Автореферат (1151546), страница 2
Текст из файла (страница 2)
В.М.Коропова ФГБОУ ВО МГАВМиБ – МВА имени К.И.Скрябина. Автор проводилнаучно-хозяйственные опыты, осуществляя исследования по изучению сочетанного применения препаратов: левамизола, тимогена и тетравита, их влиянияна иммунный статус животных, патофизиологического ответа организмов навведение лекарств. Автор непосредственно провел анализ, обработку и обобщение результатов исследования. Автор приносит свою глубокую благодарность за оказание помощи в организации и проведении научных исследованийГриченко Д.В.
– глав. гос. вет. инспектору по Шебекинскому району и г. Шебекино; Романцевой Н.С. – зав. «Шебекинской районной ветеринарной лаборатории»; Сабуняк С.Л. – директору овцеводческого хозяйства «СоАлан».5Апробация работыРезультаты исследований доложены и обсуждены на XVIII Международном Ветеринарном Конгрессе (Москва, Измайлово, 2010); XIX Международном Ветеринарном Конгрессе (Москва, Измайлово, 2011); 84 Межвузовскойнаучно-студенческой конференции (МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, 2011);Международной научно-практической конференции «Современная наука.Практический и теоретический взгляд» (Уфа, 2014); Международной научнойконференции "Youth for Science of XXI century" (Национальный УниверситетБиоресурсов и Природопользования Украины, Киев, 2014); III Международнойнаучно-практической конференции «Биотехнология – перспективы развития»(ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный педагогический университет им.М.
Акмуллы», Филиал ФГБОУ ВО «Московский государственный университеттехнологий и управления» им. К.Г. Разумовского», Уфа, Мелеуз, 2014); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы незаразной патологии животных» (ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственныйаграрный университет», Оренбург, 2014).Публикации по теме диссертацииПо результатам научных исследований опубликовано 7 научных статей,из них две в изданиях, рекомендованных ВАК РФ (Ветеринарная медицина,Вестник АПК Ставрополья).Объем и структура и диссертацииДиссертация изложена на 159 страницах компьютерного текста, включает следующие разделы: список принятых сокращений, введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, заключение, выводы, cведения о практическом использовании полученных результатов, библиографический список, приложение.
Включает 58 рисунков и 23таблицы. Список использованной литературы составляет 220 источников, в томчисле 154 работы отечественных авторов и 66 зарубежных.2. CОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ2.1. Предпосылки к работеРабочая гипотеза.
В овцеводческом хозяйстве Тверской области в 2009году проводили плановую дегельминтизацию поголовья левамизолом. Послеобработки взрослых овец было дегельминтизировано 40 ягнят той же дозой, чтои взрослые овцы. 10 ягнятам также была проведена витаминизация тетравитом.После введения указанных препаратов у ягнят появились сильные судорогипродолжительностью около 30 минут. Сочетанное использование левамизола итетравита привело к летальному исходу животных. При патологоанатомическом вскрытии павших ягнят обнаружили: точечные и пятнистые кровоизлияния во внутренних органах, отечность почек, увеличенную печень тестоватойконсистенции, катарально-геморрагическое воспаление желудочно-кишечного6тракта.
Этот факт послужил основанием для экспериментального моделирования данной ситуации на разных видах животных.2.2. Материалы и методы исследованияИсследование выполняли с 2009 по 2015 год на базе кафедры общей патологии имени В.М. Коропова ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВА имени К.И.Скрябина, овцеводческой фермы «СоАлан» Белгородской области, а такжеНИЛ ЯМР-спектроскопии биомолекул биолого-химического факультета НИУБелгородского Государственного Университета.Для достижения цели были применены клинические, гематологические,биохимические и статистические методы, а также патологоанатомическоевскрытие и метод спектроскопии ядерного магнитного резонанса.
Все эксперименты проводили согласно методикам, принятым в животноводстве, группыформировали по принципу аналогов. Для экспериментов отбирали клиническиздоровых животных.Известно, что левамизол (декарис) – антигельминтик широкого спектранематоцидного действия на водной основе, оказывающий иммуномодулирующее действие. Тетравит – витаминный препарат на масляной основе. Содержитретинол (вит. А), холекальциферол (вит.
D3), токоферола ацетат (вит. Е), комплекс ненасыщенных жирных кислот: линолевая, линоленовая и арахидоновая(вит. F). Тимоген – иммуномодулятор, регулирующий реакции клеточного игуморального иммунитета.Объекты исследованияМетодика иcследования сочетанного воздействия левамизола нанизкоорганизованных организмахДля реализации поставленных задач были проведены серии опытов. Впервой серии были сформированы 4 группы, в которые входили личинки комаров семейства Chironomidae отряда Двукрылые (n = 3600), личинки мух семейства Calliphoridae отряда Двукрылые (n = 190), кольчатые черви семействаLumbricidae (n = 120). Личинок и червей помещали в различные по концентрации водные растворы левамизола объемом 100 мл (0,75 %-, 1,5 %- и 2,2 %-ерастворы).
В качестве контроля использовали дистиллированную воду.Личинок и червей помещали в растворы левамизола, к которым добавляли 10 мл 40 %-о раствора глюкозы, 0,2 г альфа-кетоглутаровой кислоты, 0,2 гглицина, 0,2 г бета-аланина. У личинок и червей фиксировали клинические изменения и время наступления летального исхода.Методика исследования сочетанного воздействия левамизола,тимогена и тетравита на белых лабораторных мышах и овцахэдильбаевской породыВо второй и третьей серии эксперименты проводили на самцах лабораторных белых нелинейных мышей со средней массой 20 г (n = 67). При проведении опытов на животных через 24 часа после введения препаратов исследовали кровь.
