Автореферат (1141411), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Автору принадлежит ведущая роль в проведенииэкспериментальныхрезультатов.Вкладисследований,автораанализеявляетсяиобобщенииопределяющимнаполученныхвсехэтапахисследования: от постановки задач, их экспериментально-теоретическойреализации до обсуждения результатов в научных публикациях, докладах.Диссертация и автореферат написаны лично автором.8Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтическихнаук.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научноисследовательскихуниверситетапоработтеме:Курского«ИзучениегосударственноголекарственныхмедицинскогорастенийобластейЦентральной России и вопросы их рационального использования» (номергосударственной регистрации 01.2.014.50337).Соответствиедиссертациипаспортунаучнойспециальности.Диссертационная работа соответствует паспорту специальности 14.04.02 –фармацевтическаяхимия,фармакогнозия.Результатыисследованиясоответствуют области исследования специальности, а именно пунктам 2,3,6паспорта специальности «фармацевтическая химия, фармакогнозия».Объем и структура диссертации.
Диссертационная работа изложена на167 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы(1 глава), экспериментальной части и обсуждения полученных результатов(главы 2, 3, 4, 5), общих выводов, списка литературы, приложений. Вдиссертации содержится 43 таблицы и 66 рисунков. Библиографический списоксостоит из 248 источников, из которых 45 - на иностранных языках.Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 24научных работы, в том числе 5 в изданиях, рекомендованных Высшейаттестационной комиссией Минобрнауки России.ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫОбъекты и методы исследованияОбъектом исследования явилась трава кульбабы осенней и кульбабышершавоволосистой, заготовленные на территории Курской, Белгородской иВоронежской областей в 2010 - 2015 гг.
в различные фазы вегетации растений.Обнаружение биологически активных веществ в траве кульбабыпроводили с помощью качественных реакций, методами тонкослойной ибумажной хроматографии, а также методами высокоэффективной жидкостнойхроматографии на хроматографе Agilent 1200 (AgilentTechnologies США),9газожидкостной хромато-масс-спектрометрии на хроматографе Agilent 6890(AgilentTechnologiesСША),атомно-эмиссионнойспектроскопиинаспектрографе ДФС-8-1 (Россия), денситометрии на денситометре Sorbfil(Россия).
Определение количественного содержание суммы флавоноидовпроводили с помощью спектрофотометра СФ-2000 (Россия) с использованиестандартного образца цинарозида фирмы Fitopanacea CAS №5373-11-5.В качестве стандартных образцов использовали коммерчески доступныеиндивидуальные вещества: галловую кислоту («Fluka»), эллаговую кислоту(«Fluka»), кофейную кислоту («Sigma-Aldrich»), розмариновую кислоту(«Fluka»), хлорогеновую кислоту («Fluka»), п-кумаровую кислоту («SigmaAldrich»), феруловую кислоту («Sigma-Aldrich»), скополетин («Sigma-Aldrich»),умбеллиферон(«Sigma-Aldrich»),кумарин(«Sigma-Aldrich»),лютеолин(«Sigma-Aldrich»), апигенин («Sigma-Aldrich»), галлокатехин («Sigma-Aldrich»),эпикатехин («Sigma-Aldrich»), эпикатехингаллат («Sigma-Aldrich»).Микроскопическоеисследованиепроводилисиспользованиеммикроскопа «Биолам С-11» с цифровой насадкой.Для проведения фармакологического скрининга использовали водноспиртовые извлечения, настои и водорастворимые полисахариды, полученныеизтравыкульбабыосеннейикульбабышершавоволосистой.Экспериментальные фармакологические исследования проводили согласноустановленным документам «Об утверждении правил лабораторной практики»(МЗ РФ, приказ № 267, 2003).