165900 (624894), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Это широко распространенное соединение, встречающиеся также во многих растениях и грибах. β-Каротин является предшественником витамина A и его промышленное получение представляет интерес для медицины и некоторых других облестей. Разработаны и применяются биотехнологические процессы получения β-каротина с использованием красных дрожжей, например Rhodotorula glutinis.
У базидиомицетовых дрожжей встречаются и другие виды каротиноидов. Например, красные дрожжи Phaffia rhodozyma образуют каротиноид астаксантин.
Астаксантин
Астаксантин - широко распространенный в природе каротиноидный пигмент ярко-красной окраски. В отличие от β-каротина имеет два дополнительных атома кислорода на каждом из колец. Впервые был выделен из омаров в 1938 году, сейчас обнаружен в тканях многих растений и животных. Особенно в большом количестве содержится в тканях креветок, крабов, лососевых рыб, придавая им красный цвет.
Астаксантин является одним из наиболее активных антиоксидантов и используется в медицине для лечения ряда заболеваний. Препараты астаксантина широко используются в качестве кормовой добавки в рыбоводстве, особенно при выращивании лососей, и аквариумоводстве.
Основным источником для получения астаксантина служит водоросль Haematococcus инцистированные клетки которой содержат до 4% каротиноида. Астаксантин был обнаружен также в дрожжах Phaffia rhodozyma (телеоморфа Xanthophyllomyces dendrorhous). Генетически модифицированные штаммы Phaffia содержат до 1-2% астаксантина и могут также использоваться для промышленного получения этого каротиноида.
Клетки овальные или круглые, иногда удлиненные. Почкование истинное, многостороннее. Может формироваться примитивный псевдомицелий, но истинного мицелия не образуют. Диплоидизация происходит в результате слияния двух гаплоидных клеток (гологамия). Вегетативно размножаются в основном диплоидные клетки. Аски образуются преимущественно из вегетативных диплоидных клеток. Аски круглые или овальные, при созревании спор не вскрываются. Аскоспоры круглые или слабоовальные, бесцветные, гладкие, 1-4 в аске. Все виды активно сбраживают сахара. Дрожжи этого рода с давних времен распространены в кустарном виноделии и широко используются в разных отраслях бродильной промышленности, в связи с чем они более всех других дрожжей изучены в разных аспектах. Их систематика, однако, многократно пересматривалась. Центральный вид - Saccharomyces cerevisiae известен в десятках синонимов, которые в настоящее время рассматриваются как производственные расы, но не самостоятельные виды.
Потребность дрожжей в витаминах
Одна из характеристик, используемых для таксономического описания дрожжей - потребность в витаминах. Более 80% всех известных видов дрожжей не способны к росту на среде, не содержащей витамины (ауксотрофны). Наибольшее число видов (около 65%) нуждается в биотине и тиамине. Из других витаминов в таксономии дрожжей используется определение потребности в рибофлавине, пантотеновой кислоте, пиридоксине, инозите и никотиновой кислоте.
Для определения потребности исследуемого штамма в том или ином витамине его выращивают на стандартной среде, содержащей определенный витамин, и сравнивают с ростом на этой же среде, не содержащей витаминов. В случае, если добавление витамина приводит к существенному увеличению роста, делают вывод о ауксотрофности штамма по этому витамину. Тесты на способность к росту на безвитаминной среде и определение потребности в конкретных витаминах входят в стандартное описание вида дрожжей.
Зависимость скорости роста ауксотрофных штаммов дрожжей от содержания определенных витаминов была использована для разработки методов определения концентрации витаминов в различных средах по измерению прироста дрожжевой биомассы.
Стандартные среды для физиологических тестов
Разделение дрожжей на виды базируется на многих характеристиках, среди которых важное место занимают как морфологические, так и физиологические признаки - способность к росту на различных органических соединениях в качестве единственного источника углерода и энергии, способность к усвоению различных источниках азота, потребность в различных витаминах и т.п. Все эти характеристики сильно зависят от состава среды и условий культивирования, поэтому в систематике дрожжей разработаны и применяются среды стандартного состава. Полный набор таких сред выпускается в готовом виде фирмой Difco (Difco Laboratories, в 1997 г. вошедшая в состав BD Diagnostic Systems). Среди этих сред наиболее популярны: морфологический агар - для описания макро- и микроморфологических характеристик дрожжевой культуры, азотная основа - для определения способностей к росту на различных источниках углерода, углеродная основа - для определения способности к усвоению различных источников азота, базвитаминная среда - для определения потребностей в витаминах.
