14831 (585544), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Наши исследования по санации промывных буферных сред комплексом антибиотиков ампицилин+гентамицин доказывают, что даже при многократном использовании коров-доноров на питательных средах (МПБ и МПА) из проб промывных буферных сред, наблюдается незначительный рост микрофлоры. У отдельных коров-доноров эмбрионы извлекали по 3–4 раза, тем не менее, ни у одного из них эндометрита не наблюдали.
Это свидетельствует о том, что санация промывных буферных сред является средством профилактики заболеваний матки у коров-доноров.
В последние годы многие исследователи стали предлагать отмывку эмбрионов в нескольких стерильных средах, что по их мнению снижает концентрацию вирусов и бактерий в среде до неопасного субинфекционного уровня уже после третьего разбавления (E. Singh et al., 1982; D. Stringfellow et al., 1984). Для дополнительной гарантии полного блокирования случайной инфекции стали добавлять в стерильные среды антибиотики, либо обрабатывать эмбрионы ферментами (трипсином) (E. Singh et al., 1982).
Наши микробиологические исследования показали, что даже многократная отмывка эмбрионов стерильной фосфатно-буферной средой не всегда дает положительный антимикробный эффект. Так, при многократном отмывании эмбрионов стерильными средами до пятой чашки из 25 исследованных нами проб, в 3-х наблюдали рост микрофлоры на питательных средах. Для обеспечения стерильности эмбрионов нами было испытано многократное отмывание их в стерильных буферных средах с добавлением антибиотика гентамицина (12 мкг/мл) в комплексе с ампициллином (100 Ед/мл). Установлено эффективное антимикробное действие этого комплекса антибиотиков (табл. 3). Хотя различия между контролем и опытом не достоверны, существует тенденция к снижению роста микроорганизмов в средах для отмывки эмбрионов, что позволяло получить стерильный пересадочный материал.
С целью определения времени действия антибиотиков на микрофлору использовали в эксперименте модель, которая состояла из среды Дюльбекко, антибактериальных средств и чистых культур микроорганизмов. В качестве антибактериальных средств использовали комбинации антибиотиков в ранее испытанных концентрациях: гентамицин (12 мкг/мл) с ампициллином (100 Ед/мл); пенициллин (100 Ед/мл) со стрептомицином (50 Ед/мл). Действие антибиотиков испытывали на ассоциации чистых культур микроорганизмов, ранее выделенных из половых путей доноров и реципиентов влютеальную фазу полового цикла: Е. coli, Ps. aeruginosa, Вас.subtilis, Staph. aureus). После моделирования через каждые 15 минут производили высевы на питательные среды.
Таблица 3. Сравнительная оценка многократного отмывания эмбрионов средами с добавлением антибиотиков и без них
| Среды для отмывки эмбрионов | Всего исследовано сред | Рост микрофлоры на питательных средах (МПБ, МПА) | |
| Количество | % | ||
| Гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) (опыт) | 25 | 0 | 0 |
| Без антибиотиков (контроль) | 25 | 3 | 12±6,49 |
Опытная модель подвергалась воздействию комплекса антибиотиков гентамицин+ампициллин, контролем служили пробы с антибиотиками пенициллин+стрептомицин и без добавления антибиотиков.
Микробиологические исследования показали, что 15 минутное воздействие комплекса антибиотиков гентамицин+ампициллин убивает ассоциации вышеуказанных микроорганизмов (табл. 4).
