Автореферат (1141263), страница 3
Текст из файла (страница 3)
и др., 2010). Согласно технологиисинтеза субстанции РУ 1205, для очистки субстанции в качестве растворителяиспользуется ацетон (III класс токсичности), остаточные количества которого,соответственно, могут присутствовать в образцах субстанции.В исследуемых образцах субстанции РУ 1205 ацетона обнаружено не было.Количественное определение РУ 1205 в субстанции проводили методомкислотно-основного титрования в неводной среде: около 0,15 г препарата (точнаянавеска) растворяли в 2 мл муравьиной кислоты, прибавляли 25 мл уксусного14ангидрида, перемешивали и титровали 0,1 М раствором кислоты хлорной. Конечнуюточку титрования определяли потенциометрически.Содержание РУ 1205 в субстанции составляло от 99,13 до 100,79% приотносительной ошибке определения не более 1%, RSD не превышало 0,8%.Установление сроков годности и норм качества субстанции РУ 1205После хранения в течение 2 лет в естественных условиях в банкахполиэтиленовых с винтовой горловиной с навинчиваемыми крышками качествосубстанции практически не изменилось по всем показателям, кроме потери в массепри высушивании.
Содержание воды в образцах при хранении возрастало и через 2года составило около 12%.Таблица 4Нормы качества субстанции РУ 1205ПОКАЗАТЕЛИОписаниеРастворимостьПодлинностьПрозрачность раствораЦветность растворарНПосторонние примесиПотеря в массе привысушиванииСульфатная золаТяжелые металлыОстаточные органическиерастворителиКоличественноеопределениеУпаковкаМаркировкаХранениеСрок годностиМЕТОДЫНОРМЫВизуальный Почти белый мелкокристаллический порошок,гигроскопичныйГФ ХIIIЛегкорастворимвкислотемуравьинойконцентрированной, мало растворим в воде и вспирте этиловом 95%, практически не растворим вацетонеИКИК-спектр в области от 2000 до 400 см-1 долженспектроско- соответствовать прилагаемому рисункупияУФУФ-спектр в области от 200 до 300 нм имеет дваспектроско- максимума при 242±2 нм и 271±2 нм и двапияминимума при 225±2 и 255±2 нмГФ ХIII0,25% раствор в воде должен быть прозрачным илине превышать эталонный раствор IГФ ХIII0,25% раствор в воде должен быть бесцветнымГФ ХIIIОт 2,8 до 3,2 (0,25% раствор в воде)ВЭЖХСодержание единичной примеси – не более 0,2%;Суммарное содержание примесей – не более 0,35%ГФ ХIIIНе более 15,0%ГФ XIIIНе более 0,1%ГФ XIIIНе более 0,001%ГЖХАцетон – не более 0,5%ГФ XIIIНеводноеОт 99,0 до 101,0% в пересчете на сухое веществотитрованиеВ соответствии с НДВ соответствии с НДВ защищенном от света месте при температуре не выше 25ºС.2 года15ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ТАБЛЕТОК РУ1205, ПОКРЫТЫХ ПЛЕНОЧНОЙ ОБОЛОЧКОЙ, 10 МГИзучаемая лекарственная форма РУ 1205 представляла собой круглыедвояковыпуклые таблетки, покрытые оболочкой, почти белого цвета.
Показатели«Однородность массы» и «Распадаемость» соответствовали требованиям ГФ РФ XIII:отклонения массы не превышали ±7,5%, а распадаемость – 8 минут.Подлинность таблеток РУ 1205 предложено определять методами УФспектроскопиииВЭЖХ.ИдентификациюметодомУФ-спектрофотометриипроводили по совпадению максимумов поглощения раствора рабочего стандартногообразца (РСО) РУ 1205 и извлечения из таблеток.
