1625913339-c59452d15a7186c2ee84a3bca50107e8 (840101), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Мух F1 поставить на новоескрещивание (3 стакана по 5 самцов и самок). Через неделювыбросить родителей. Проанализировать F2, объяснить результаты.14Тема 4. Построение генетических картСцепленное наследование. Закономерности кроссинговера.Интерференцияобменов,коэффициенткоинциденции.Использование частоты кроссинговера как меры расстояния междусцепленнымигенами.Единицыизмерениягенетическогорасстояния.
Частота рекомбинации в одном эксперименте.Принципы построения генетических карт.Задание.1. Получить гетерозиготу по трем мутациям в Х-хромосоме вследующем скрещивании:♀♀ (4–5 шт.) yct f/ y ct f ×♂♂ (3–4 шт.) y+ct++f / Y –3 стаканаМутации:y (yellow, 1 – 0.0) – желтое тело;ct (cut, 1 – 20.0) – вырезки на крыльях;f (forked, 1 – 56.7) – вильчатые щетинки.2. Проанализировать мух первого поколения, поставить новоескрещивание для получения F2 в 5 стаканах, по 5 самок и 4–5самцов на стакан. Это будет анализирующее скрещиваниетригетерозиготы:♀♀ (4–5 шт.)y ct f/y+ct+f+×♂♂ (3–4 шт.) yct f /Y –5 стаканов3. В F2 подсчитать частоты всех фенотипов по предложеннойсхеме и определитьгенетическиерасстояния между тремялокусами.4.
Вычислитькоэффициенткоинциденции.Построитьгенетическую карту по результатам эксперимента для подгруппы.5. Сравнить с общепринятой генетической картой. Объяснитьполученные отличия.Задание выполняется в течение 4-х недель.15Задача «Сцепление и кроссинговер»Р1♀♀×y ct fy ct f♂♂желтое тело,вырезки на крыльях,вильчатые щетинкиF1 = P2♀♀×y ct f+ + +дикий тип+ + +дикий тип♂♂y ct fжелтое тело,вырезки на крыльях,вильчатые щетинкиГаметы самок:некроссоверперекрест наныеучастке y-ct1) y ct f3) y + +2) + + +4) + ct fПерекрест научастке ct–f5) y ct +6) + + fдвойнойперекрест7) y + f8) + ct +Гаметы самцов (кроссинговера нет):1) y ct f2)Полученное потомство будет иметь те же 8 фенотипов, что игаметы самок, независимо от пола.Удобно анализировать F2 по следующей схеме: разделить мух помаркёру y (серые y+ и желтые y) на две кучи. Одну кучу можноубрать в пустой стакан, чтобы мухи не разбегались, а другуюанализировать на наличие остальных маркеров.
То же самоепроделать с оставшейся кучей. Частоты фенотипов занести в схему.16Схема для подсчета кроссинговера в разных участкахfcty+ctf+ некроссоверные+fct+fctf+ двойной+yf+ffкроссинговер на 2-омкроссинговеркроссинговер на 1-омРасстояние между y и ct:кол-во кроссоверов на 1-м участке = (3)+(4)+(7)+(8)сумма всех особейсумма всех особейРасстояние между ct и f:кол-во кроссоверов на 2-м участке = (5)+(6)+(7)+(8)сумма всех особейсумма всех особейРасстояние между y и f:(кол-во кроссоверов на двух участках + 2×(двойные) =сумма всех особей= (3)+(4)+(5)+(6)+ 2×(7+8)сумма всех особейКоэффициент коинциденцииРеальная частота двойных кроссоверов меньше ожидаемой.
Этоследствие интерференции – меньшей вероятности кроссинговеравблизи точки, где он уже произошел.Интенсивностьинтерференциивыражаеткоэффициенткоинциденции, С. Его смысл – величина отклонения реальной частотыкроссинговера от той, которая ожидалась бы, если бы все событияперекреста были независимы.Для тригибридного скрещивания с локусами a, b и c коэффициенткоинциденции рассчитывается по формуле:C=rdoublerab rbc1718Тема 5. Получение гинандроморфову Drosophila melanogasterМеханизмы определения пола в эмбриогенезе дрозофилы.Понятие о мозаицизме.
