Автореферат диссертации (1151576), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Огарева, Уральской, Казанской,Санкт-ПетербургскойГАВМ,Алтайского,Воронежского,Омского,Ставропольского, Тюменского, Хакасского ГАУ и Дальневосточного зональногонаучно-исследовательского ветеринарного института Россельхозакадемии в формевыпуска карт обратной связи.В процессе исследования разработан: «Способ коррекции тиреоидногостатуса племенных крольчих-первокролок в эндемичных зонах путемкомбинированного применения йода и селена» (приоритетная справка Патентноговедомства № 2013153993/10 (084297) от 04.12.2013 г.).Связь исследований с научной программой. Диссертация выполнена врамках научно-исследовательской работы в соответствии с планом НИР кафедрыморфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургскийгосударственный аграрный университет».
Регистрационный номер темы:01201161504.Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены настуденческойнаучно-практическойконференции«Экспериментальногистологический метод – как основа доказательной медицины» (Оренбург, 2010),студенческой научно-практической конференции «Инновации студентов в областиветеринарной медицины» (Троицк, 2010), XV Международной научнопрактической конференции «Актуальные проблемы интенсивного развитияживотноводства» (Беларусь, Горки, 2012), всероссийском конкурсе научноисследовательских работ студентов и аспирантов в области биологических наук(Ульяновск, 2012), научно-практической конференции «Молодые ученые – наукеXXI века» (Оренбург, 2012), международной научно-практической конференции:«Современные технологии в ветеринарии и зоотехнии.
Творческое наследие В.К.6Бириха (к 110- летию со дня рождения)» (Пермь, 2013), IV International research andpractice conference «Science and Education» (Munich, Germany 2013).Результаты исследования послужили основой для создания научного проекта«Коррекция тиреоидного гомеостаза племенных крольчих разными формамиселена в условиях дефицита микронутриентов», удостоенный диплома лауреата IIго регионального молодежного инновационного конвента в номинации лучшийинновационный проект, а так же диплома лауреата премии «ГубернатораОренбургской области для талантливой молодежи за 2012 год».Публикации результатов исследований.
По материалам собственныхнаучных исследований опубликовано тринадцать печатных работ, из них шесть – визданиях, рекомендованных ВАК РФ.Личный вклад соискателя. Представленная работа является результатомисследований автора в период с 2010 по 2014 годы.Экспериментальную часть, работу по систематизации и анализу полученныхрезультатов автор провел лично. Один научный труд опубликован в соавторствек.б.н., Анипко В.В. Представленная в диссертационный совет справкаподтверждает, что в диссертации его данные не использованы.2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ2.1. Материал и методы исследованияРабота выполнена в период с 2010 по 2014 годы на базе кролиководческихкрестьянско-фермерских хозяйств Оренбургской области КФХ «Раздолье»Тюльганского района и КФХ «Зобнин» Кваркенского района, а также в условияхкафедры морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургскийгосударственный аграрный университет».Материал получали в КФХ «Раздолье» при убое самок кроликов схозяйственной целью (акты прилагаются).
Непосредственно перед убоемживотных оценивали их клиническое состояние (t°С, ЧСС, ЧДД). Из краевойушной вены проводили забор проб крови для гематологического ибиохимического исследований, а так же для определения сывороточнойконцентрации селена, тиреоидных и тиреотропного гормонов (оТ 3, оТ4, ТТГ).Гистологические пробы брали поствитально, не позднее одного часа послеубоя. Эксперимент проводился в соответствии с протоколами «Европейскойконвенцииозащитепозвоночныхживотных,используемыхдляэкспериментальных и других научных целей» с требованиями нормативныхправовых актов, регламентирующих выполнение исследований по безопасности иэффективности фармакологических веществ в РФ (Приказ МЗ РФ «Обутверждении правил лабораторной практики» №267 от 19.06.2003 г.) изаконодательством Российской Федерации (Национальный стандарт ГОСТ Р53434-2009).7Объектом исследований служили щитовидные железы клинически здоровыхкрольчих породы советская шиншилла в возрасте шести месяцев и при разныхфункциональных состояниях организма (интактность, сукрольность, роды илактация).
