Автореферат (1154514), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Высокая степеньдостоверности результатов проведенных исследований подтверждаетсяиспользованием как общепринятых, так и современных микробиологических игенетических методов исследований и статистической обработки информации.Исследования проведены с использованием аттестованных методик иповеренного оборудования.Результаты диссертационного исследования представлены на следующихнаучных конференциях: II Международная научно-практическая конференция«Основные проблемы естественных и математических наук» (Волгоград, 2015г.), VII Международная научная конференция молодых ученых «Представляемнаучные достижения миру. Естественные науки» (Саратов, 2016 г.), VIIIРегиональная научная конференция «Исследования молодых ученых в биологиии экологии» (Саратов, 2016 г.), Международная научно-практическаяконференция «Материалы и методы инновационных исследований иразработок» (Пенза, 2016 г.), Всероссийская научно-практическая конференцияпо медицинской микробиологии и клинической микологии «ХIХ Кашкинскиечтения» (Санкт-Петербург, 2016).Структура и объем диссертации.
Диссертация состоит из введения,обзора литературы, описания объектов, материалов и методов, трех главэкспериментальных исследований, заключения и выводов, а также спискаиспользованной литературы, который включает 350 источников, в том числе337 иностранных авторов.Объекты и методы исследованияОбъектом исследования явились эталонные и клинические штаммыграмотрицательных бактерий (табл. 1).Таблица 1 – Объекты исследованияШтаммыКоличествоГод выделенияEscherichia coli ATCC 259221Escherichia coli1112014Klebsiella oxytoca202014Klebsiella pneumoniae82015Enterobacter cloacae82015Enterobacter aerogenes152014Proteus vulgaris102014Proteus mirabilis102015Pseudomonas aeruginosa122015Morganella morganii32014Acinetobacter baumannii32015Итого2002014 – 2015 гг.Клиническиештаммыусловно-патогенныхмикроорганизмовбыли выделены из образцов мочи 325 пациентов с признаками ИМП,находящихся на амбулаторном лечении в Багдадском учебном госпитале.6Идентификация выделенных штаммов бактерий осуществлялась сиспользованием мультитестсистемы API 20E (BioMérieux SA, Франция) дляопределения биохимических свойств бактерий семейства Enterobacteriaceae.Определение спектра чувствительности исследуемых штаммов условнопатогенных бактерий к антимикробным препаратам проводили сиспользованием диско-диффузного метода (МУК 4.2.1890-04).Перечень дисков, содержащих антибиотики и химиотерапевтическиепрепараты, представлен в таблице 2.№123456789101112131415Таблица 2 – Перечень использованных антимикробных препаратовАнтибиотикКодКонцентрация, мкг/диск(Mast Diagnostics, Великобритания)АмикацинAK30АмпициллинAMP10АмоксиклавAMC30ЦефотаксимCTX30ЦефокситинFX30ЦефтазидимCAZ30ЦефтриаксонCRO30ЦипрофлоксацинCIP5ГентамицинGM10ИмипенемIPM≤ 19Налидиксовая кислотаNA≤ 13НитрофурантионF≤ 14ПиперациллинPIP≤ 17ТобрамицинTOB≤ 12Сульфаметоксазол-триметопримSXT≤ 10Для определения БЛРС применяли метод «двойных дисков» (МУК4.2.1890-04), который предполагает использование доступных коммерческихдисков с цефалоспоринами III поколения и с амоксиклавом.В исследованиях по обнаружению генов ctx-m, aac(3)-II и fimHиспользовали полимеразную цепную реакцию (ПЦР) (Garrec et al., 2011; Yazdiet al., 2012; Hamed et al., 2013; Jafari et al., 2013; Abass et al., 2014; Hojati et al.,2015; Saad et al., 2015; Ho et al., 2016).Олигонуклеотидные праймеры, используемые для обнаруженияприсутствия генов ctx-m, aac(3)-II и fimH, были предоставлены компаниейIntegrated DNA Technologies (Бельгия) и Bioneer Company (Корея).Реакцию осуществляли в соответствии с работой (Nasehi et al., 2010) втермоциклере для ПЦР.
Реакция включала в себя следующие шаги,приведенные в таблице 3.Адгезивную способность эталонного и клинических штаммов E. coliопределяли с использованием методов В.И. Брилис и соавт. (1986) иС.С. Гизатулиной и соавт. (1991).7Таблица 3 – Этапы амплификации ПЦР для определения генетическихмаркеров уропатогенных кишечных палочекСтадияШагТемпература, °C Время Число цикловПерваяНачало денатурации955 мин1IДенатурация9460 сСпецифическое5530 сВторая IIренатурирование30IIIУдлинение цепи7260 сОкончаниеТретья725 мин1удлиненияПроцесс формирования микробных биопленок моделировали в условиях invitro в лунках иммунологических планшетов согласно стандартной методике(Тец В.В., 2006).Электронно-микроскопическое исследование микробных биопленок наповерхности фрагментов полиуретанового уретрального катетера проводили сиспользованием растрового электронного микроскопа Aspex Explorer.Статистическая обработка результатов осуществлялась с применениемпакета прикладных программ Statistica 6.0 (for Windows; «Stat Soft Inc.», США),Statgraph (Version 2.6; Cоulter), Microsoft Еxcel 2003 (for Windows XP).Результаты исследованияВидовой состав микроорганизмов, выделяемых при инфекцияхмочевыводящих путейИнфекции мочевыводящих путей с высокой частотой встречаютсяповсеместно, в связи с этим представляло интерес оценить видовой составвозбудителей у пациентов Багдадского учебного госпиталя.