Результаты исследования и их обсуждениеИзучение качественного и количественного составабиологически активных веществВ ходе фитохимического изучения травы кульбабы осенней и кульбабышершавоволосистойсоединений,установленокарбоновыхкислот,наличиеуглеводов,тритерпеновыхиазотсодержащихсесквитерпеновыхсоединений, каротиноидов, минеральных веществ, флавоноидов, кумаринов,10дубильных веществ.При проведении количественного анализа биологически активныхвеществ исследуемого сырья определено содержание: азотистых оснований –0,075±0,001% и 0,096±0,003%, в том числе холина – 0,055±0,001% и0,067±0,002%; дубильных веществ – 4,74±0,16% и 4,28±0,18%; органическихкислот – 8,57±0,28% и 6,95±0,27%; тритерпеновых соединений – 0,015± 0,001%и 0,031±0,002%; каротиноидов – 4,95±0,19мг% и 3,85±0,13мг% в травекульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой соответственно.С использованием аминокислотного анализатора ААА-339М исследованаминокислотныйсоставшершавоволосистой,травыкоторыйкульбабыпредставленосеннейикульбабыаспарагиновойкислотой,треонином, серином, цистеином, глицином, аланином, валином, метионином,изолейцином, лейцином, тирозином, фенилаланином, гистидином, лизином.Содержание суммы свободных аминокислот в траве кульбабы осеннейсоставляет0,62мг/100мг,изнихсумманезаменимыхаминокислот0,21мг/100мг, а в траве кульбабы шершавоволосистой - 0,54мг/100мг и0,20мг/100мг соответственно.Методом эмиссионного спектрального анализа изучен минеральныйсостав и установлено, что содержание свинца в траве кульбабы осенней икульбабы шершавоволосистой не превышает установленные нормативы.
Средиминеральных элементов преобладали магний, калий и кальций.Методом ГЖХ с масс-спектральным детектором изучены карбоновыекислоты, представленные органическими, жирными и фенолкарбоновымикислотами. В траве кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой былиидентифицированы 9 органических, 18 жирных и 8 фенолкарбоновых кислот.Среди органических кислот преобладающими являются левулиновая, яблочнаяи лимонная кислоты, среди жирных – линоленовая, линолевая и пальмитиноваякислоты, среди фенолкарбоновых кислот – п-оксибензойная, п-кумаровая иферуловая кислоты.11Методами бумажной, тонкослойной и высокоэффективной жидкостнойхроматографии (таблица 1) в сырье исследуемых видов идентифицировано 17веществ фенольной природы, 13 соединений из них установлены впервые.Таблица 1 – Результаты исследования фенольных веществ травыкульбабы методом высокоэффективной жидкостной хроматографииВремя удерживания, минАБ7,2497,47414,68314,77315,61015,69917,63217,43319,35919,39822,33822,38624,21427,47127,47129,13329,12133,56733,56737,55337,55339,30139,81342,15742,35044,60644,61445,22845,768Наименование РСОГалловая кислотаГаллокатехинЭпигаллокатехинЛютеолинКумаринЭпикатехинЭллаговая кислотаКофейная кислотаЭпикатехин галлатРозмариновая кислотаСкополетинХлорогеновая кислотаФеруловая кислотаАпигенинп-кумаровая кислотаКоличество, %АБ0,1280,0220,9800,5821,4690,5690,2070,2260,1430,1640,6690,3430,0730,0100,0100,1380,0590,0130,0130,0310,0312,4412,5830,0030,0610,0170,0640,0040,042Примечание: А - сырье кульбабы осенней, Б - сырье кульбабышершавоволосистойВ траве кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой обнаруженыкумарины: скополетин, умбеллиферон, кумарин; флавоноиды: цинарозид,лютеолин,апигенин;эпикатехин,производныеэпикатехингаллат;дубильныхпроизводныевеществ:галлокатехин,фенолкарбоновыхкислот:хлорогеновая, кофейная, галловая, эллаговая, розмариновая, п-кумаровая,феруловая кислоты.Изтравыкульбабыосеннейикульбабышершавоволосистойпоследовательно были выделены следующие полисахаридные фракции:водорастворимые полисахаридные комплексы 7,60% и 8,99%, пектиновыевещества 14,23% и 10,63%, гемицеллюлозы А 5,03% и 3,17%, гемицеллюлозы Б6,39% и 5,88% соответственно.
