Диссертация (1151313), страница 47
Текст из файла (страница 47)
100)10 Гц, 3 мин. Лизис ЦПМ гранулоцитов. Дегенеративные изменения во всех лейкоцитах, кроме лимфоцитов10 Гц, 5 мин. В мазках< 40 клеток<К—3К3К—5——226Частота модуляции, время,общий эффект15 с, 1000 Гц.Начало агрегации клетокЭБМЛ=К< К/2К>2КНПС>2КК/1.2Агрегация и повреждениеклеток начиная от 30 с,<К—>3К>2К1.6 КК/1.8 — К/21000 Гц1000 Гц, 30 с=КК/1.4 6 К5К=КК/1.31000 Гц, 60 с. 10% клетокс повреждениями ЦПМ<К—5К2КК/32 К/5(рисунок 101а)Примечания. *К — уровень контроля. • (на жёлтом фоне) — кошки. • (на белом) — лошади.
Количество животных:11 кошек в возрасте 2–3 лет; 18 лошадей в возрасте 5–8 лет. Каждый образец исследовали, по меньшей мере, 10 раз.** Так как клетки объединяются в группы, в поле зрения при подсчёте попадает их различное количество. То, какаяименно часть мазка просчитывается, в конечном счёте, случайно. И в группах количество эозинофилов всегдаразное. Дано минимальное и максимальное встреченное нами значение в сравнении с контрольным: от пяти- дотринадцатикратного (!) увеличения; p > 0.05.Эозинофилы и базофилы лошади были не столь «чувствительны» к кратковременнойобработке: их количество существенно не менялось (p > 0.05). Моноциты «отвечали» аналогично(увеличение в 4–5 раз по сравнению с контролем, p < 0.05).
Процентный состав остальныхформенныхэлементоврезкоизменялся:количестволимфоцитовуменьшалось,а сегментоядерных нейтрофилов — увеличивалось в те же самые 1.4 раза относительно контроля(p < 0.05). При этом данные микроскопии показали дегенеративные изменения в ядрахлейкоцитов. Последовательное увеличение времени экспозиции до 3 мин усиливало эффект. При5-минутной обработке в мазках было всего 40–45 клеток: эозинофилы, базофилы, моноцитыи небольшое количество лимфоцитов. Следует отметить, что во всех лейкоцитах обоихживотных, кроме лимфоцитов, наблюдали дегенеративные изменения, а сегментоядерныенейтрофилы и эозинофилы располагались в группах. Анализ результатов обработки клетоккрови обоих видов животных интенсивностью до 1.0 Вт/см2 с той же частотой модуляции выявилоднонаправленность физиологических эффектов (рисунки 100а–в).227Рисунок 100а.
Фото мазка крови кошки. Лизислейкоцита. Интенсивность 1.0 Вт/см2, частотамодуляции 10 Гц, 60 с100в. Фото мазка крови лошади. Частота модуляции 10 Гц,0.2 Вт/см2, 3 мин. «На 11 часов» — сегментоядерныйнейтрофил. Группа: трудно типируемых клеток(лимфоцит, сегментоядерный нейтрофил и, возможно,моноцит). «Бабочка» — дегенеративные изменениялейкоцита с разрушением — вероятно, деформируетсялимфоцит или базофил без ЦП (идентификацияневозможна).100б. Фото мазка крови лошади. Лизис и агрегациянейтрофилов и эозинофила при УЗ интенсивности0.2 Вт/см2.
Частота модуляции 10 Гц, 60 с.100г. Фото мазка крови лошади. 60 с. Частотамодуляции 1000 Гц. Интенсивность 0.2 Вт/см2.Эозинофил. Разрушение клеточной стенки,деформация (лизис) ядра. Гранулы эозинофила(слева внизу) вышли из клетки, но не разрушены.Ядро клетки «рваное».Влияние модулированного УЗ с частотой 1000 Гц. На эозинофилы и базофилы и кошек,и лошадей указанная частота на обеих интенсивностях действует одинаково (таблица 51 выше):количество эозинофилов не меняется, но нарушается целостность ЦПМ; содержание базофиловпостепенно уменьшается в 2–5 раз с увеличением времени экспозиции (15–30 с) по сравнениюс контролем.