Таблица 4. Влияние антибиотиков на микрофлору в промывных буферных средах
| Антибиотики, добавленные в среду Дюльбекко | Экспозици (мин.) | Рост микрофлоры на питательных средах | ||
| МПБ | МПА | МПА в чашках (кол-во колоний) | ||
| Гентамицин + ампициллин Пенициллин + стрептомицин Без антибиотиков | 15 | - + + | - - + | 0 5 20 |
| Гентамицин + ампициллин Пенициллин + стрептомицин Без антибиотиков | 30 | - - + | - - + | 0 0 47 |
| Гентамицин + ампициллин Пенициллин + стрептомицин Без антибиотиков | 60 | - - + | - - + | 0 0 59 |
| Гентамицин + ампициллин Пенициллин + стрептомицин Без антибиотиков | 90 | - - + | - - + | 0 0 100 |
Примечание: Вышеуказанные антибиотики в концентрациях: гентамицин 12 мкг/мл + ампициллин 100 Ед/мл, пенициллин 100 Ед/мл + стрептомицин 50 Ед/мл. (+) – рост микроорганизмов, (–) – отсутствие роста микроорганизмов
Таблица 5. Влияние антибиотиков на развитие эмбрионов
| № п/п | Среда для культивирования эмбрионов | Стадия развития | Всего эмбрионов, шт. | Стадия развития эмбрионов через 24 часа | Количество развившихся эмбрионов | |||||||||
| МП | БР | БП | БР | % | БП | % | БЭ | % | Шт. | % | ||||
| 1 | Без антибиотиков (контроль) | 7 | 5 | 7 | 19 | 5 | 71,4 | 5 | 100 | 5 | 71,4 | 15 | 78,95 | |
| 2 | С комплексом антибиотиков: Гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 10 ЕД/мл) | 9 | 5 | 7 | 21 | 5 | 55,5 | 5 | 100 | 5 | 71,4 | 15 | 71,43 | |
| 3 | С комплексом антибиотиков: Пенициллин + стрептомицин (100 и 50 ЕД/мл) | 6 | 5 | 4 | 15 | 3 | 50 | 2 | 40 | 3 | 75 | 8 | 53,33 | |
Существенным качественным параметром развития эмбриона в культуре является образование бластоцеля. В опыте, где была использована среда с добавлением комплекса антибиотиков гентамицин + ампициллин в концентрациях 12 мкг/мл и 100 Ед/мл, в контроле – среда с антибиотиками пенициллин+стептомицин (100 и 50 Ед/мл), во втором контроле – среда без добавления антибиотиков: 5 из 7 (71,4%), 5 из 9 (55,5%) и 3 из 6 (50%) эмбрионов развились из стадии морулы поздней (МП) в бластоцисту раннюю (БР); 5 из 5 (100%), 5 из 5 (100%), 2 из 5 (40%) эмбрионов развились из стадии бластоцисты ранней (БР) в бластоцисту позднюю (БП); 5 из 7 (71,4%), 5 из 7 (71,4%) и 3 из 4 (75%) эмбрионов развились из стадии бластоцисты поздней (БП) в стадию бластоцисты экспандированной (БЭ), соответственно (табл. 5).
Полученные данные свидетельствуют о том, что контакт эмбрионов в течение 2-х часов в среде с комплексом антибиотиков гентамицин + ампициллин в концентрациях 12 мг/мл и 100 Ед/мл, соответственно, не оказывает на их дальнейшее развитие более существенного влияния, чем комплекс антибиотиков пенициллин + стрептомицин в общепринятых концентрациях (100 и 50 Ед/мл). Учитывая большую бактерицидную активность предложенного комплекса антибиотиков по сравнению с комплексом пенициллин + стрептомицин можно считать целесообразным его использование для санации промывных буферных сред и эмбрионов в практике эмбриотрансплантации.
С целью определения влияния комплекса антибиотиков гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) на приживляемость эмбрионов проведены опыты по пересадке их реципиентам. При подготовке эмбрионов к пересадке мы проводили последовательное отмывание их в пяти чашках буферными средами, содержащими вышеуказанный комплекс антибиотиков. Контролем служили эмбрионы, отмытые средами, не содержащими антибиотиков.
Отмытые опытные и контрольные эмбрионы пересаживали телкам-реципиентам. Стельность определяли по результатам ректальных исследований.
Данные по влиянию антибиотиков на приживляемость эмбрионов приведены в таблице 6.
Таблица 6. Влияние антибиотиков на приживляемость эмбрионов
| Среды для отмывки эмбрионов | Всего исследовано реципиентов | Из них стельные | |
| Количество | % | ||
| Гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) (опыт) | 28 | 21 | 75 |
| Без антибиотиков (контроль) | 32 | 16 | 50 |
Данные таблицы 6 свидетельствуют о том, что из 28 реципиентов, которым были пересажены эмбрионы, отмытые в средах с комплексом антибиотиков гентамицин+ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл), стельными стали 21 голова, что составило 75%, в контроле из 32 реципиентов только 16 голов оказались стельными или 50%.
Таким образом, комплекс антибиотиков гентамицин+ампициллин не только дает хороший антимикробный эффект, но и повышает приживляемость эмбрионов за счет того, что в матку реципиента вместе с пересадочным материалом (эмбрионами) вводилось небольшое количество среды с антибиотиками, которые создавали асептические условия в конкретном участке матки. Поэтому мы рекомендуем всем пунктам трансплантации добавлять указанный комплекс антибиотиков в среды для отмывки эмбрионов.
4.5.2 Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий
Экономический ущерб от снижения молочной продуктивности:
У2к =7*13,1*60*0,73=1049,38 грн.
У2оп.=16*13,1*60*0,73=9180,48
Экономический ущерб от недополучения приплода:
У5= Кр (Рв – Рф) * Сп, где
Кр – коэффициент рождаемости
Рв – планировалось отелится
Рф – фактический отел
Сп – стоимость теленка при рождении
У5к = 0,5*(28–21)*263,53=922,3 грн.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
