Диссертация (1174189), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Количество P0+- (красный) и Krox24+- (зелѐный)клеток увеличивается в восстановленной группе при сравнении с полѐтнойгруппой. Ядра визуализированы с DAPI (синий). Масштаб 100 мкм.Таким образом, в условиях моделирования гипогравитации на Земле икосмического полѐта в поясничном утолщении спинного мозга мышейобнаруженыизменениямиелинобразующихклеток.иммуногистохимическихНаиболеехарактеристиквыраженныеизменениязафиксированы в белом веществе. Отсутствие значительных сдвигов вколичестве P0+/Krox24+-клеток в паре сравнения восстановленной иконтрольнойвосстановленнойгруппдаѐтоснованиеполагать,чтовыявленные сдвиги не являются необратимыми и имеют тенденцию квосстановлению в период 7-суточной реадаптации на Земле послекосмического полѐта.61А)Б)Рис.
15. Количество P0+- (А) и Krox24+- (Б) клеток в поясничном отделеспинного мозга у мышей в условиях опорной разгрузки задних конечностей(ОРЗК) и космического полѐта на 30 сутки и 7-суточной реадаптации наЗемле в зонах подсчѐта.62МикроглияIba1-иммунопозитивные клетки. Маркер Iba1 обнаруживает покоящиеся иреактивные клетки микроглии. В паре сравнения полѐтной и контрольнойполѐтной групп зафиксирована достоверная разница во всех зонах подсчѐта.Количество Iba1+-клеток у животных полѐтной группы увеличивается всреднем в 2,5 раза как в сером, так и в белом веществе. В восстановленнойгруппе достоверное увеличение количества Iba1 +-клеток зарегистрированотолько в DREZ. В этой группе во всех зонах сохраняется тенденцияувеличения количества клеток, экспрессирующих белок Iba1, но онавыражена в меньшеймере, чем у полѐтных мышей, чтоможетсвидетельствовать о восстановлении этого показателя.У интактных мышей Iba1+-микроглия однородно распределена вкаждой исследуемой зоне спинного мозга (рис.
16А). У мышей с ОРЗКколичество Iba1+-клеток достоверно увеличивается в зоне СС и DREZ(рис. 16В). Изменения количества имммунопозитивных клеток в группесравнения ОРЗК и интактные мыши соответствуют выраженности инаправленности сдвигов, зарегистрированных в группе полѐтных животных.Микроглия выделяет протеазы и цитокины, которые могут повреждатьнейральные клетки и вызывать демиелинизацию аксонов. Активациямикроглииявляетсяоднимизведущихмеханизмоввпатогенезенейродегенеративных заболеваний [Roser et al., 2017] и нейротравмы [Anwaret al., 2016].
Представляется достаточно вероятным, что подобные реакции состороны микроглии могут быть причиной негативных изменении морфофункциональногосостояниямотонейроновпригипогравитационномдвигательного синдрома.HoxB8-иммунопозитивные клетки. На 30-е сутки после ОРЗК у мышейHoxB8+-клетки, кроме зоны CC, обнаружены также в зонах CST, DREZ и VH.Наибольшее количество HoxB8+-клеток при ОРЗК выявлено в DREZ(рис. 16Б). У мышей оданной группы в зоне CC количество HoxB8+-клетоксущественно превышает этот показатель у интактных мышей (рис. 16Г). Эти63данные подтверждают представление о гетерогенности микроглии в спинноммозге и указывают на высокую реактивность клеток субпопуляции HoxB8.Б)А)Г)В)Рис. 16.
Экспрессия белков Iba1 и HoxB8 (красный) на 30 суткиэксперимента в зоне вхождения дорсальных корешков (DREZ) ицентрального канала (CC). Ядра визуализированы с DAPI (синий). Масштаб100 мкм (А, Б). Количество Iba1+- и HoxB8+-клеток значительно возрастает вгруппе опорной разгрузки задних конечностей (ОРЗК) (В, Г).644.2. Шейный отдел спинного мозгаАстроцитыНа30суткивполѐтнойгруппеколичествоGFAP+-клетокувеличивается только в DREZ в 1,8 раза при сравнении с контрольнойполѐтной группой.
Достоверные различия между восстановленной иконтрольной восстановленной группами по экспрессии GFAP не выявлены. Вэтой же зоне в группе животных с ОРЗК показано увеличение количестваGFAP+-клеток.При ОРЗК снижение количества S100B+-клеток обнаружено в VH иVF, в полѐтной группе – только в VH. В группе с 7-дневным периодомреадаптации на Земле S100B+-клетки распределены равномерно по всемисследуемым зонам, достоверные различия по этому показателю ввосстановленной группе при сравнении с контрольной восстановленнойгруппой не выявлены.ЧисленностьGFAP+/S100B+-астроцитовнеизменяетсяниприкосмическом полѐте, ни под воздействием ОРЗК.