Было установлено,что при исследовании образцов мочи, полученных от 325 пациентов спризнаками ИМП, возбудители ИМП были выделены из 200 проб. Вбольшинстве случаев возбудителями ИМП являлись представители семействаEnterobacteriaceae: в 55,5% образцов были обнаружены бактерии E. coli (χ2 =675,3; p < 0,05). Klebsiella spp. выделялась из 14% образцов, Enterobacter spp. –из 11,5%, Proteus spp. – из 10% (табл. 4).Клинический материал был получен от пациентов разных возрастов. Былоустановлено, что наибольшая частота случаев ИМП регистрировалась у людейвозрастной группы 27–36 лет, на втором месте были пациенты в возрасте 37–46лет, на третьем месте – лица в возрасте 17–26 лет.
Наименьшая частота ИМПнаблюдалось у пожилых пациентов в возрасте от 57 до 76 лет (рис. 1).Определение частоты встречаемости ИМП среди пациентов позволилоустановить, что в большинстве случаев заболевания регистрировались уженщин (57,5% случаев) (см. рис. 1).8Таблица 4 – Видовой состав микроорганизмов, выделенных от больныхс признаками инфекций мочевыводящих путейКоличество штаммовВозбудителиабс.%Escherichia coli11155,5Klebsiella oxytoca2010Klebsiella pneumoniae84Enterobacter aerogenes157,5Enterobacter cloacae84Proteus mirabilis105Proteus vulgaris105Pseudomonas aeruginosa126Morganella morganii31,5Acinetobacter baumannii31,5Итого2001003% 2,5%13,5%16%42,5%16,5%57,5%21%27,5%6 - 16 лет37 - 46 лет67 - 76 лет17 - 26 лет47 - 56 лет27 - 36 лет57 - 66 летмужчиныженщиныАБРисунок 1 – Частота встречаемости инфекций мочевыводящих путей:А – в разных возрастных группах, Б – у мужчин и женщинТаким образом, анализ полученных данных показал, что частотавстречаемости ИМП зависела от пола и возраста пациентов, а этиологичесимфактором в большинстве случаев являлись представители семействаEnterobacteriaceae, ведущими среди которых были уропатогенные E.
coli.Характеристика спектра чувствительности возбудителей инфекциймочевыводящих путей к антимикробным препаратамОценку резистентности исследуемых микроорганизмов проводили кантимикробнымпрепаратамразличныхгрупп:бета-лактамам,аминогликозидам,хинолонам,фторхинолонам,нитрофуранам,сульфаниламидам в комплексе с диаминопиримидинами.Былоустановлено,чтовсевыделенныештаммыусловнопатогенных бактерий были чувствительны к имипенему и амикацину,9более 50% штаммов проявили чувствительность к нитрофурантоину итобрамицину (χ2 = 285,03, p < 0,05). Остальные антибиотики ихимиотерапевтические препараты характеризовались низкой активностью вотношении выделенных штаммов, а к гентамицину, амоксиклаву,сульфаметоксазол-триметоприму,пиперациллину,ампициллинуиналидиксовой кислоте большинство выделенных возбудителей ИМП былиустойчивы (табл. 5).Таблица 5 – Спектр чувствительности исследуемых штаммов условнопатогенных микроорганизмов к антимикробным препаратамA.
baumanniiM. morganiiP. aeruginosaP. mirabilisP. vulgarisE. cloacaeE. aerogenesK. oxytocaK. pneumoniaeE. coliАнтибиотикКоличество штаммовЧ У Ч У Ч У Ч У Ч У Ч У Ч У Ч У Ч У Ч УIPM 111 0 8 0 20 0 15 0 8 0 10 0 10 0 12 0 3 0 3 0AK 111 0 8 0 20 0 15 0 8 0 10 0 10 0 12 0 3 0 3 0F80 31 3 5 14 6 10 5 5 3 2 8 3 7 7 5 2 1 1 2CIP49 62 2 6 5 15 8 7 3 5 4 6 4 6 4 8 2 1 1 2TOB 71 40 6 2 9 11 9 6 5 3 6 4 6 4 4 8 2 1 1 2CAZ 50 61 2 6 8 12 6 9 5 3 3 7 4 6 4 8 2 1 1 2GM44 67 1 7 6 14 5 10 3 5 3 7 2 8 2 10 1 2 1 2CTX 45 66 3 5 8 12 6 9 3 5 4 6 4 6 3 9 2 1 1 2PIP35 76 2 6 4 16 7 8 2 6 3 7 4 6 5 7 1 2 1 2FX55 56 3 5 6 14 8 7 3 5 4 6 4 6 3 9 2 1 1 2NA36 75 2 6 3 17 3 12 2 6 2 8 3 7 2 10 1 2 0 3SXT 41 70 2 6 2 18 5 10 2 6 3 7 3 7 2 10 1 2 1 2AMC 61 50 5 3 11 9 7 8 3 5 4 6 4 6 4 8 1 2 1 2AMP 32 79 3 5 3 17 4 11 2 6 2 8 3 7 1 11 1 2 1 2CRO 61 50 6 2 13 7 9 6 5 3 6 4 6 4 5 7 2 1 2 1Всего1112823201233Выделенные штаммы Klebsiella spp. были устойчивы к 11 исследуемымантимикробным препаратам, Enterobacter spp.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
