Автореферат (1141411), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Вдоль жилок листочков обертки обнаруженымлечники.Клеткипрозенхимнойэпидермисаформы,струбкипрямымивенчикабоковымиязычковогостенками,цветказубцовссосочковидными выростами, продольно вытянутые с мелкозазубреннымибоковыми стенками (рисунок 7). На эпидермисе трубки венчика встречаютсядлинныемногоклеточные,многорядныеволоскисодноряднойилимногорядной верхушкой, конечная клетка которых заострена (рисунок 8), укульбабы осенней встречаются простые тонкостенные многоклеточные волоскииногда со спадающимися стенками клеток.14Для стандартизации сырья кульбабы были разработаны методикиколичественногоопределенияосновныхгруппдействующихвеществ(флавоноидов и полисахаридов) и установлены нормы их содержания.1213465Рисунок 2 – Фрагмент эпидермиса стебля кульбабышершавоволосистой (Увел.
х 200)1 – многоклеточные, многорядные, ветвистые волоски(древовидные волоски)Рисунок 1 – Поперечный срез стебля кульбабы осенней (Увел.х120)1 – эпидермис, 2 – хлорофиллоносная паренхима,3 – проводящиепучки, 4 – паренхима сердцевины, 5 – эндодерма, 6 – полость112Рисунок 3 – Фрагмент нижнего эпидермиса листакульбабы шершавоволосистой (Увел.х 200)1 – простой тонкостенный волосок со спадающимисястенками клетокРисунок 4 – Фрагмент эпидермиса вдоль жилки листа кульбабышершавоволосистой (Увел.х280)1 – млечники121Рисунок 5 – Фрагмент листочка обвертки кульбабы осенней(Увел.х 300)1 – простые одноклеточные волоски с извилистой кутикулой, 2 –сосочковидные выросты клеток эпидермисаРисунок 6 – Фрагмент эпидермиса на верхушке листочкаобвертки кульбабы осенней (Увел.х 300)1 – многоклеточные тонкостенные простые волоски соспадающимися стенками клеток1122Рисунок 7 – Фрагмент эпидермиса зубцов венчика язычкового цветкакульбабы осенней (Увел.
х 300)151 – клетки эпидермиса с сосочковидными выростами, 2 – клеткиэпидермиса с мелкозазубренными боковыми стенками15Рисунок 8 – Фрагмент эпидермиса трубки венчика язычковогоцветка кульбабы шершавоволосистой (Увел. х 300)1 – длинные многоклеточные многорядныеволоски сзаостренной конечной однорядной верхушки2- длинные многоклеточные, многорядные волоски сзаостренной конечной клеткой многорядной верхушкиДля оценки содержания флавоноидов в сырье был использован методдифференциальнойспектрофотометриисприменениемреакциикомплексообразования с алюминия хлоридом в среде спирта 70%. В качествестандартного вещества выбран цинарозид, регистрировали поглощение придлине волны 395 нм, расчет содержания суммы флавоноидов проводили сиспользованием удельного показателя поглощения (=345) цинарозида салюминия хлоридом. Согласно полученным результатам, наиболее полноеизвлечение суммы флавоноидов достигается при использовании спирта 70%,степени измельченности сырья 1 мм, соотношении сырья и экстрагента 1:100;извлечение вели до наступления экстрактивного равновесия в течение 45минут.
Содержание суммы флавоноидов в траве кульбабы осенней колеблетсяот 0,55% до 0,71%, в траве кульбабы шершавоволосистой - от 0,74% до 0,83%.На основании этих данных установлена норма содержания суммыфлавоноидов - не менее 0,5%.Дляколичественногоопределениясуммыводорастворимыхполисахаридов использован гравиметрический метод.
