92114 (680434), страница 2

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 2)

Для проведения радиоиммунного анализа необходимо иметь радиоактивное соединение и смесь -глобулинов, содержащую антитела к этому соединению, которые специфически связывают его. Чувствительность метода обеспечивается радиоактивностью, а специфичность – использованием антител.

Ферментиммунный анализ основан на конкурентном связывании идентичных лигандов и антитела. В этом методе чувствительность детекции достигается путем использования не радиоактивности, как в радиоиммунном анализе, а ферментов. Специфичность же обусловлена использованием антитела.

Пример - сатурационный анализ. Конкурентное взаимодействие молекул гормона и специфического антитела или другого связывающего белка. Введение меченого лиганда (гормон), маркированного радиоактивным изотопом или коньюгированного (связанного) с каким-либо ферментом, приводит к насыщению (сатурации) связывающего белка. Добавленный к системе немеченный гормон вытесняет часть молекул лиганда из комплекса с белком.

Метод изотопов - принцип его заключается в том, что синтезируется вещество, в молекулы которого вводят атомы радиоактивных или тяжелых изотопов и далее используют для проведения клинических анализов.

Радиоактивные изотопы представляют собой нестабильные формы элементов, способные самопроизвольно распадаться, переходя в более устойчивые формы. Распад сопровождается испусканием альфа, бета или гамма излучения или их сочетанием. В биохимии широко применяются следующие радиоизотопы: углерод-14, водород-3 (тритий), сера-35, фосфор-32 и 33. Эти элементы испускают только бета-излучение. Обнаружить и измерять радиоактивность можно разными способами, используя счетчик Гейгера-Мюллера, жидкостной или твердотельный стинтилляционные счетчики и радиоавтографию.

Ко всем методам, используемым в биохимии, предъявляются определенные требования: они должны обладать точностью, воспроизводимостью, чувствительностью и специфичностью.

Точность отражает степень приближения результата анализа к истинному содержанию определяемого вещества. Представление о точности применяемого метода получают опытным путем. В анализируемый материал (кровь, моча, ткань) вводят известное количество исследуемого препарата и проводят определение.

Воспроизводимость результатов достигается проведением повторных анализов одного и того же образца биологического материала или параллельные определения в серии экспериментов (не менее 20 различных образцов). После этого вычисляют величину стандартного отклонения полученных результатов повторных исследований от среднего содержания.

Под чувствительностью метода подразумевается наименьшее количество определяемого вещества, которое может быть установлено с достаточной достоверностью. Чувствительность метода можно увеличить изменением условий измерения, например, использованием микрокювет в спектрофотометрах и флюориметрах, а также применением более совершенных измерительных приборов. От чувствительности метода зависит и воспроизводимость результатов.

Специфичность – это измерение какого-либо вещества в отличие от других веществ, присутствующих в исследуемом материале. Для обеспечения специфичности химических методов необходимо качественное выделение исследуемого материала, применение характерных для него химических реакций, качество и чистота используемых реактивов, использование совершенных приборов.

Основное требование к методам исследований – это адекватность их к поставленной задаче.

Для оценки полученных результатов используют биометрию – совокупность математических методов, применяемых в биологии и заимствованных из области математической статистики и теории вероятностей. Современная биометрия – раздел биологии, который включает планирование наблюдений и статистическую обработку материала (результатов).

В чем заключаются причины варьирования результатов наблюдений? Биологические признаки могут варьировать под влиянием самых различных причин. Варьирование результатов происходит вследствие:

1) естественной изменчивости признаков, 2) ошибки измерений

Точность измерений:

Обычно измерения проводят с точностью до десятых, сотых или тысячных долей единицы, затем цифры округляют. Полученные данные группируют - объединяют в относительно однородные группы.

Погрешность или ошибка – это разница между результатами измерений и действительно существующими значениями результата измеряемой величины. Ошибки могут возникать из-за неисправности и неточности измерительных приборов и инструментов (технические ошибки), личных качеств исследователя, его навыков и мастерства в работе (личные) и целого ряда других причин (случайные). Технические и личные ошибки являются систематическими, неслучайными, их можно преодолеть, совершенствуя технические средства, условия работы и личный опыт.

Случайные ошибки – это ошибки одиночного значения. Наличие случайных ошибок выражается в том, что при повторном определении одного и того же материала получают не одинаковые, а различающиеся между собой результаты. Величина случайных ошибок является мерой воспроизводимости лабораторных показателей. Чем меньше случайных ошибок, тем лучше вопроизводимость данных. Полученные данные группируют и объединяют в относительно однородные группы, составляя статистические таблицы, статистические ряды – ряд числовых значений признака, расположенных в определенном порядке. Вариационный ряд или ряд распределения – это двойной ряд чисел, показывающий, каким образом числовые значения признака связаны с их повторяемостью в данной статистической совокупности.

