Автореферат (1173331), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Наука. Практика»; XXXIXитоговой научной конференции Общества молодых ученых (МГМСУ, 2017);совместном заседании сотрудников кафедры ортопедической стоматологии игнатологии, пропедевтической стоматологии и кариесологии и эндодонтии ФГБОУВО МГМСУ им. А. И. Евдокимова Министерства здравоохранения РФ.7Внедрение результатов исследованияРезультаты работы внедрены в учебный процесс кафедры ортопедическойстоматологии и гнатологии для студентов стоматологического факультета ФГБОУВО МГМСУ им.
А. И. Евдокимова, интернов и ординаторов, а также в деятельностьЦентра коллективного пользования «Регенеративная медицина» Первого МГМУ им.И. М. Сеченова Минздрава России.ПубликацииОсновные положения диссертации изложены в 9 печатных работах, которыевключают 5 статей в журналах из перечня ВАК Минобрнауки РФ и 2 патента РФ наизобретения: «Композиционный материал для замещения костных дефектовчелюстей» (положительное решение № 2 685 148 и «Способ замещения костныхдефектов челюстей» (№ 2 692 452 .).Структура и объем диссертацииДиссертация состоит из введения, четырех глав, выводов, практическихрекомендаций, списка использованной литературы.
Работа изложена на 126страницах компьютерного текста, иллюстрирована 92 рисунками, содержит 5 таблиц.Список литературы включает 126 источников, в том числе 17 отечественных и 115зарубежных.СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериалы и методы проводимого исследованияДляреализациипоставленнойцелибылипроведенылабораторные,экспериментальные и рентгенологические исследования.Лабораторные исследованияЗадачами лабораторной части работы явилось создание методики забора идальнейшегокультивированияаутологичныхклетокдляразработкиметоданаправленной тканевой регенерации костной ткани с использованием аутологичныхклеток.Для получения культуры МСК у кролика под инфильтрационной анестезиейхирургическим скальпелем осуществляли забор поверхностного слоя слизистойоболочки прикрепленной десны.
Полученный фрагмент помещали в 0,05% растворколлагеназы 2-го типа на 16 часов в термостат при температуре +37°Сс дальнейшимпроведением пипетирования осадка и добавления полной питательной среды,8состоящей из DMEM/F12 (Invitrogen, США), содержащей 10% телячью фетальнуюсыворотку («HyCloneDefined», HyClone, США), инсулин 0,4 мкМ, 0,25 мг/лгентамицина.Культивирование МСК осуществляли в стандартных условиях в СО2-инкубаторес концентрацией СО2 5%, атмосферного воздуха 95% и с повышенной влажностью.Стандартизованную дифференцировку МСК костного мозга осуществляли всоответствииспротоколамиSTEMPRO®MSCSFM;StemPro®AdipogenesisDifferentiation Kit; StemPro®Chondrogenesis Differentiation Kit; StemPro®OsteogenesisDifferentiationKit.Иммунофенотипирование осуществляли на проточном цитофлуориметре Gallios(БекманКультер,США).АнализпроводилиприпомощиПОAN43172SoftwareVersion.Вторым этапом лабораторного исследования явилась разработка оптимальнойметодики проверки и, в случае необходимости, снижение пирогенности ицитотоксичности остеопластического материала для успешного имбибированияаутологичными клетками.Для оценки пролиферативного потенциала были выбраны остеопластическиематериалы отечественного производства «Коллапан», «ЛиоПласт», зарубежногопроизводства «Bio-Oss», «Easy-Graft».
Данные материалы были выбраны, посколькуони часто применяются и относятся к разным группам остеопластическихматериалов. В качестве контроля был использован «Цитодекс»– микроноситель длякультур клеток.В качестве клеточной культуры использованы клетки, рекомендованные ГОСТ иISO для скрининговых исследований – линейные фибробласты3Т3/NIH.Перед проведением исследования была проведена стандартизация образцов поразмерам.Экспериментальное исследованиеЗадачей экспериментальной части работы явилась сравнительная характеристиканаправленной регенерации костной ткани нижней челюсти кролика после нанесениякостных дефектов и заживления костных ран в условиях естественного теченияпроцесса.В сформированные костные полости на нижней челюсти слева после операциизаполняли МСК вместе с костным материалом Bio-Oss, накладывали резорбируемуюмембрану Bio-Gide.