Изучение условийколичественного определения водорастворимых полисахаридов показало, чтооптимальными условиями, обеспечивающими их максимальный выход изсырья являются: степень измельчения сырья – 1 мм, четырехкратная экстракцияводой в течение 120 минут (4 раза по 30 минут), использование трехкратногообъема спирта 96% для осаждения полисахаридов.Содержание суммы водорастворимых полисахаридов в траве кульбабыосенней колеблется от 9,34% до 10,06%, в траве кульбабы шершавоволосистой- от 12,15% до 13,19%.
На основании этих данных установлена нормасодержания суммы водорастворимых полисахаридов - не менее 9,0%.Проведена валидация методик количественного определения суммыфлавоноидов и полисахаридов по показателям линейности, повторяемости,воспроизводимости и правильности, в результате чего они были признаныпрецизионными в данных условиях.16Для оптимизации сроков заготовки травы кульбабы осенней и кульбабышершавоволосистой проведено изучение динамики накопления флавоноидов иполисахаридов по фазам вегетации (таблица 3).Таблица 3 – Содержание основных групп действующих веществ в травекульбабы в зависимости от фазы вегетацииФаза вегетацииБутонизацияНачало цветенияМассовое цветениеПлодоношениеКульбаба осенняяСодержаниеСодержаниесуммысуммыфлавоноидов, % полисахаридов,%0,60±0,047,37±0,340,66±0,038,90±0,380,71±0,049,51±0,400,49±0,035,96±0,29Кульбаба шершавоволосистаяСодержаниеСодержаниесуммысуммыфлавоноидов, % полисахаридов,%0,67±0,039,83±0,410,75±0,0411,13±0,490,83±0,0512,65±0,510,59±0,047,79±0,37В результате установлено, что максимальное количество флавоноидов иводорастворимых полисахаридов в траве кульбабы осенней и кульбабышершавоволосистойнакапливаетсявфазуцветения.Такимобразом,заготавливать траву кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистойрекомендовано в период массового цветения растений.Для определения качества травы кульбабы осенней и кульбабышершавоволосистой установлены числовые показатели: содержание золыобщейнеболее9%,золы,нерастворимойврастворекислотыхлористоводородной 10%, не более 2%, влажность не более 13%.
Установленанорма содержания экстрактивных веществ, извлекаемых водой - не менее 22%.Срок годности сырья кульбабы составляет 2 года. Проведенные исследованияпослужилиосновойдляразработкипроектанормативногодокумента«Кульбабы трава», согласованного с фирмой «Здоровье».Изучение фармакологической активностикульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистойПринимая во внимание литературные данные и результаты проведенногонами фитохимического анализа травы кульбабы осенней и кульбабышершавоволосистой,былиопределеныфармакологическихисследований:изучениеантиоксидантной,противовоспалительной,17основныенаправленияостройтоксичности,антибактериальнойиотхаркивающей активностей.Изучена острая токсичность настоев и водорастворимых полисахаридныхкомплексов травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой пометодике Б.
М. Штабского, в результате чего установлено, что настои иводорастворимыеполисахаридныекомплексыизучаемыхвидовпоклассификации К. К. Сидорова относятся к классу практически нетоксичных.Оценкуантиоксидантнойактивностиводныхиводно-спиртовыхизвлечений из травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистойпроводили с помощью титриметрической методике, основанной на химическойреакции между калия перманганатом и биологически активными веществамивосстановительного характера, содержащимися в извлечениях из исследуемыхрастений.
В качестве препаратов сравнения использовали растворы кверцетина,рутина и цинарозида, известные своими антиоксидантными свойствами.Установлено, что наибольшая антиоксидантная активность извлечений изтравы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой наблюдается прииспользованиивкачествеэкстрагентаводы.Изэтогоследует,чтоантиоксидантная активность кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистойвбольшейстепенисодержащимисявобусловленанихводорастворимыми(гидроксикоричнымисоединениями,кислотами,аскорбиновойкислотой, аминокислотами, полисахаридами и т.д.).Оценкуотхаркивающейактивностинастоевиводорастворимыхполисахаридных комплексов изучаемых видов проводили по методике В.В.Гацура, основанной на изменении скорости сокращения мерцательногоэпителия пищевода лягушки.
