы я8п !+) !ийсасеа йас сЬе оп8!п ш сЬе р!аяпЫ апс! сЬас !и сЬе ЬассепорЬа8е раг6с1е аге !и сЬе аате опепса6оп. рог пюге с!еса!!а оп сЬе деа!8п апс) цье о1рЬа8егпЫя р1еаае аее СЬарсег 3.
Р!аьтЫ Мес1огь Саггуте Вас1еггорЬаее Ргото1егх Мапу р1аяпЫ чессога саггу рготосега с!епчес) угот ЬассепорЬа8еь Т3, Т7, апйог 5Р6 ас))асепс со йе иш!6р!е с1опш8 ясе (МС8). роге!Вп 1ЭХАх !паегсес) ас геасг!сс!оп ясеа чч!сЫп сЬе МСВ сап сЬегеуоге Ъе сгапаспЬег) ш чбго ь Ьеп сЬе 1!иеаг!аег) гесогиЪшапс р1аяиЫ РХА са )исцЬасед ччссЬ йе арргорпаСе Р!ч)А-с!ерепс)епг К!чА ро1утегаае апс1 пЪопис1еоСЫе ргесигаога !р1еаае аее СЬарсег 9). ТЬеае рготосега аге сю арессбс сЬас КХА ро!утегаае 6от 8Р6, !ог ехатр1е, чч111 пос аупсЬеяге КЬ)А угот апу осЬег ЬассепорЬа8е ргопюсег 1осасес) е!ьесчЬеге 1и сЬе р1аяпЫ. Мапу соиипегсса1 чессога !е.8., чессога о1 сЬе рбЕМ аег!еь ог сЬе В1иеаспрс зепеа) саггу сччо ЬассепорЬа8е рготосега ш орроясе опепсасюпя )осасес) оп еасЬ яде оу йе пш16р!е с1опш8 ясе !8Ьогс ес а!.
!988). ТЬ|а ог8апсха6оп а!1осча КЬ!А со Ъе ауисЬеа!гесс ш дассо сгот еКЬег епс1 апс1 ессЬег ягапс1 оусЬе 1оге18п РЬ)А, с!ерепйп8 оп сЬе суре о1КХА ро1утегаье паем ш йе сгапаспрсюп геас6оп. ТЬе К!чу Вепегасес1 ш сЬ)а счау сап Ъе ыес1 аа ЬуЬпйхаооп ргоЬеа ог сап Ье Сгапа!аСед ги се!1-ггее ргоге)п-аупСЬеях)п8 зуагегпя 1п адйС!оп, чесгога саггу)п8 СЬе Т7 Е!2 СБаргег 1: Р!аьгп!г(ь апг! Т)|е!г Юега!пеьь гп Мо(еса!аг С!оп!пд ргогпо|ег сап Ье иьеь! |о ехргеы с1опеь) Р)ъ)А ье|!иепсеь !п Ьас|еПа ехргеьяпд Т7 КЬ)А ро!утегаье (р1еаье ьее СЬар|ег 9, Рго|осо! 8) (ТаЬог апс! К!сЬагг!ьоп 1985). Роьгбъге Бе!ес6оп Мес(огь !сепг!гу!пд р1аяпЫь ъч!|Ь Р)ъ)А !пьеггь сап Ъе ггиыгаг!пд апъ! |ппе-сопьшшпд.
Ноъчечег, а чап'- е|у о( с1ошпд чесгогь Ьаче Ьееп ъ!ече1ореъ! |Ьа| а1!оъч дгоъчгЬ оп1у ог Ьас|еиа1 со1ошеь саггу|пд гесотЬшап| р1аяпЫь (гог геч!еъчь, р1еаье ьее Вигпь апъ( ВеасЬат 1984; Непдеп 1997). Вас|еПа соп|ашшд |Ье еп|р|у рагеп|а! р1аяпЫ аге ипаЫе |о гогт со1оп!еь ипъ!ег ье1ес||че сопйг!опь.
Турка1!у, |Ье р1аяпЫь иьеь! ш йеье ьуыеть ехргеьь а депе ргойк| йа| !ь 1ейа1 !ог сег|аш Ьас|еПа! Ьоыь; с1ошпд а ьедтепг ог гоге!дп Р)ъ)А )п|о |Ье р1аяпЫ !пас||ча|еыЬе депе апъ) геЬечеь йе |охкКу. Рог ехатр!е, ВосЬпег е| а!. (1980), Ма1оу апг( )ъ)ипп (1981), апъ! Сга!пе (1982) ъ(еьсг!Ье сопсдиопь ипъ(ег ъчЫсЬ ггапьгогтес( Ъас|еПа саггу|пд р1аяпЫ чес|огь соъ!!пд гог гег " ъч!!1 йе, ъчЬегеаь гесогпЬ|пап| р1аяпЫь саггу!пд а ьедтепг ог" гоге!дп Р)ъ)А ъч!|Ь!и |Ье гег " депе ъч!11 дгоъч. О|Ьег сопг)!г!опа1!у 1е|Ьа1 депеь иье|1 !п чапоиь роыг!че ье1ес|юп чес|огыпс1ис1е |Ьоье епсосдпд |Ье Ьас|еПорЬаде ). гергеььог (%1ььоп ег а1. 1983; Мопдо1ьи)с е| а1. 1994), ЕсоК1 гпе|Ьу1аье (СЬепд апъ! Мо|!гкЬ 1983), ЕсоК1 епъ(опис1еаье (КиЬп ес а1.