Остальные клетки реагировали по-разному: у кошек процент лимфоцитов228и палочкоядерных нейтрофилов в лейкограмме увеличивался в 2–5 раз, а сегментоядерных —уменьшался в 2 раза (p < 0.05). Дальнейшее увеличение времени воздействия приводилок лизису клеток (рисунки 101а и б) и разрушению ядер лейкоцитов. У лошади основноенаправление воздействия сохранялось. Наблюдался рост числа лимфоцитов в 1.3–2 раза(p < 0.05) при одновременном уменьшении содержания сегментоядерных нейтрофилов.Молодые нейтрофилы сохраняли жизнеспособность.
При этом из числа типируемых клеток10% — с разрушенной ЦПМ (рисунок 100г).Рисунок 101а. Фото мазка крови лошади. 1.0 Вт/см2,частота модуляции 1000 Гц, 60 с. Лизис (клеточнойстенки и ядра) и, возможно, изменение поверхностногонатяжения лейкоцитов разных видов. Верхний ряд:сегментоядерный нейтрофил, лимфоцит, «вакуоль» нафото — это 2 клетки, соединённые ядрами («на 13 часах»,вверху-посередине-справа)101б. Фото мазка крови кошки.
Лизис и взрыв ядерлейкоцитов. Интенсивность 0.2 Вт/см2. Частотамодуляции 1000 Гц. 40 с.Таким образом, на основе полученных данных можно сделать заключение, что на однойи той же интенсивности УЗ глубина эффекта зависит от времени экспозиции и от частотымодуляции УЗ. На данном этапе исследований можно констатировать наличие возможностиуправления функциональным состоянием исследованных систем, применяя различныепараметры модуляции.
На сегодняшний день нет теорий, позволяющих дать объяснение наличиютаких частотных зависимостей для сложных биологических систем. Скорее всего, такие эффектысвязаны со сложными параметрическими резонансами в этих системах и, в первую очередь,с влиянием на константы взаимодействия в ключевых подсистемах (ферментах, ферментмембранных комплексах, транспортных системах клеток). В экспериментах in vivo былопоказано, что в случае активации лимфопоэза у больных крыс могло наблюдаться значительноеувеличение числа малых и средних лимфоцитов в субпопуляционном составе периферическойкрови [43, 44], что в свою очередь должно привести к активации иммунного надзора [45].Полученное нами достоверное, хотя и небольшое (в 1.3–1.6 раз), изменение в акустическом поле229соотношения лимфоцитов в сторону увеличения доли молодых клеток могло бы в острыхслучаях применяться для обеспечения выявленной тенденции при терапии животных.Анализ полученных результатов свидетельствует о существовании одного направленияфизиологического эффекта амплитудно-модулированного УЗ на клетки крови представителейдвух разных семейств: кошачьих и непарнокопытных.
Это даёт возможность выработкиклинических рекомендаций по выбору безопасных диапазонов воздействия для каждогоживотного.§ 16.6. Сводный анализ основных выявленных особенностей воздействияультразвука на клетки крови домашних животныхВ связи с физиологическими особенностями клеток разных видов животных былипоставлены опыты по влиянию модулированного УЗ на образцы смешанной крови домашнихживотных: лошади и собаки, лошади и кошки. Однако в смеси крови видовую принадлежностьформенных элементов на основе мазка крови определить более чем сложно (за исключениемэритроцитов лошади и собаки, которые заметно различаются размером). Во всех опытах первыминачиналиразрушатьсяэозинофилы:лизисклеточнойстенки,«высыпание»гранулв межклеточное пространство, и только затем — лизис клетки; последними в УЗ поледеформировались и разрушались лимфоциты.
