15078 (686424), страница 2

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 2)

Течение и симптомы. Инкубационный период — от 1 до 8 суток. У телят: при остром течении — лихорадка, конъюнктивит, дыхание учащенное, понос; при хроническом — пневмония, воспаление суставов.

Летальность — 25—75%. Без лечения болезнь прогрессирует и животные погибают.

Патолого - анатомические изменения. При остром течении в основном изменения бывают в органах брюшной полости. Селезенка увеличена, серого или черно-красного цвета, под капсулой многочисленные кровоизлияния. Слизистая оболочка желудка набухшая, гиперемированная, с кровоизлияниями. Тонкие кишки вздуты, слизистая катарально воспалена.

Слизистая оболочка толстых кишок местами гиперемирована. Мезентериальные лимфатические узлы увеличены и гиперемированы. На эпикарде и эндокарде кровоизлияния. При подостром и хроническом течении труп истощен. У телят иногда в печени многочисленные желто-серые некротические очаги; увеличение и набухание селезенки выражено слабо. У животных поражены легкие — пневмония, фибринозный плеврит (участки пораженного легкого сращены фибринозными спайками с грудной клеткой).

Диагноз ставят на основании результатов лабораторного исследования с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений. У телят дифференцируют от диплококковой инфекции и колибактериоза.

Лабораторная диагностика сальмонеллеза основана на результатах бактериологического и серологического исследований.

Бактериологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой и люминесцентной микроскопии, выделение чистой культуры и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологическим и патогенным свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют паренхиматозные органы или их части: печень с желчным пузырем, почку, мезентериальные лимфатические узлы, трубчатую кость, сердце, перевязанное у основания аорты лигатурой. При подозрении на хроническую форму от телят дополнительно берут измененные участки легких. Материалом для прижизненной диагностики служат фекалии больных животных.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки - отпечатки окрашивают по Граму, обрабатывают сальмонеллезными люминесцирующими сыворотками и микроскопируют.

Сальмонеллы представляют собой грамотрицательные палочки размером (2 – 4)х(0,7 – 1,5)мкм, располагающиеся одиночно. Спор и капсул не образуют. Подвижные, за исключением S. pullorum. Положительным результатом люминесцентной микроскопии считают свечение типичных для сальмонелл форм не ниже чем на два креста.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Сальмонеллы—факультативные анаэробы, температурный оптимум 37 – 38 ^оС, рН 7,2 – 7,4. Исследуемый материал высевают в МПБ, в чашки Петри с МПА и одной из плотных дифференциально-диагностических сред (Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфитный агар). При подозрении на хроническое течение сальмонеллеза делают посевы на одну из сред обогащения (селенитовая, Мюллера, Кауфмана, Киллиана). Посевы инкубируют 16...20 ч, после чего просматривают невооруженным глазом, отмечая колонии, характерные для сальмонелл.

Сальмонеллы на средах Эндо и Плоскирева формируют прозрачные бесцветные колонии, на среде Левина — голубоватые, на висмут-сульфитном агаре — черные с металлическим блеском, за исключением S. choleraesuis, S. abortusovis, S. gallinarum-pullorum, которые на висмут – сульфитном агаре образуют нежно – зеленые колонии. На мясо – пептоном агаре сальмонеллы растут в виде гладких, прозрачных, бесцветных колоний с ровными краями; в мясо – пептоном бульоне — с диффузным помутнением среды. При отсутствии колоний сальмонелл на МПА, дифференциально – диагностических средах и наличии роста бактерий, похожих на сальмонеллы, в средах обогащения из последних делают высев на плотные среды, чтобы получить изолированные колонии. Из подозрительных колоний делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют.

Окраска бактерий по методу Грама. Это один из наиболее распространенных сложных методов окраски, основан на различиях в строении и химическом составе клеточной стенки. В зависимости от результатов окрашивания все бактерии подразделяют на грамположительные и грамотрицательные.