1986), да1ас|оЫпаье (АЬтеь( 1984), со!к!и ЕЗ (Уегпег е| а!. 1985), |гапьсПр|юп гасгог САТА-1(Тпн1е! е| а1. 1996), йе!уяь рго|еш о! фХ174 (НепПсЬ апг( Р1арр 1986), |Ье сс|)В депе ог' Е. соЕ (Вегпагг( 1995, 1996), апг( Ьагпаье (Уахуп!и е| а!. 1996). 1пдепюиь аь йеье роыг!че ье1ес|юп ьуыеть тау Ье, геъч ог' йет Ьаъе гоипг( ъчЫе иье.
1п п|апу саьеыЬе пигпЬег ог росепйа1 с!оп|пд я|еь !ь 1иш|ей йе е85с!епсу ог йе ье1есНоп гпау Ье чаг!аЫе, ьрес!а1 Ьоы се!1ь тау Ъе ге|!и!гесс, апъ) |Ье р1аяшсЬ ~пау Ъе г(ечоЫ ог ъ!еягаЫе (еагигеь (е.д., ЪассеПорЬаде ргогпо|егь апъ) Ьас|еПорЬаде М13 ог!д!и ог' Р)ъ)А гер1ка|юп). 1п сопьег)иепсе, |поы шчеьйдагогь ргегег |о геъ!исе |Ье Ьас(сдгоипъ( ог' етр|у р1аьписЬ Ьу о|Ьег теапь, гог ехатр!е, Ъу орг!т!х!пд йе гаВо ог чесгог Р)ъ)А |о шьегс ш |Ье 1!даооп геас|юп, ъ)ерЬоьрЬогу)аг!пд |Ье чес|ог, ог ияпд йгесг!опа! с1ошпд.
Со1ошеь соп|аш|пд йе |1еяге|1 гесогпЪ|пап| аге йеп Ыепг!((еъ! Ьу ЬуЬг!йхаг!оп ш я|и |о гайо1аЬе1ег( ргоЬеь, геыПс|юп апа1уяь ог япа!1-ьса1е ргерагаг!опь о( р1аяпЫь, апъ)гог ро1угпегаье сЬа!и геасВоп (РСК) атр!!(1саг!оп о! шьег|я [ов-сооу-питЬег Р!аьтгг! Мес!ого Ву соп|гаы |о сопчепВопа1 Ь!дЬ-сору-питЬег р!аяпЫ чес|огь, ъчЬкЬ саггу ьоирег(-ир чегяопь ог" |Ье со1Е1 гер1коп, !оъч-сору-питЪег р!аяпЫ чес|огь аге Ьш1| агоипь( гер1копь ьисЬ аь К1 йа| 1|еер р1аяпЫ РЫА ьупйеяь ипг(ег а чегу ВдЬг ге!и.
ТЬе Вгы депегайоп о!!оъч-сору чес|огь — га|Ьег ЬиПсу апг! га!г1у гоидЬ-Ьеъчп Ьу гог(ау ь ваап|(агг(ь — ъчаь деядпег( со ю!че ргоЫеть ог" |охкиу |Ьаг агоье ъчЬеп раггки1аг |уреь ог" гоге!дп депеь апг) Р)ъ)А ьег)иепсеь ъчеге с1опег( |и р1аяпЫ чес|огь. Мапу депеь сосдпд гог тегпЬгапе апг) Р)ъ)А-Ъ|пйпд ргогешь га!! иио |Ь!ь с1аья аь |1о сег|а|п ргото|егь ап|1 геди1а|огу ьес)иепсеь (е.д., р!еаье ьее РВ1 е| а1. 1979; Напьеп апъ( чоп МеуепЬегд 1979; 1лп1е 1979; Мо тау ап|1 Ке1!еу 1979; Вес1| апъ! Вгетег 1980; 5ргаи е| а1.
1980; С!ачеПе-МагВп е| а1. 1989). 5огпеВгпеыЬеье Р)ъ)А ьеъ)иепсеь апъ( депе ргоъ(исгь аге ю |охк |о йе Ьоы Ьас|еПа |Ьа| К !ь яп|р!у ипроьяЫе |о !ьо!аге ггапьгогтед ьгга!пь ияпд МВЬ-сору-пшпЪегчес|оть. 1г" ггапьгогтапгь аге оЬгашей |Ье|г дгоъчй гаге !ь о(!еп (гиыгаг!пд1у ь1оъч, апъ! |Ье с!опеь( гоге!дп Р)ъ)А ьеъ!иепсеь аге о(геп ипыаЫе. То ьо!че йеье ргоЫе|пь, ти1г!Ригроье!оъч-сору-питЪег чес|огь Ьаче Ъееп ъ(ече1ореъ! йа| саггу г!дЬг(у геди!а!ее( рго)сагуог!с ргопю|егь ъчКЬ а 1оъч 1ече! ог'Ъаьа1 ехргеьяоп, гог ехатр1е, |Ье рЕТ ьепеь о! чес|огь, апъ( рго(ъагуог!с |гапьсир|юп |егпнпа|огыо ргечег|| ьригюиыгапьсПР|юп ог" гоге!дп Р)ъ)А ьег)иепсеь ггот ирыгеат р1аяпЫ ргогпо|егя ТЬеье 1оъч-сору-питЬег чес|огь поъч соте е|!и!Рреь! ъч!|Ь ти!г!Р1е с1ошпд я|еь, ог!д!пь ог" гер1каВоп ог япд1е-ыгапг!еъ! Ьасгепо- 1пттот)исттоп 1.13 РЬа8еы ТЗ апс) Т7 ргошо|егы апс! ойег иаеГи1 шот)и1ат сопчешепсеа оГ ргочеп |чог|Ь.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