Дефект, сформированный с правой стороны, заполняли костным9материаломBio-Oss,перемешаннымскровянымсгустком,накладывалирезорбируемую мембрану Bio-Gide. После заполнения костных полостей указаннымиимплантатами мягкие ткани над ними послойно ушивали наглухо. На надкостницу,мышцы и фасции накладывали погружные швы кетгутом, края раны сшивалиузловыми швами из шелка.Животных выводили из эксперимента на 30, 90 и 180 сутки по 4 животных накаждый срок в каждой группе путем внутрибрюшинного введения калипсола в дозе750 мг/кг и листенона в дозе 200 мг/кг массы экспериментального животного.Далеепроводилосьморфологическогоскелетированиеисследования.Былачелюстейизученакостнаядляпоследующеготканьвобластиискусственного дефекта тела нижней челюсти у 12 кроликов. В опытной группе вискусственносозданныйкостныйдефектимплантироваласьразработаннаякомпозиция Bio-Oss с аутологичной МСК из слизистой оболочки полости рта. Вконтрольной группе вводился толькоBio-Oss.Костную ткань в области дефекта выпиливали и фиксировали в 10% формалине,декальцинировали, заливали в парафин.
Срезы толщиной 4–5мкм окрашивалигематоксилином и эозином, по Ван-Гизону и просматривали на универсальноммикроскопе Leica DM400 B при стандартной световой микроскопии, фазовоконтрастной микроскопии и микроскопии темного поля.Клиническое исследованиеИзучение клинической эффективности биокомпозиции с аутологичными МСКдесныдля лечения пациентов с послеоперационными дефектами челюстей проводилось вКлиническом центре стоматологии ФГБОУ ВО «Московский Государственный МедикоСтоматологический Университет им.
А.И. Евдокимова» Минздрава России.Характеристика групп исследуемых пациентовЗа период с 2014 по 2017 гг. было проведено обследование 148 пациентов ввозрасте от 22 до 50 лет с патологией, требующей хирургического вмешательства собразованием в процессе лечения костных дефектов челюстей. Из них 53 человекадали информированное согласие на участие в исследовании.На основании критериев включения, не включения и исключения из исследованиябыли сформированы следующие клинические группы:10Группаисследования:12вмешательствачеловек,интраоперационныйкоторымвпроцесседефектвосполнялихирургическогоразработаннойбиокомпозицией с аутологичными МСК десны.В контрольную группу вошли 12 человек, которым в процессе хирургическоговмешательстваинтраоперационныйдефектвосполнялиостеозамещающимпрепаратом.Распределение больных по возрастному и гендерному признаку представлено втаблице 1.Таблица 1 – Характеристика пациентов по гендерному и возрастному признакуГендерные24–30 лет31–35 лет36–40 лет41–44 летМужчины3721Женщины2432признакиМетод лазерной допплеровской флоуметрииОбъективнуюоценкуэффективностииспользованияразработаннойбиокомпозиции с аутологичными МСК десны в формировании костной тканиинтраоперационного дефекта проводили, изучая микроциркуляцию в указанномучастке с помощью лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) с помощьюлазерного анализатора капиллярного кровотока «ЛАКК-01» (производство НПП«Лазма»).
В основе метода ЛДФ лежит использование излучения гелий-неоновоголазера (λ = 632,8нм) малой мощности, которое хорошо проникает в поверхностныеслои тканей. При отражении излучения от движущихся эритроцитов в микрососудахизменяется частота сигнала.Регистрация ЛДФ-граммы проводилась в проекции интраоперационных костныхдефектовчелюстей.Состояниемикроциркуляцииоценивалипопоказателюмикроциркуляции (М), который складывается из средней скорости движенияэритроцитов(Vэр),показателякапиллярногогематокрита(Ht)ичислафункционирующих капилляров (Nк):ПМ = Vэр×Ht×Nк (перф.
ед.).Такжеопределяликвадратическоехарактеристикуотклонение–потокастатистическиэритроцитовзначимыеσ–среднееколебанияскоростиэритроцитов. Величина σ существенна для оценки состояния микроциркуляции исохранности механизмов ее регуляции. Соотношение между перфузией ткани и11величиной ее изменчивости (флаксом) оценивалось коэффициентом вариации –Kv(%), характеризующим вазомоторную активность микрососудов:Kv= σ/М×100(%), где М – показатель микроциркуляции.Исследования проводили аналогично в сроки 1, 3, 6 месяцев в соответствии срезультатами, полученными в экспериментальных и лабораторных исследованиях.Рентгенологическое исследованиеДля подтверждения эффективности разработанной нами методики остеогенезаинтраоперационного дефекта с использованием остеозамещающего материала,насыщенного аутологичными клетками, была проведена прижизненная компьютернаятомография кроликов с использованием аппарата Asteion 4 через 1, 3 и 6 месяцевпослеоперационного периода.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