При окрашивании генциановый фиолетовый в присутствии йода образует комплекс с компонентами клеточной стенки. У граммположительных прокариот клеточная стенка при обработке этанолом удерживает образовавшийся комплекс и бактерии окрашены в фиолетовый цвет; у грамотрицательных этанол вымывает этот комплекс и после дополнительного окрашивания препарата фуксином клетки приобретают красный цвет.

Этапы окрашивания: На фиксированный мазок помещал полоску фильтровальной бумаги, пропитанную спиртовым раствором метилвиолета, наносил на нее несколько капель дистиллированной воды для увлажнения, выдерживал 1 – 2мин, бумажку удалял. Препарат, не промывая, обрабатывают раствором Люголя 1 – 2мин; раствор сливал. Затем наносил 96%-й этанол на 30с, после чего препарат тщательно промывал водой и окрашивал фуксином Пфейффера (1:10) 1 – 2мин. Вновь промывал водой, подсушивал фильтровальной бумагой и микроскопировал.

Микроскопическая картина: бактерии, окрашенные в темно-фиолетовый цвет, относят к грамположительным, или фирмикутам, в красный цвет — к грамотрицательным, или грациликутам.

При обнаружении бактерий, типичных по морфологическим и тинкториальным свойствам для сальмонелл, у них изучают ферментативные свойства.

Подозрительные на сальмонеллы колонии пересевают в пробирки с комбинированными средами Олькеницкого или Ресселя.

Среда Олькеницкого: агар питательный сухой — 25 г, лактоза — 10 г, аммоний-железо сульфат (соль Мора) — 0,2 г, тиосульфат натрия —0,3 г, мочевина— 10 г, 0,4%-й водный раствор фенолового красного — 4 мл, дистиллированная вода—1000 мл. Соли предварительно растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды. Углеводы и мочевину также растворяют в небольших объемах воды при подогревании на водяной бане. Сухой питательный агар расплавляют в оставшемся объеме воды при нагревании и помешивании. Затем все компоненты соединяют, перемешивают с расплавленным агаром, фильтруют через марлевый фильтр, устанавливают рН 7,2...7,4, добавляют индикатор и разливают в пробирки по 6...7 мл. Среду стерилизуют текучим паром три дня по 20 мин и скашивают, оставляя столбик среды высотой 2...2,5 см. Готовая среда бледно-розового цвета.

Среда Ресселя: к 100 мл 1,5%-го мясо-пептонного агара (рН 7,2) прибавляют 1 % лактозы, 0,1 % глюкозы и 1 мл индикатора Андреде, среду разливают в пробирки по 5...6 мл, стерилизуют в автоклаве при 112 °С 20 мин и скашивают, оставляя столбик среды высотой 2...3 см. Готовая среда бледно – розового цвета.

В состав сухой среды Ресселя входит сухой питательный агар, индикатор ВР, лактоза и глюкоза. Приготовленную среду разливают в стерильные пробирки и стерилизуют текучим паром два раза по 30 мин. Среду скашивают, оставляя столбик 2...2,5 см. Готовая среда фиолетового или розовато-серого цвета. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С 18...20 ч.

Учет биохимических свойств сальмонелл на указанных средах—визуальный, по изменению цвета среды. На среде Олькеницкого появление желтой окраски в скошенной части агара характеризует ферментацию лактозы и сахарозы; в столбике — глюкозы. Газообразование устанавливают по появлению пузырьков, разрывам агара или его отслоению от стенок пробирки. Об образовании сероводорода судят по почернению среды. При росте культуры, гидролизующей мочевину, среда Олькеницкого приобретает красно-малиновый цвет. На среде Ресселя определяют ферментацию глюкозы в столбике по изменению окраски и лактозы в скошенной части. Цвет среды меняется в зависимости от индикатора, входящего в состав среды: индикатор Андреде дает малиновую окраску, а индикатор ВР — синюю. Газообразование устанавливают также по появлению пузырьков и разрывам агара.