Хромосомные мозаики. Гинандроморфы.Мутации, повышающие вероятность потери хромосомы. Принципыкартирования зачатков бластодермы.Рис. 6. Билатеральный гинандроморф. Правая часть – самка ХХ: маркерыдикого типа. Левая часть – самец Х0: брюшко самцового типа и половойгребешок, маркеры w (белые глаза) и m (miniature, короткие крылья)19Рис. 7. Возникновение кольцевой Х-хромосомы в результате хромосомнойперестройки.
Ген w дикого типа (красные глаза) из нормальной хромосомыпри образовании кольца оказывается рядом с гетерохроматином, ипроявление его меняется: глаза становятся пятнистыми (эффектположения)Задание1. Используя линию с кольцевой Х-хромосомой и линию срецессивными маркерами в Х-хромосоме, получить мух, у которыхпотеря Х-хромосомы выявляется по проявлению фенотиперецессивных маркеров.Мутации в линии с кольцевой хромосомой:R(1)2 – кольцевая Х-хромосома, вариант 2, содержит маркерыдикого типа и wvC;wvC - аллель w, ослабленный красный цвет глаз, возник врезультате хромосомной перестройки, перенесшей ген w+ в районгетерохроматина;ljl, lethal(1)jawless (1 – 14.0) – леталь, гибнут личинки;lz, losenge (1 – 27.7) – глаза овальные, узкие, с гладкойповерхностью, самки стерильны.20Задача «Гинандроморфы»2. Определить фенотипы и жизнеспособность полученныхособей.3.
Отобрать мух, среди которых могут быть мозаики.Внимательно осмотреть каждую муху, обращая внимание напоявление маркеров y w f, т. е. на цвет глаз, тела и формущетинок, асимметрию тела, строение гениталий и наличиеполового гребешка. Выявленных мозаиков и гинандроморфовзарисовать в журнале или сфотографировать.4. Появились ли мухи, фенотип которых не соответствуетожидаемому? Объясните, как они могли получиться.Задание выполняется в течение 2-х недель.21Тема 6. МутагенезМетоды получения мутаций.Мутации соматическиеигенеративные.
Методы определения частоты мутаций. Определениечастоты возникновения летальных мутаций в Х-хромосоме (методМёллер-5).Линии и мутации:Muller-5, M-5– линия содержит 2 инверсии в первойхромосоме, рецессивный маркер wa и доминантный маркер В;wa (white apricot, 1 – 1.5) – абрикосовые глаза;B(Bar, 1 – 57.0) – доминантная мутация, узкие,полосковидные глаза, дупликация гена В, в результате неравногокроссинговера В/В даёт реверсию к дикому типу; различаютгенотипы, в ряду которых происходит уменьшение размера глаз:В/+, В/В = B/0, BB\B.Задание1. Скрестить самцов дикого типа, подвергнутых химическому илирадиационному мутагенезу, и виргинных самок линии Мёллер-5(3 стакана).2. Получить F1.
Самки этого поколения будут содержать однухромосому Мёллер-5 и одну Х-хромосому, полученную отмутагенизированного самца. Таким образом, самки могут нестиразные вновь возникшие мутации в Х-хромосоме.3. Поставить индивидуальные скрещивания самок F 1 на своихсамцов (тоже из F1). «Индивидуальные» означает, что в каждуюпробирку помещается одна самка. Это делается для того, чтобы вкаждой пробирке все потомство F2 содержало только однуХ-хромосому от мутагенизированного самца (кроме этого, там,конечно, будет и Х-хромосома М-5, несущая маркеры).(20 тонких пробирок, все пронумеровать).4.
Проанализировать потомство каждого индивидуальногоскрещивания, данные записать в таблицу, составленную попредлагаемому образцу на стр. 24.22Задача «Мутагенез»Результаты анализа F2 могут быть следующими:1) в мутагенизированной Х-хромосоме возникла леталь (насхеме обозначена звездочкой), тогда самцы (4) погибнут, и всесамцы в пробирке будут только фенотипа Мёллер-5: с узкимиабрикосовыми глазами;2) летали нет, тогда в пробирке будет два типа самцов –красноглазые дикого типа (4) и Мёллер-5 (3).Теоретически в результате мутагенеза может возникнуть нетолько леталь, но и видимая мутация, поэтому надо внимательнопосмотреть, нет ли у самцов отличий от дикого типа.