Состав этих сред приведен в таблице:
Ингредиенты (на 1 л воды) | Морфологи-ческий агар | Азотная основа | Углеродная основа | Среда без витаминов |
Источники углерода и азота, г | ||||
Глюкоза | 10 | — | 10 | 10 |
(NH4)2SO4 | 3.5 | 5 | — | 5 |
Аспарагин | 1.5 | — | — | — |
Макроэлементы, г | ||||
КH2РO4 | 0.85 | 0.85 | 0.85 | 0.85 |
К2НРО4 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
MgSO4 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
NaCl | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
СаСl2 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
Аминокислоты, мг | ||||
L-Гистидин НСl | 10 | 10 | 1 | 10 |
DL-Метионин | 20 | 20 | 2 | 20 |
DL-Триптофан | 30 | 20 | 2 | 20 |
Витамины. мкг | ||||
Пантотенат кальция | 2000 | 2000 | 2000 | — |
Фолиевая кислота | 2 | 2 | 2 | — |
Инозит | 10000 | 10000 | 10000 | — |
Никотиновая кислота | 400 | 400 | 400 | — |
Парааминобензойная кислота | 200 | 200 | 200 | — |
Пиридоксин НСl | 400 | 400 | 400 | — |
Рибофлавин | 200 | 200 | 200 | — |
Тиамин НСl | 400 | 400 | 400 | — |
Биотин | 20 | 20 | 20 | — |
Микроэлементы, мкг | ||||
Н3РО3 | 500 | 500 | 500 | 500 |
CuSO4 | 40 | 40 | 40 | 40 |
KJ | 100 | 100 | 100 | 100 |
FeCl3 | 200 | 200 | 200 | 200 |
MnSO4 | 400 | 400 | 400 | 400 |
Na2MoO4 | 200 | 200 | 200 | 200 |
ZnSO4 | 400 | 400 | 400 | 400 |
Промытый агар, г | 18 | — | — | — |
Количество сухой готовой среды фирмы «Difco» на 1 л, г | 35 | 6.7 | 11.7 | 16.7 |
ПРОИЗВОДСТВО КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО β-КАРОТИНА ИЗ
МОРКОВИ
Исходным сырьем для получения кристаллического β-каротина является морковь, содержащая среди каротиноидов 85—90% β-каротина. Наоборот, в тыкве содержание β-каротина составляет лишь 60—70%. Производство кристаллического каротина включает следующие стадии: 1) экстракция каротина из сухого коагулята белков органическим растворителем; 2) омыление концентрата; 3) экстракция каротина из омыленной массы и 4) кристаллизация каротина.
Экстракция каротина. Большинство исследователей сходятся на применении в качестве органического растворителя для экстракции р-каротина хлорированных углеводородов (в основном дихлорэтан). Существует мнение о целесообразности предварительной экстракции белкового коагулята спиртом для удаления стеринов, фосфатидов, свободных жирных кислот и других веществ. Однако дополнительная экстракция спиртом сильно осложнит технологию производства, поэтому необходимость этого процесса нуждается в технико-экономическом обосновании. Экстракцию осуществляют дихлорэтаном в экстракторах непрерывного действия (при крупном производстве) или в аппаратах типа Сокслета при небольших масштабах производства. Дихлорэтана в реактор загружают 400% к массе сухого коагулята. Экстракцию ведут в течение 1—1,5 ч. Содержание каротина в шроте не должно превышать 5% к введенному каротину с белковым коагулятом. Затем в испарителе 2 в присутствии СО2 отгоняют дихлорэтан (температура не должна быть выше 50° С).
Омыление концентрата. Омыление производят 10%-ным раствором едкого кали, которого добавляют около 10% к массе концентрата. Процесс проводят в реакторе 3 с обратным холодильником в течение 20 мин при 50° С. При омылении образуется осадок, содержащий до 80% каротина и жидкое мыло. Осадок отфильтровывают на нутч-фильтре 4 и промывают спиртом от мыла и красящих веществ.