Для дальнейшего исследования отбирают культуры, не утилизирующие мочевину, ферментирующие глюкозу, не разлагающие сахарозу и лактозу, образующие сероводород. Такие культуры пересевают со среды Олькеницкого в среду Гисса с маннитом, в полужидкий агар для определения подвижности и ставят пробу на индол. Дополнительно делают пересев на МПА, чтобы накопить чистую культуру возбудителя для постановки реакции агглютинации.

При выделении культур с ферментативными свойствами, характерными для представителей рода сальмонелл (ферментируют глюкозу, маннит, не утилизируют лактозу, сахарозу, не расщепляют мочевину, не образуют индол, не разжижают желатину, растут на агаре Симмонса, т. е. усваивают цитратно-аммонийные соли), проводят их серологическую идентификацию.

Антигенную структуру сальмонелл выявляют с помощью наборов сальмонеллезных О – комплексных и монорецепторных О – и Н – агглютинирующих сывороток в РА на стекле. Сыворотки выпускают наборами № 1 и № 2 в двух коробках.

Состав наборов

Исследуемую культуру выращивают на скошенном мясо – пептоном агаре при 37 – 38 °С в течение 18 – 24 ч.

Первоначально культуру испытывают с О – комплексными сыворотками. Для этого реакцию агглютинации на стекле ставят с каждой О – комплексной сывороткой, начиная с первой, до получения положительной реакции с двумя сыворотками.

Серогрупповая принадлежность сальмонелл по результатам РА

Чтобы определить серотиповую принадлежность, сальмонеллы, отнесенные к определенной серогруппе, исследуют с Н – моносыворотками 1 – й и 2 – фазы. При выборе сывороток для реакции исходят из антигенной структуры сальмонелл той группы, к которой отнесена определяемая культура, с учетом вида животного.

Культуры сальмонелл, которые не удалось идентифицировать сыворотками из набора, следует направлять в Государственный институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.

Техника постановки РА: из флакона, не захватывая осадка борной кислоты, пастеровской пипеткой набирают сыворотку, одну каплю которой наносят на предметное стекло. Бактериологической петлей в нее вносят 20...24-часовую исследуемую агаровую культуру сальмонелл. Для РА с О – сыворотками культуру берут с верхней части агара, с Н – сыворотками – с нижней, вблизи конденсационной жидкости. Петлю с культурой увлажняют в капле сыворотки, затем культуру тщательно растирают рядом с каплей, смешивают с сывороткой и энергично (6 – 10 раз) покачивают стекло круговыми движениями. Агглютинация наступает не позднее 1 – 2 мин. О – агглютинат выглядит как плотные, с трудом разбивающиеся комочки и зернышки; Н – агглютинат – крупные, рыхлые, легко разбивающиеся хлопья. Агглютинация проявляется в виде склеивания бактериальной массы и полного или частичного просветления жидкости. При отрицательной реакции культура после тщательного смешивания с каплей сыворотки образует гомогенную взвесь.

Агглютинирующие адсорбированные О – и Н – сыворотки выпускают согласно серологической классификации бактерий рода сальмонелл наборами и отдельными рецепторами. Кроме моно-рецепторных О – и Н – сывороток производят поливалентную сальмонеллезную О – сыворотку против сальмонелл основных пяти групп (А, В, С, D, Е). Наборы О – и Н – сывороток выпускают двух видов. Узкий набор состоит из 28 рецепторов. Расширенный набор включает в себя 108 рецепторов.

Монорецепторные О – и Н – сыворотки применяют для идентификации бактерий рода Salmonella в реакции агглютинации на предметном стекле, поливалентную – для отбора культур из первичных посевов.

Поливалентная сыворотка против сальмонелл основных групп содержит О – агглютинины против антигенов 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 19, 26nvi.

Характеристики

Список файлов курсовой работы