Было установлено, что все исследуемые настои иводорастворимые полисахаридные комплексыдействием,сопоставимымактивностидействиеилипрепаратаобладают отхаркивающимпревышающимсравненияпофармакологическойМукалтина.Наибольшуюотхаркивающую активность проявили водорастворимые полисахаридныекомплексы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой, увеличение18двигательной активности которых составило 49,20±2,62% и 42,36±3,09%соответственно, Мукалтина 38,33%.Противовоспалительнуюполисахаридныхкомплексовактивностьтравынастоевкульбабыиводорастворимыхосеннейикульбабышершавоволосистой оценивали по общепринятой схеме с учетом влияния напроцессы экссудации, пролиферации и укрепления сосудистой стенки.
Врезультате установлено, что наибольшую противовоспалительную активностьпроявиливодорастворимыеполисахаридныекомплексы,противовоспалительный эффект которых при антиэкссудативной активностисоставил 36,45%, и 44,69%, при антипролиферативной активности – 70,30% и64,30%, а при изучении антифлогистической активности установлено, чтонаиболее выраженную антифлогистическую активность оказывают водныенастои кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой, достоверноеувеличение времени появления зон окрашивания для которых составило(5,92±0,40 мин и 6,28±0,34 мин) и уменьшение их диаметра (1,08±0,04 см и1,23±0,06 см) соответственно.Изучениеантимикробнойактивностипоказало,чтонаибольшуюантибактериальную активность настой кульбабы осенней проявил в отношениигрибов рода Candida и тест-культур Bacillus cereus в разведении 1:2 и Proteusvulgaris в разведении 1:4, а настой кульбабы шершавоволосистой - в отношениигрибов рода Candida и тест-культур Bacillus cereus в разведении 1:2, вотношении культур Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и Proteusvulgaris - в разведении 1:4.Стандартизация водных извлеченийНастои травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистойготовили в соответствии с общей фармакопейной статьей ГФ XI «Настои иотвары».
Проведена стандартизация водных извлечений, полученных изисследуемых видов, по содержанию суммы полисахаридов и флавоноидов сиспользованием ранее разработанных методик, которые были адаптированы19для настоев путем изменения условий спектрофотометрирования флавоноидови осаждения полисахаридов.кульбабыосеннейСодержание суммы полисахаридов в настоесоставляет2,58±0,12%,внастоекульбабышершавоволосистой 3,56±0,15%, сумма флавоноидов - 0,113±0,004% в настоекульбабы осенней и 0,102±0,003% в настое кульбабы шершавоволосистой.ОБЩИЕ ВЫВОДЫ1.Проведено фитохимическое исследование травы кульбабы осенней(Leontodon аutumnalis L.) и кульбабы шершавоволосистой (Leontodon hispidusL.) семейства Астровые (Asteraceae). Установлено наличие углеводов,азотсодержащих соединений (аминокислот, азотистых оснований), жирных иорганическихкислот,тритерпеновыхисесквитерпеновыхсоединений,каротиноидов, фенольных соединений и минеральных элементов.
Основнымигруппами биологически активных веществ двух видов кульбабы являютсясесквитерпеновые лактоны, фенольные соединения и полисахариды.2.Методами ВЭЖХ, газожидкостной – хромато-масс-спектрометрии,тонкослойной, бумажной хроматографии изучены фенольные соединениятравы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой. В сырье изучаемыхвидов идентифицировано 17 веществ фенольной природы. Впервые для данныхвидов определено 13 соединений: кумарины - скополетин, умбеллиферон,кумарин; флавоноиды - цинарозид, апигенин; производные дубильных веществ- галлокатехин, эпигаллокатехин, эпикатехин, эпикатехингаллат; производныефенолкарбоновых кислот - кофейная, галловая, эллаговая, розмариновая,феруловая, п-кумаровая кислоты.3.Впервые проведено изучение полисахаридов изучаемых видов пофракциям.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