Но частотавозникновения видимых мутаций намного меньше, чем леталей.Если все самцы в пробирке – только М-5, то важно их число.Если общее количество самцов мало (меньше десятка), то этоможет быть результатом случайности. Такую пробирку надопометить, как подозрительную на леталь – l? - и поставить мух из23нее в новый стакан для проверки в следующем поколении.Если же мух в пробирке много, а красноглазых самцов нет, тоХ-хромосома содержит леталь (или полулеталь). Такую пробиркусохраняют, мух не выбрасывают, а пересаживают в новый стакан:♀♀M-5/ℓ×красные глазас вырезкой♂♂ M-5/Yглаза абрикосовыеполосковидныеТак мы сохраним полученную леталь и проверим ее.
Новуюлинию с леталью подписать и сдать преподавателю.Таблица. Анализ индивидуальных скрещиваний линий мухМёллер-5 после мутагенеза.№пробиркиЧислосамцовМ5ЧислосамцовдикоготипаВыводЧто делаем12584-Нет леталиЛеталь ?3Мухи погиблиВыбрасываем культуруСохраняем культуру,ставим на новую среду,проверяем вследующем поколенииИсключаем из анализа411253-6810Развитие непошлоСублеталь ?РазвитиекультурызадерживаетсяФенотип самцане М5отличается отдикого типа.Новая мутация ?Сохраняем культуру,ставим на новую среду,проверяем вследующем поколенииОткладываем анализ дополного вылетакультурыСохраняем культуру,ставим на новую среду,проверяем вследующем поколении5.
Подсчитать частоту возникновения индуцированных мутаций вХ-хромосоме для данного вида и дозы мутагена на подгруппу:24m.f. =число хромосом c леталямичисло проверенны х хромосом=число пробирок с леталямиобщее число пробирокСпонтанная частота возникновения леталей в Х-хромосомесоставляет 0,1–0,2%, т.е. 1–2 летали на тысячу хромосом.Задание выполняется в течение 4 – 6 недель.В нашей работе мы прошли путь:Одна облученная хромосома (один спермий)Одна самкаОдна «пробирка» – линия мух25Тема 7. Эффект положенияЧто такое эффект положения.
Эффект положения мозаичноготипа (МЭП), обусловленный переносом гена w+ в район прицентромерногогетерохроматина.Модификаторыэффектаположения. Изучение влияния супрессоров Su(var) и количествагетерохроматина на мозаичность.Механизм МЭП связан с компактизацией эухроматиновогорайона, приближенного к гетерохроматину и, как результат, синактивацией гена. Предполагают, что существуют белкикомпактизаторы, ответственные за это.Уменьшениеколичествагетерохроматина(делециигетерохроматиновых районов и удаление Y-хромосомы) приводят кперераспределению белков и увеличению их количества вгетерохроматиновых районах, а значит – к усилению ЭП.Механизм действия супрессоров точно не установлен. Возможно,это гены белков-компактизаторов или модификаторов, изменяющихсродство белков к ДНК путем их фосфорилирования илиацетилированияРис.
8. Инверсия в Х-хромосоме, вызвавшая эффект положения. Стрелкамиобозначены точки разрыва26Задание1. Используя предложенные линии, в результате двухпараллельных скрещиваний получить самцов с инверсией вХ-хромосоме, которые различаются количеством гетерохроматина(с Y-хромосомой и без нее) и наличием супрессора.2. В первом поколении разобрать самцов на 4 группы:1) XY с инверсией,2) XY с инверсией и супрессором эффекта положения,3) Х0 с инверсией,4) Х0 с инверсией и супрессором эффекта положения.Какой у них фенотип, почему? Как влияет на ЭП супрессор и дозагетерохроматина?Задание выполняется в течение 2-х недель.Линии и мутацииЛинияIn(1)wm4;Su(var)3-6/TM3,SbSer.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