Экспозиции, действующие на белую и краснуюкровь различны во всех опытных образцах. У эритроцитов регистрировали анизоцитознезависимо от размера. Все отмеченные ранее особенности влияния УЗ волны на каждую клеткув отдельности у каждого из видов были подтверждены в этом «совместном» эксперименте.Действие непрерывного ультразвука на клетки крови животныхКаждая интенсивность и экспозиция вносили что-то «своё» в цепочку морфологическихизменений. Остановимся только на тех из них, которые выявлены только после микроскопиимазков крови. Если бы исследование опиралось лишь на определение изменений в лейкограммах(наиболее удобный и распространённый вид лабораторной диагностики в клиниках), этихданных мы бы не получили. Некоторые параметры облучений и краткие результаты.Кошка.
Режим инсонирования — 0.7 Вт/см2, 15 с: начало агрегации лимфоцитов, 25 с —тромбоцитов и сегментоядерных нейтрофилов.Собака. Режим: 0.05 Вт/см2, 45 с — лейкограмма без особенностей. (У кошки — сдвигвлево.) Деформация клеток, у 5% лейкоцитов начало лизиса ЦПМ. Режим 0.4 Вт/см2, 30 с —начало агрегации гранулоцитов.230Лошадь. Режим 0.05 Вт/см2, 45–75 с: лейкограмма без особенностей, но от 5% (обработка45 с) до 20% (60 с) лейкоцитов с изменённой или лизированной ЦПМ. После 75 с экспозициив мазке наблюдается лейкопения.Режим 0.2 Вт/см2, 15–45 с — лейкограмма без особенностей, но происходит изменениеобъёма цитоплазмы лимфоцитов по сравнению с контролем.
0.2 Вт/см2, 90 с — у 20%сегментоядерных нейтрофилов и эозинофилов лизис ЦПМ. Остальные виды лейкоцитов безособенностей. Изменения лейкограмм в пределах референтного ряда.Режим 0.4 Вт/см2, 30 с. (рисунок 99 г на странице 222) — лейкограмма без особенностей.Начало разрушения лейкоцитов. После 45 с — изменения в ядрах лимфоцитов и объёма ихцитоплазмы.Режим 1.0 Вт/см2, 40 с — агрегация тромбоцитов лизис лейкоцитов (рисунок 99 д настранице 222). 60 с — тромбоциты в огромных группах. Сохранны только лимфоциты, но 90%из них без цитоплазмы.
Других лейкоцитов в мазке нет. Только в крови лошади (рисунок 20в настранице 87) под действием непрерывного УЗ регистрировали изменения эритроцитов. Так,после облучения интенсивностью 1.0 Вт/см2 более 30 с обнаружены включения в клетки,агрегация. При этом происходили дегенеративные изменения лейкоцитов.С ростом экспозиции в лейкограммах всех животных увеличивалось абсолютноеи относительное количество агранулоцитов на фоне общего лейкоцитарного сдвига влево(в сторону более молодых форм клеток). В отдельных исследованиях с лейкомассой нами былопоказано, что число агломератов лейкоцитов, образовавшихся за 5 мин воздействиянепрерывным УЗ,увеличивалосьс возрастанием интенсивностиУЗ.В экспериментахс животными так же, как и при озвучивании лейкомассы, в образцах крови кошек, собаки лошадей всех возрастов с увеличением УЗ экспозиции наблюдали дозозависимый эффектклеточной агрегации.
При низкой интенсивности 0.01–0.1 Вт/см2 обнаруживали по 4–8 клетокв ассоциациях. При более высоких дозах УЗ наблюдали скопление из множества клеток, вплотьдо сгустков. Под действием стоячих волн при интенсивности 0.05–0.4 Вт/см2 из лейкоцитоввыходил практически важный метаболит ИФН.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