Материал в каждой группе брали не менее чем от 3-х голов. Всего вопыте использовано 60 голов (табл. 1).Таблица 1. Характеристика животных использованных в эксперименте (n - голов)«Е-селен»«Селенолин»Возраст(мес.)ФизиологическоесостояниеКонтрольЕ-селенЕ-селен +МонклавитСеленолинСеленолин +Монклавит66,577,5ИТОГО:ЭструсБеременностьРодыЛактация3333444444-444444-Колвогол.1919121260КФХ «Раздолье» и КФХ «Зобнин» находятся в благополучных поинфекционным и инвазионным заболеваниям зонах. В течение всегоэкспериментального периода животные содержались в одинаковых условиях,обслуживались одним и тем же персоналом.
Кормление животных осуществлялипо нормам ВИЖ.При формировании групп аналогов животных отбирали по возрасту,телосложению, массе, упитанности, клиническому и физиологическому состоянию.Возраст крольчих определяли по данным регистрационных записей журналов учетазооветеринарной службы хозяйства.Для проведения экспериментальной части исследования по изучениювлияния препаратов селена и йода на гистофизиологию щитовидной железыкрольчих использовали препараты «Е-селен», «Селенолин®» и «Монклавит - 1».«Е-селен» – дисперсный комплекс витамина Е (токоферол ацетат) и селенитанатрия. «Селенолин®» представляет собой инъекционную форму стерильного 2%масляного раствора диацетофенонилселенида (ДАФС-25), разработан в ЗАО«Биоамид» (г.
Саратов). В отличие от первого препарата, селен в нем присутствуетв форме органического соединения.Согласно данными Е.А. Душкиной, В.В. Анипко, Л.Л. Абрамовой (2009)оптимальные дозы селенсодержащих препаратов «Е-селен» и «Селенолин®»оказывающие позитивное воздействие на организм испытуемых животных 0,04мл/кг и 0,008 мл/кг соответственно.«Монклавит - 1» лекарственное средство, содержащее в своем составе 0,1%иодакристаллическоговформеводногораствораполи-Nвиниламидациклосульфойодида. Отличительной особенностью данного препаратаот аналогов является отсутствие раздражающего и токсического эффектов приполном сохранении активности как микроэлемента и антисептика.8Дозировка «Монклавит - 1» для крольчих осуществлялась из расчета, чтосуточная доза йода для лабораторных животных: грызунов и зайцеобразныхсоставляла 150,0 мкг (Nutrient requirements of laboratory animals… (1995)), так жепринимали во внимание особенности фармакокинетики йодидов.Эксперимент состоял из двух частей.
Вначале было изучено влияниеселенсодержащих препаратов на клинический статус, продуктивность игистофизиологию щитовидной железы крольчих в репродуктивном цикле, а так жебыли выявлены критические периоды ее функциональной активности. Далее быларазработана, обоснована и внедрена схема комбинированного примененияпрепаратов селена и йода.На первом этапе изучали влияние препаратов селена на динамикуфункциональной реактивности щитовидной железы и гистоархитектонику еетканей у крольчих в период физиологической зрелости (6 месяцев, эструс). Дляэтого были сформированы три группы шестимесячных крольчих – аналогов, по триголовы в каждой (n = 9). Контролем служила I группа, крольчихам II и III групп задесять дней до планируемой случки вводили препарат «Е-селен» и «Селенолин®» врекомендуемых дозах.На втором этапе изучали влияние селенсодержащих препаратов наморфофизиологию и адаптационную пластичность щитовидной железы в периодпервой половины беременности и родов.
