Автореферат (1151600), страница 2
Текст из файла (страница 2)
В опытах №2 и 3, поставленных совместно с сотрудниками лаборатории здоровья гидробионтов,нами отобран патматериал для патоморфологических исследований. Подопытныхрыб в возрасте малька получали в благополучных по инфекционным болезнямхозяйствах: НПЦ Биос Астраханской области, ООО «Рыботоварная фирма «Диана» иосетрового рыбоводного хозяйства Электрогорской ГРЭС.Сеголетки для исследования при спонтанной герпесвирусной болезни былиполучены в хозяйстве, в котором была выявлена герпесвирусная инфекция осетровыхрыб.Клинические наблюденияКлиническому осмотру ежедневно подвергали всех подопытных рыб. При этомоценивали поведение рыб, сохранение или потерю рефлексов, угнетение ивозбудимость, нарушение равновесия и координации движения, по движениюжаберных крышек определяли частоту дыхательных движений, обращали вниманиена реакцию на свет и звук.
При осмотре рыб отмечали прижизненные изменения вкожном покрове, плавниках, количество слизи, пигментацию, наличие папиллом инекротических участков, язв, состояние жучек. Приподнимая жаберные крышки,осматривали жабры. Обращали внимание на их окраску, возможное наличиегеморрагий и очагов некроза.
Рыб с явными клиническими признаками отсаживалидля проведения патолого-морфологических исследований.Патоморфологические исследованияПатологоанатомическоевскрытиепогибшихивынужденноубитыхсеголетков осуществляли в лаборатории. При осмотре органов брюшной полости,обращали внимание на наличие и количество асцитной жидкости, её цвет,консистенцию. Далее оценивали состояние внутренних органов; форму, размер, цвет,консистенцию, наличие в них кровоизлияний, отёка.
Затем внутренние органыизвлекали и осторожно отделяли друг от друга. Исследовали: печень, почки,кишечник, сердце, селезёнку. Кишечник расправляли и делали продольный разрез,обращали внимание на наличие пищи, цвет, состояние слизистой, наличие8кровоизлияний, истончений, отёчности. При осмотре сердца обращали внимание насостояние лимфоидной железы (Гуртовой Н.Н., 1976).Для патолого-гистологических исследований отбирали кусочки печени, почек,селезёнки, средней кишки, сердца, мозга, жабр, кожи, плавников размером 0,5х 1,0см., фиксировали в 10% забуференном растворе формалина. Для гистологическихисследований готовили парафиновые, целлоидиновые и замороженные срезы.Гистологическую обработку материала проводили общепринятыми методами сприменением некоторых модификаций с учётом особенностей тканей рыб (МеркуловГ.А., 1961; Микодина Е.В., 2009).Для приготовления замороженных срезов материал заливали в желатинуобщепринятымиметодами(МеркуловГ.А.,1961).Пропитывалиобъектыгомогенизированным парафином-парапластом.
Заливку в парафин и изготовлениепарафиновых блоков осуществляли в станциях заливки Microm EC 350. Заливку вцеллоидин проводили общепринятым методом (Меркулов Г.А., 1961). Дляприготовления гистологических срезов использовали: ротационный микротом МПС –2; санный микротом МС – 2, ротационный микротом HM – 440; микротом – криостатМК – 25. Для окрашивания гистосрезов применяли гематоксилин и эозин пообщепринятойметодике(МикодинаЕ.В.,2009;МеркуловГ.А.,1961)сиспользованием гематоксилина Майера, Эрлиха и водного – спиртового раствораэозина, липиды выявляли суданом – III, суданом чёрным.В связи с недостатком научных данных по гистологическому строению рядаорганов осетровых оценку патоморфологических измененийинфекции проводилипри герпесвируснойпутем сравнения их с состоянием органов контрольных(здоровых) рыб.Вирусологические и бактериологические методы исследованийДля постановки экспериментов использовали герпесвирус сибирского осетра(SbSHV), штамм SK1/0406, и изолят SIz6/0311.Для вирусологических исследований отбирали кусочки органов: печени, почек,селезёнки, а также кожу, плавники, жабры и слизь.
Выделение вируса проводилисогласнообщепринятым методам (Методические рекомендации по диагностикегерпесвирусной болезни сибирского осетра, 2009; Методические указания по9диагностике вирусных болезней рыб, 1998). Титр вируса рассчитывали по методуРида и Менча (Белоусова Р.В., 2006).Электронно-микроскопические исследованияДля выявления вирусных частиц и изучения их морфологии применялиэлектронный микроскоп Jem 100C по общепринятым методикам (Миронов А.А.,1994).Статистические методыСтатистическую обработку данных проводили согласно общепринятымметодам (Лакин Г.Ф.,1990).Общее количество рыб, подвергнутых исследованиямКоличество рыб, подвергнутых клиническим, патологоморфологическим,вирусологическим,бактериологическимиэлектронно-микроскопическимисследованиям, представлено в таблице 1.Таблица 1.