Таким образом, оценкаэкспрессии GFAP и S100B показала, что влияние космического полѐта напопуляцию астроцитов в шейном утолщении спинного мозга мышиминимально. Выявленные сдвиги в количестве GFAP+- и S100B+-клеток вшейном утолщении спинного мозга мыши при ОРЗК могут быть связаны сизменением характера сократительной функции мышц. Представляетсядостаточно вероятным, что в условиях, моделирующих гипогравитацию наЗемле, т.е. при разгрузке задних конечностей, происходит повышение тонусамышц передней части тела животного, которое может быть причинойизменений в системе «нейрон – глия» в шейном утолщении спинного мозга.Миелинобразующие клеткиВ шейном утолщении спинного мозга в полѐтной группе P0 +-клеткиравномерно распределены по зонам подсчѐта, количество P0+-клетокснижается в DREZ при сравнении с контрольной полѐтной группой.
ПриОРЗК количество P0+-клеток снижается в DREZ и CC в 1,2 и 1,6 раза,65соответственно,вдругихзонахдостоверныхсдвиговнеобнаружено (рис. 17). Достоверные различия между восстановленной иконтрольной восстановленной группами не зарегистрированы.Количество Krox24+-клеток снижается в DREZ при ОРЗК и вполѐтной группе при сравнении данного показателя с соответствующимиконтрольными группами. В группе с 7-дневным периодом реадаптации наЗемле Krox24+-клетки распределены неравномерно по зонам подсчѐта.
Вбелом веществе мышей восстановленной и контрольной восстановленнойгрупп Krox24+-клетки не выявлены, достоверные различия между даннымигруппами не установлены. По количеству P0+/Krox24+-клеток в зонах серогои белого вещества не зарегистрированы достоверные сдвиги ни в одной изэкспериментальных групп.В шейном утолщении спинного мозга мышей в полѐтной группе вDREZ экспрессия Olig2 достоверно снижается. При ОРЗК Olig2+-клеткираспределены неравномерно, их наибольшее количество обнаружено вDREZ, также как и в полѐтной группе.
Это свидетельствует ободнонаправленных сдвигах в количестве Olig2+-клеток, происходящих вспинном мозге мышей при реальной гипогравитации и еѐ симуляции наЗемле. При сравнении восстановленной и полѐтной групп в большинствеисследуемых зон сдвиги в количестве Olig2+-клеток однонаправленны. Ввосстановленной группе, так же как и в других экспериментальных группах,выявлено увеличение количества Olig2+-клеток в DREZ.66Рис. 17.
Зона вхождения дорсальных корешков (DREZ) в шейном отделеспинного мозга у мышей в условиях космического полѐта и 7-суточнойреадаптации на Земле. Количество P0+- (красный) и Krox24+- (зелѐный)клеток увеличивается в восстановленной группе при сравнении с полѐтнойгруппой. Выявлена колокализация белков P0 и Krox24; P0+/Krox24+-клеткиотмечены стрелкой. Ядра визуализированы с DAPI (синий). Масштаб100 мкм.На 30 сутки в полѐтной группе показатель флуоресцентной плотностиOSP меньше по сравнению с контрольной полѐтной группой. При ОРЗКвыявлено снижение флуоресцентной плотности OSP в DREZ и СС.
При этомв полѐтной группе данный показатель ниже, чем в группе ОРЗК. Достоверноеразличие между полѐтной и ОРЗК группами по экспрессии OSP выявлено вVH. Между восстановленной и контрольной восстановленной группами поэтому показателю достоверных различий не обнаружено.Сдвиги в экспрессии белков миелина в шейном утолщении при ОРЗКсвидетельствуют об изменении характера двигательной активности мыши,67которое является вероятной причиной морфофункциональных изменений вмиелинобразующих клетах.Белок щелевого контакта Cx47 экспрессируется преимущественно волигодендроцитах в сером веществе и в S100B+-астроцитах в белом веществе[Odermatt et al., 2003].
В исследовании Menichella et al. [2003] на трансгенныхмышах, мутантных по гену cx47 (Cx47-null), показано, что продукт данногогена не влияет на миелинизацию в спинном мозге, но участвует вмежклеточном взаимодействии между олигодендроцитами и астроцитами.ВполѐтнойиконтрольнойполѐтнойгруппахCx47+-клеткиравномерно распределены по всем изученным зонам, наибольшее ихколичество обнаружено в условиях космического полѐта.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