Для этого сформировали 3 группыживотных – аналогов в возрасте шести месяцев, живой массой не менее 3,5 кг суровнем упитанности выше среднего, по 3 головы в каждой (n = 9). Животные Iгруппы служили контролем, крольчихам II и III группы вводили препараты «Еселен» и «Селенолин®», после чего через 9-10 дней в раннее утреннее времяпроводили покрытие крольчих в соответствии с графиком эксперимента.Готовность самок к коитусу определяли по поведенческим аспектам(повышенная активность, беспокойство, положительная реакция на самца) иклиническому состоянию наружных половых органов (гиперемия и отек слизистойоболочки преддверия влагалища). При этом учитывались особенности половойцикличности крольчих, в среднем продолжительность полового цикла длится семьсуток.
Половая цикличность наиболее детерминирована в теплое время года с маяпо август, но при выраженном термическом стрессе (температура свыше 25°C) еѐпризнаки могут сглаживаться. Для верификации оптимальности выбранного дляслучки крольчих срока, проводили эксфолиативную цитологию влагалища.Через 7 – 10 суток с момента коитуса, во избежание прохолостов проводиликонтрольную случку, в случае ярко выраженной негативной реакции на самца(агрессия) крольчиха условно считалась беременной. Для подтверждения наличиябеременности также проводились дополнительные клинические исследования: на12 – 15 сутки после случки крольчих осторожно пальпировали по ходу роговматки, при наличии эмбрионов самку считали сукрольной.
Однако при такомспособе диагностики есть вероятность травмировать крольчиху или ошибочнопринять каловые массы в кишечнике за эмбрионы.9На третьем этапе изучали влияние препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» нагистофизиологию щитовидной железы и тиреоидный статус лактирующихкрольчих (n = 3).На четвертом и пятом этапах эксперимента изучали морфологические ифизиологические эффекты, вызываемые, в щитовидной железе крольчихкомбинированным применением препаратов селена и йода в период «6 месяцев,эструс → 15 суток беременности» (n = 18).Экспериментальная часть включала в себя следующий комплексисследований:Анатомо-гистологические методы: определение массы тела ищитовидной железы крольчих, измерение диаметра длины и толщины долейжелезы.
Материалом для гистологического исследования служили пробы ищитовидной железы от половозрелых самок всех исследуемых групп.Гистологический материал фиксировали в 10% растворе нейтральногоформалина и жидкости Карнуа, проводили через батарею спиртоввозрастающей крепости и заливали в парафин. Срезы толщиной 5-6 мкмокрашивали гематоксилином Майера и эозином, углеводсодержащиебиополимеры выявляли по Хочкису, РНК ядрышек и цитоплазмы выявляли пометоду Браше (Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996). Световую микроскопиюосуществляли при помощи микроскопа Micros MSD 500 (Австрия),оснащенного цифровой камерой.Цитологические исследования проб щитовидных железы (0,025 см3 для изготовления ультратонких срезов) начинали с фиксации в охлажденном2,5% растворе глютарового альдегида на фосфатном буфере (рН 7,4).После общепринятой подготовки и дегидратации, материал заключали в смесьэпон-аралдит и на ультратоме LKB V (Швеция) изготавливали срезытолщиной 0,07-0,08 мкм, которые окрашивали 1% раствором толуидиновогосинего, приготовленного на 2,5% безводной соде.
Электронную микроскопиюпроизводили на микроскопе JEM – 7A (Япония).Морфометрические исследования цито- и гистоструктур щитовиднойжелезы, количественную информацию об объемах и других параметрахклеточных структур, их ядер, наружных диаметрах сосудов ГМЦР получалипри использовании винтового окуляр-микрометра МОВ-1-15х1500 (ГОСТ15150-69) и лицензионной программы «ТестМорфо - 4.0». В процессегистереометрическихисследованийоценивалиудельныеплощадигистологических структур с помощью окулярных вставок: измерительныхлинеек, контрольных точек для работы по исчислению объема структур(Автандилов Г.Г., 2002).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
