Диссертация (1144318), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Dis.2005. Vol. 2, № 1. P. 6–15.65.Bezprozvanny I., Mattson M.P. Neuronal calcium mishandling and thepathogenesis of Alzheimer’s disease // Trends in Neurosciences. 2008. Vol. 31,№ 9. P. 454–463.66.Stutzmann G.E. The Pathogenesis of Alzheimers Disease—Is It a Lifelong“Calciumopathy”? // Neurosci. 2007. Vol. 13, № 5. P. 546–559.67.Berridge M.J. Neuronal calcium signaling.
// Neuron. 1998. Vol. 21, № 1. P. 13–26.68.Zhang H. et al. Calcium Signaling, Excitability, and Synaptic Plasticity Defectsin a Mouse Model of Alzheimer’s Disease // J. Alzheimer’s Dis. 2015. Vol. 45,№ 2. P. 561–580.- 77 -ПРИЛОЖЕНИЕ 1Рис. 22.
Протокол кальций-фосфатной ко-трансфекцииВ растворе А в случае кальций-фосфатной ко-трансфекции вместо однойплазмиды в концентрации 1мкг/мкл добавляли две плазмиды: целевую FCK-ChR2GFP и маркерную pCSCMV:tdTomato таким образом, чтобы суммарнаяконцентрациясоставляла1мкг/мкл.Приэтомсоотношениецелевойимаркированной плазмиды составляло 3:1. Концентрацию плазмиды FCK-ChR2GFP умножали на коэффициент 0,75, а концентрацию pCSCMV:tdTomato на 0,25.- 78 -Таблица 4Состав искусственной спинномозговой жидкости (ACSF)Сток 1№12345НаименованиеNaClKClKH2PO4NaHCO3D-глюкозамМ1271,01,22610Mr (г/моль)58,4474,55136,0984,01180,16Объем, мл1000масса, г7,420,070,162,181,80x1074,220,751,6321,8418,02Сток 2 (1M сток)6CaCl21000110,98505,54901009,5211Сток 3 (1M сток)7MgCl2100095,21После взвешивания солей растворяли их дистиллированной водой в нужномобъеме, не доводя до конечного значения.
После того, как все соли былирастворены, насыщали раствор ACSF карбогеном (95% O2 / 5% CO2) в течение 1520 минут для стабилизации pH до уровня 7,3-7,4. После чего добавлялинеобходимый объем 1М CaCl2 и 1М MgCl2 доводя раствор до конечнойконцентрации: 2,4 мМ CaCl2, 1,3 мМ MgCl2.Ниже приведены расчеты необходимых объемов 1М CaCl2 и 1М MgCl2 на 15мл ACSF.Таблица 5Необходимый объем 1М CaCl2 и 1М MgCl2 для ACSFИтоговая концентрация врастворе (мМ)CaCl22,4MgCl21,3Объем стока 1(ACSF), мл15Необходимыйобъем, µл3619,5- 79 -Таблица 6Состав раствора для заполнения стеклянного микроэлектрода№НаименованиеMr (г/моль)мМграмм на 15 млграмм на 50 мл1K-глюконат234,251400,49191,63972MgCl295,2120,00290,00953NaCl58,4420,00180,00584ATP-Na2551,1520,01650,05515GTP- Mg547,490,30,00250,00826HEPES238,30100,03570,1192- 80 -ПРИЛОЖЕНИЕ 2Рис.
23. Зависимость значения амплитуды мембранного тока одного нейрона гиппокампаот длительности светового стимула при разных интенсивностях света (ось абсцисс указана влогарифмическом масштабе, максимальное значение Imax=35 мВ·мм-2 принималось за 1).- 81 -*первый стимулРис. 24. Зависимость значения амплитуды мембранного тока одного нейрона гиппокампаот длительности светового стимула для первых ответов* при разных интенсивностях света (осьабсцисс указана в логарифмическом масштабе, максимальное значение Imax=35 мВ·мм-2принималось за 1).- 82 -ПРИЛОЖЕНИЕ 3Рис.
25. Динамика амплитуды мембранного тока при максимальной интенсивности (Imax) иразных длительностях светового импульса- 83 -Рис. 26. Динамика амплитуды мембранного тока при I = 0,9 и разных длительностях световогоимпульса- 84 -Рис. 27. Динамика амплитуды мембранного тока при I = 0,8 и разных длительностях световогоимпульса- 85 -Рис. 28. Динамика амплитуды мембранного тока при I = 0,7 и разных длительностях световогоимпульса- 86 -Рис.
29. Динамика амплитуды мембранного тока при I = 0,6 и разных длительностях световогоимпульса- 87 -Рис. 30. Динамика амплитуды мембранного тока при I = 0,5 и разных длительностях световогоимпульса- 88 -Рис. 31. Динамика амплитуды мембранного тока при I = 0,4 и разных длительностях световогоимпульса- 89 -Рис. 32. Динамика амплитуды мембранного тока при I = 0,3 и разных длительностях световогоимпульса- 90 -Рис. 33. Динамика амплитуды мембранного тока при I = 0,2 и разных длительностях световогоимпульса- 91 -Рис. 34. Динамика амплитуды мембранного тока при I = 0,1 и разных длительностях световогоимпульса.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