Количество рыб, подвергнутых исследованиямВиды исследованийКоличество рыб (экз.)Общее количество рыб200Клинические200Патолого-анатомические127Гистологические63Электронно-микроскопические8Вирусологические67Бактериологические242.2 Результаты собственных исследованийЗаболевание воспроизведено во всех опытах, но тяжесть течения, динамикаразвития болезни и клинического проявления инфекции в разных экспериментахотличались.
Герпесвирус реизолировали из всех органов рыб, взятых дляисследований. При этом содержание вируса в органах во всех трёх биопробах былопримерно в одинаковых пределах: в пробах кожи и плавников – 6 – 8 lg ТЦД50/мгткани; в печени, почках, кишечнике и сердце – 6 – 7 lg ТЦД50/мг ткани; жабрах – 5 – 6lg ТЦД50/мг ткани; в мозге и селезёнке – 3 – 5 lg ТЦД50/мг ткани.10Опыт 1. Результаты исследований при заражении сеголетков гибридарусского и сибирского осетров штаммом SK1/0406Обобщённые данные по развитию болезни представлены в таблицах 2, 3.Таблица 2.
Развитие клинических признаков сеголетков гибрида русского исибирского осетров, заражённых штаммом SK1/0406.Количестводней смоментазаражения2122-2725-3232-42Клинические признаки и внешние измененияВялость, апатия, отказ от корма, учащённое дыханиеВертикальное положение, хаотичные движения, атрофия мышц,петехии, бляшкиРаспад ткани кончиков плавников, геморрагии,Выпадениепрямойкишки,адинамия,вторичнаяинфекция(сапролегниоз)Таблица 3. Кумулятивная гибель сеголетк ов гибрида русского и сибирскогоосетров, зараженных штаммом SK1/0406, (n=20)Количество дней смомента зараженияКумулятивнаягибель, экз/%21273201/53/15384/20425/25Результаты вирусологических исследований.
Исходный вирус выделен внаиболее высоких титрах из проб кожи, слизи, печени, почек, спиральной кишки (5.87,1 lg ТЦД50/см3,), и несколько ниже из жабр, селезёнки и сердца (5.1-5.6 lgТЦД50/см3,). У двух рыб вирус был выделен только из слизи. У рыб контрольнойкрупы вирус не выделенПри электронно – микроскопических исследованиях в ядрах и в цитоплазмеэпителиальных клеток кожи выявлены капсиды по размеру (диаметр около 100 нм.) иморфологии соответствующие герпесвирусу (рис.
2).Рис.2. а,б – Эпителиальная клетка эпидермиса кожи, инфицированная SbSHV.Стрелками обозначены капсиды вируса.11Клинические признаки и патологоанатомические изменения. У больныхрыб наблюдали отказ от корма, истощение, атрофию мышц спины. На жучкаххвостового стебля появлялись точечные кровоизлияния и язвы (рис. 3,б), нахвостовом плавнике выявляли бляшки (рис. 3, а), на спинках и боках признакизастойной гиперемии (рис. 3, в). На дистальных концах хвостового, анального ибрюшного плавников были заметны признаки некроза. При аутопсии в брюшнойполости отмечали незначительное скопление прозрачного экссудата, точечныекровоизлияния на брюшине, переполненный желчный пузырь, селезёнка неувеличена, светло-розового цвета.
Желудок и двенадцатиперстная кишка безпищевых масс и видимых изменений, спиральный отдел средней кишки с признакамикатарального воспаления, выражавшегося покраснением слизистой оболочки ископлением студенистого экссудата. Печень и почки бледные, печень рыхлойконсистенции. Лимфоидная железа сердца увеличена, беловатого цвета. У отдельныхрыб выявляли признаки застойной гиперемии, в виде повышенной инъекции сосудов,изъязвление жучек, в спиральной кишке отмечено скопление слизеподобногосодержимого с примесью крови, покраснение и выпадение прямой кишки, печеньбледная рыхлой консистенции, селезёнка с бледными пятнами, в сердце увеличеналимфоидная железа (рис. 3.
г).абвгРис. 3. Макрокартина кожи и сердца больных рыб: а – бляшки на хвостовомплавнике, ув. х 5; б – жучка с изъязвлённой вершиной, ув. х 8; в – инъекция сосудовкожи на спинке, ув. х3; г – увеличенная лимфоидная железа сердцаПатогистологические изменения. Наиболее тяжёлые микроструктурныеизменения выявляли в кожном покрове разных участков тела и плавников, в печени,почках, спиральной кишке. В жабрах, селезёнке и сердце патогистологическиеизменения были менее выражены.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