Взятие крови проводили методом гуманной декапитации животных7в соответствии c Этическим кодексом, утвержденным Международным советоммедицинских научных обществ (CIOMS), и Хельсинкской декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации. У мышей и овец определяли: гемоглобин,количество эритроцитов, количество лейкоцитов с выведением лейкограммы(окраска мазков по Романовскому и Гимзе) и биохимические показатели. Исследования выполняли на микроскопе биологическом рабочем «БИОЛАМ Р11». Использовали окуляр К10х и различные объективы: 8, 40, для работы смазками крови - объектив МИ 90.Серии опытов № 4 - 7 проводили на овцах эдильбаевской породы. Использовали годовалых валухов со средней массой 35 кг и месячных ягнят сосредней массой 13 кг (n = 70). В пятой серии опытов животным вводили левамизол в терапевтической дозе и глюкозу перорально с помощью резиновойгруши, в шестой - левамизол и тетравит в различных дозах, в седьмой - тимогени тетравит в различных дозах внутримышечно.Биохимические исследования крови проводили по следующим показателям: общий билирубин (мкмоль/л), прямой билирубин (мкмоль/л), общий холестерол (моль/л), глюкоза (моль/л), АЛТ (ед/л), AСТ (ед/л), мочевина(мкмоль/л), триглицериды (ммоль/л), общий белок (г/л), альбумины (г/л), глобулины (г/л).Определение концентрации общего (прямого и неконъюгированного)билирубина в сыворотке крови проводили по принципу вступления его в реакцию азосочетания в присутствии диазотированного дихлоранилина.
Определение концентрации общего холестерола в сыворотке крови проводили энзиматическим колориметрическим методом, глюкозы – энзиматическим колориметрическим методом без деспротеинизации, АЛТ - кинетическим методом «АЛТUTS», АСТ - кинетическим методом «АСТ-UTS», мочевины - ферментативнымкинетическим методом (уреазно-глутаматдегидрогеназный метод), триглицеридов - GPO-PAP методом, общего белка - биуретовым методом, альбумина - колориметрическим методом с бромкрезоловым зеленым.Исследования крови крыс методом спектроскопии ядерногомагнитного резонансаВ опыте использовали самцов белых лабораторных крыс со среднеймассой 160 грамм. Левамизол вводили подкожно в дозе 11,3 мг/гол (70,6 мг/кг).Было создано восемь групп животных, у которых брали кровь через определенное время после введения препарата по схеме (табл.
1).1. Время взятия крови у животныхN группыВремя взятия крови (часы)10 (контрольная группа)2131,54252,5637485Для каждой пробы 0,5 мл крови смешивали с 0,1 мл тяжелой воды сизотопной чистотой 99,95 %. Полученную смесь тщательно перемешивали ипомещали в специальные ампулы диаметром 5 мм. Одномерные 1H ЯМР8спектры записывали на спектрометре ядерного магнитного резонанса 400-MR(Agilent, США, 2012 г.) с резонансной частотой 399,978 МГц. Спектрометр балансирует на воздушной подушке для стабилизации магнитных полей.Измерения проводили при постоянной температуре 298 K (25 ОС).
Перед каждым измерением для достижения термодинамического равновесия смеси образец выдерживали при данной температуре в течение 5 минут.Анализ данных эксперимента осуществляли с помощью программногообеспечения VNMRj 3.1 и MestReNova 6.0. Обработку цифрового материалапроводили методом вариационной статистики, использовали критерий Стьюдента и программу Microsoft Excel. Изменения показателей при сравнении сконтролем считали достоверными при вероятности Р = 0,05 и меньше. Цифровой материал представлен в единицах СИ.2.3. Результаты собственных исследований и их обсуждение2.3.1. Исследование воздействия левамизола на низкоорганизованныеорганизмыМинимальной устойчивостью к левамизолу обладают кольчатые черви,максимальной – личинки комаров семейства Chironomidae.
Реакция животныхна левамизол специфична: возникают внезапные и мощные сокращения всеготела у кольчатых червей, у личинок комаров семейства Chironomidae появляются маятникообразные движения одной стороны тела. Добавление к раствору левамизола 40 %-й глюкозы и аминокислот ускоряет на 4,22 ± 0,34 минуты летальный исход у животных по сравнению с контролем.2.3.2. Экспериментальная модель изучения воздействия левамизола итетравита на белых мышейПри введении десятикратной дозы левамизола у мышей гибель наступила у 50 % особей. У животных наблюдали одышку, возбуждение, обильнуюдефекацию, атаксию, тремор, судороги, которые начинались кивательнымидвижениями головы, затем шеи, грудных конечностей и области груди.
Тонические судороги переходили в клонические. Важно подчеркнуть, что аналогичную клиническую картину наблюдали и у павших в 2009 году овец.При введении пятикратной дозы изменений у мышей не наблюдали, однако при одновременном введении тетравита все экспериментальные животныепогибали. Чувствительнее к левамизолу оказались мыши на голодной диете.Так, при введении LD50 выявлен 100 %-й летальный исход.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
