166301 (740201), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Для проведения анализа углеводных компонентов в пробирку с конусом типа П4 вместимостью 10 см3 пипеткой вносят 0,5 см3 нейтрализованного гидролизата, добавляют пипеткой 4 см3 о-толуидинового реагента и перемешивают содержимое. Параллельно в другой пробирке готовят раствор сравнения. Обе пробирки нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Затем пробирки охлаждают до комнатной температуры, переливают растворы в кюветы с толщиной слоя 1 см3 и на спектрофотометре измеряют оптические плотности раствора при аналитических длинах волн 365, 385 и 630 нм, используя в качестве раствора сравнения смесь воды и OTP.
В такой же кювете измеряют оптическую плотность контрольного раствора — нейтрализованного гидролизата, разбавленного в 9 раз для учета разбавления при анализе с OTP при длинах волн 365 и 385 нм, используя в качестве раствора сравнения дистиллированную воду.
Для расчета коэффициентов поглощения строят градуировочные графики для используемого спектрофотометра по растворам чистых Сахаров
Вывод уравнений и расчет коэффициентов. В применении к анализируемому раствору Сахаров уравнения Фирордта будут иметь вид
где D36S и D385 — оптические плотности анализируемого раствора
при длинах волн 365 и 385 нм за вычетом поглощения гекеоз; с, и 'Ci—концентрации соответственно пентоз и галактуроновой кислоты, мкг/см3;
— коэффициенты поглощения продуктов реакции с OTP пентоз и галактуроновой кислоты при длинах волн 365 и 385 нм; d — толщина кюветы, см, d= 1 см.
Решая систему двух уравнений, получают уравнения для расчета концентрации, мкг/см3, пентоз
C = ZiD385 -SD365
и галактуроновой кислоты
2=CD365 — EDis5,
где соответствующие коэффициенты будут равны
Расчет массовой доли пектиновых веществ. После расчета концентрацией, мкг/см3, галактуроновой кислоты Ci, пентоз Cl и гекеоз рассчитывают массы полисахаридов и полиуронидов с учетом общего объема раствора пектиновых веществ, разбавлений з при гидролизе и нейтрализации и коэффициентов пересчета моносахаридов в полисахариды:
Галактуронан = сгму · 400 · 0,907 · IO-Y Пентозаны = сп<.нтоз · 400 · 0,88 · 10"6 г, Гексозаны = сгексоэ · 400 · 0,90 · IO-V
Затем рассчитывают общую массу пектиновых веществ как сумму масс всех полисахаридов и полиуронидов тпв = галактуронан + пентозаны -4- гексозаны.
Массовую долю пектиновых веществ Xnii,% к исходной абсолютно сухой древесине, рассчитывают по формуле
где тпа — масса пектиновых веществ, г; g — масса абсолютно сухой навески обессмоленной древесины, г; K3 — коэффициент экстрагирования органическим растворителем.
Построение градуировочных графиков. Готовят по пять растворов чистых Сахаров концентрацией 40, 80, 120, 160 и 200 мкг/см3. Каждый раствор обрабатывают OTP в условиях определения пектиновых веществ и измеряют оптические плотности при 365 и 385 нм, а для растворов глюкозы — дополнительно при 630 нм и строят соответствующие графики, откладывая по оси абсцисс концентрации растворов, мкг/см3, а по оси ординат — значения оптической плотности D.