Для исследования выделенных полисахаридныхкомплексов проводили их гидролиз раствором кислоты серной 1 М,идентификациюпродуктовгидролиза12проводилиметодомбумажнойхроматографии. Денситометрически после ТСХ-хроматографии гидролизатовна пластинках «Sorbfil П-А-УФ» в системе растворителей: н-бутанол-кислотауксусная-вода очищенная (3:1:1) определили количественное содержаниемоносахаридов. Результаты исследований представлены в таблице 2.Таблица 2 – Содержание моносахаридов в полисахаридных комплексах изтравы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистойИсследуемое сырьеТрава кульбабыТрава кульбабыосеннейшершавоволосистой12,10 ± 0,376,70 ± 0,2514,30 ± 0,568,30 ± 0,249,50 ± 0,351,30 ± 0,040,70 ± 0,031,10 ± 0,041,40 ± 0,052,90 ± 0,092,10 ± 0,081,40 ± 0,063,60 ± 0,114,90 ± 0,151,90 ± 0,073,20 ± 0,112,40 ± 0,074,10 ± 0,120,30 ± 0,011,60 ± 0,0589,20 ± 2,6787,30 ± 3,443,90 ± 0,142,70±0,090,89 ± 0,031,30 ± 0,047,20 ± 0,287,80 ± 0,220,70 ± 0,031,60 ± 0,063,50 ± 0,134,30 ± 0,162,40 ± 0,091,10 ± 0,041,50 ± 0,058,10 ± 0,328,30 ± 0,260,70 ± 0,031,31 ± 0,042,80 ± 0,10Моносахаридный состав, %ВодорастворимыйполисахаридныйкомплексПектиновыевеществаГемицеллюлоза АГемицеллюлоза Барабинозагалактозаглюкозаксилозафруктозарамнозаглюкуроновая кислотагалактуроновая кислотаарабинозагалактозаксилозарамнозагалактуроновая кислотагалактозаарабинозаксилозарамнозаглюкозагалактозаарабинозаксилозарамнозаглюкозаДля качественной характеристики выделенных пектиновых веществпроводиликоличественноетитриметрическимметодом.определениеИсследуемыефункциональныхпектиновыегруппвеществахарактеризуются невысокой (<50%) степенью этерификации.Исследование подлинности и показателей качествасырья «Кульбабы травы»Для определения подлинности сырья кульбабы осенней и кульбабышершавоволосистой проведено макроскопическое исследование и установленыосновные морфологические признаки сырья.13В результате микроскопического анализа было установлено строениестебля, листьев, соцветия.
Стебель пучкового типа строения, покрытыйэпидермисом с устьицами аномоцитного типа (рисунок 1). Эпидермис опушенпростыми многоклеточными тонкостенные волосками, часто со спадающимисястенками(кульбабаветвистымиосенняя)волосками-илимногоклеточными,древовиднымимногорядными,волосками(кульбабашершавоволосистая) (рисунок 2). Вдоль жилки листа отмечено наличиемлечников(рисунокравномерно.4).НижнийУстьицааномоцитногоэпидермислистаопушентипарасполагаютсяпростымичетырех-семиклеточными тонкостенными волосками, стенки клеток которых частоспадаютсяиперекручиваются(рисунок3),иногдавстречаютсяимногоклеточные, многорядные, ветвистые волоски - древовидные волоски(кульбаба шершавоволосистая). Клетки эпидермиса листочков обвертки сбурым содержимым, на верхушке с сосочковидными выростами (рисунок 5).Листочкиобверткиопушеныпростымиволоскамиразличноготипа:многоклеточными тонкостенными со спадающимися стенками (рисунок 6),часто перекрученными; многоклеточными многорядными с заостреннойконечной клеткой и одно- или многорядной верхушкой, встречаются такжеодно-двуклеточные волоскис извилистой кутикулой (кульбаба осенняя) имногоклеточные, многорядные, ветвистые волоски - древовидные волоски(кульбаба шершавоволосистая).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