Средние величины в отличие от индивидуальных числовых характеристик обладают большей способностью характеризовать целую группу однородных единиц одним средним числом. Среднее арифметическое – это центр распределения, вокруг которого группируются все варианты статистической совокупности.

Результаты биохимических исследований выражаются в единицах СИ. Основные единицы системы СИ – метр, килограмм, секунда, моль. Содержание вещества, молекулярная масса которых известна, выражается величиной молярной концентрации. Молярная концентрация – это количество молей вещества, находящихся в литре раствора. Для выражения активности ферментов применяется размерность моль/секунда/литр.

Расчет концентрации раствора:

массовая концентрация, это количество вещества: г/л , мг/л, мкг/л

молярная концентрация, это количество молей вещества в литре раствора: моль = м.в. /1 л , М/л, мМ/л = 0,1 М, мкМ/л =0,001 М.

Пример : Для приготовления раствора какой-либо концентрации необходимо рассчитать по формуле вещества его молекулярный вес (таблица Менделеева) и это количество вещества растворить в 1 раствора. Если необходимо приготовить раствор меньшего или большего объемов составляют пропорцию: молекул. вес вещества - 1000 мл

Х г вещества - 100 мл

Активность фермента выражается его молярной концентрацией за определенный промежуток времени (мин, сек). Выражается активность фермента содержанием его в определенном количестве (г или мг) ткани, либо (г или мг) белка, содержащегося в определяемой ткани, сыворотке крови, ликворе. Пример: моль/мин/г ткани, мкмоль/мин/мг белка.

Пример:

Для определения количества вещества строится калибровочная кривая. Для этого готовят растворы вещества, например, белка известной концентрации (15-20 разведений) и измеряют на спектрофотометре при определенной длине волны. По полученным точкам строят калибровочную кривую. Раствор неизвестного вещества также измеряют на спектрофотометре. Полученную цифру сравнивают с калибровочной кривой, определяя по ней количество вещества в растворе.

Имеются приборы с компьютерными программами для определения концентрации растворов. В этих электронных приборах учитывается необходимая длина волны, объем или вес образца, время протекания реакции.

Таким образом, биохимические методы позволяют объективно оценить и охарактеризовать состав сложных биологических систем, какими являются биологические жидкости организма человека. Биохимические анализы широко используются в медицине для дифференциальной диагностики заболеваний, прогноза, мониторинга и скрининга. Биохимические исследования помогают подтвердить или опровергнуть диагноз, выявить болезнь в доклинической стадии, проследить течение болезни и возможные осложнения, оценить эффективность проводимой терапии. Основная задача клинической биохимии - исследование функционирования живых систем с точки зрения процессов, протекающих в клетках и в клеточных структурах. Однако полученные результаты необходимо рассматривать на уровне органов, тканей, всего организма и во взаимосвязи целого организма с окружающей средой.

Для получения результатов биохимического анализа, правильно отражающих происходящие в организме изменения, необходимо обеспечить соблюдение стандартных условий предлабораторного этапа, который включает: соответствующую подготовку пациента к исследованиям, правильное взятие пробы биологического материала, соблюдение условий его хранения и транспортировки в лабораторию.

Какие методы количественного анализа используют в клинико-диагностических лабораториях - это:

1. Весовой (гравиметрический) анализ - основан на выделении вещества в результате определенных реакций, высушивания и точного взвешивания его на аналитических или торсионных весах.

2. Объемный (титрометрический) анализ - основан на точном измерении объемов реагирующих между собой веществ в эквивалентных (равных) количествах. Объемный анализ включает метод нейтрализации, метод окислительно-восстановительных реакций, комплексонометрии, метод осаждения и т.д.

3. Электрообъемные (электроаналитические) методы - основаны на электрохимических свойствах растворов. В эту группу входят потенциометрия, вольтамперометрия, полярография и т.д. Определение проводят в биологических жидкостях с помощью ионоселективных электродов.

4. Оптические методы -поляриметрия, фотометрия.

5. Из методов разделения биологического материала наиболее часто используют следующие методы: электрофорез, хроматографию, ультрацентрифугирование Для этой цели разработаны и серийно выпускаются автоматические анализаторы для биохимических, гематологических, микробиологических и других исследований.

Оценка качества выполненных исследований позволяет предупредить и устранить возможные ошибки, повысить точность и диагностическую надежность результатов анализа.

ЛИТЕРАТУРА

1. Мецлер Д. Биохимия. Т. 1, 2, 3. “Мир 2000

2. Ленинджер Д. Основы биохимии. Т.1, 2, 3. “Мир” 2002

3. Фримель Г. Иммунологические методы. М. “Медицина 2007

4. Медицинская электронная аппаратура для здравоохранения. М 2001

5. Резников А.Г. Методы определения гормонов. Киев “Наукова думка 2000

6. Бредикис Ю.Ю. Очерки клинической электроники. М. “Медицина 1999

Характеристики

Список файлов реферата