В области длин волн от 220 до 350нм УФ-спектры серийных образцов таблеток были практически идентичны спектрамсубстанции РУ 1205. Извлечение из плацебо в этой области электромагнитноеизлучение практически не поглощает и идентификации РУ 1205 не мешает.Идентификацию РУ 1205 в таблетках методом ВЭЖХ предложено проводитьодновременно с количественным определением, по совпадению времен удерживанияосновных пиков на хроматограммах испытуемого раствора и раствора РСО.Определение показателя «Посторонние примеси» таблеток РУ 1205 изначальнопроводили методом ВЭЖХ в условиях, аналогичных условиям анализа субстанции.Однако полученные результаты показали, что компоненты плацебо могут мешатьколичественному определению примеси 1, поскольку их пики могут перекрываться.Несмотря на приемлемую правильность методики (вычисленный коэффициентСтьюдента не превышает табличные значения для примесей 1 и 2, и незначительнаясистематическая ошибка δ = 2,52 для примеси 3), при низких концентрациях примеси1 компоненты плацебо все же влияли на результат ее определения: относительнаяошибка определения в концентрации 0,001 мг/мл составила почти 19% (табл.
5).Поскольку было показано, что компоненты плацебо мешают определению в образцахтаблеток РУ 1205 примеси 1, нами была предпринята попытка полностью разделитьпики компонентов плацебо и технологических примесей с применением градиентногорежима элюирования. В результате были разработаны следующие условия:подвижная фаза А – смесь 0,015 М фосфатного буфера с рН 7,1±0,1 и ацетонитрила всоотношении 110:10 (ПФ А); подвижная фаза Б – смесь 0,015 М фосфатногобуферного раствора с рН 7,1±0,1 и ацетонитрила в соотношении 40:80 (ПФ Б), длина16волны детектирования 275 нм, скорость потока подвижной фазы 1 мл/мин, колонкаThermo Scientific Hypersil BDS C18 5 мкм 250 × 4,6 мм, температура колонкикомнатная. Хроматографирование проводили с использованием градиента с 4 минутыанализа от 0% до 100% элюента Б за 7 минут.Примесь 3Примесь 2Примесь 1Таблица 5Результаты определения содержания технологических примесей в модельных смесяхплацебо, РУ 1205 и примесейМетрологичесВзято НайденоОтн.МетрологическиеАбс.кие№ (C1),(в % отошибкахарактеристикиошибкахарактеристикимг/млC1)%(P=95%, n=3)(P=95%, n=9)114,82+0,00014 + 14,82Хср±ΔX = 105,64±19,86%0,00101 102,53+0,00002 + 2,53 S = 8,00; RSD = 7,57; ε = 18,8% Хср =102,08%tвыч = 1,22; tтабл = 4,3099,80-0,00001- 0,20ΔX = 4,24%105,94+0,00011 + 5,94Хср±ΔX =101,92±8,63%S = 5,39;S=3,48;RSD=3,41;ε=8,5%0,00202 100,15 +0,000003 + 0,15RSD = 5,28%t=0,95;t=4,30ε = 4,15%вычтабл99,69-0,00001- 0,31tвыч = 1,1698,02-0,00010- 1,98Хср±ΔX =98,59±3,27%tтабл = 2,360,0050597,65-0,00012- 2,35 S = 1,32; RSD = 1,34; ε = 8,8%tвыч = 1,85; tтабл = 4,30100,11 +0,000002 + 0,11108,82+0,00008 + 8,82Хср±ΔX=103,74±12,23%0,00102 103,45+0,00003 + 3,45 S = 4,93; RSD = 4,75; ε = 11,8% Хср =100,63%ΔX = 2,91%tвыч = 1,31;tтабл = 4,3098,96-0,00002- 1,04S = 3,70;101,96+0,00003 + 1,96Хср±ΔX =99,59±5,83%RSD = 3,67%0,0020499,58-0,00001- 0,42 S = 2,35; RSD = 2,35; ε = 5,9%ε = 2,89%tвыч = 0,30;tтабл = 4,3097,25-0,00006- 2,75tвыч = 0,5197,06-0,00015- 2,94Хср±ΔX =98,56±3,77%tтабл = 2,3698,52-0,00008- 1,48 S = 1,52; RSD = 1,54; ε = 3,8%0,00510tвыч = 1,64; tтабл = 4,30100,10 +0,000005 + 0,1092,38-0,00009- 7,62Хср±ΔX =95,79±7,69%Хср = 97,48%0,0010596,54-0,00004- 3,46 S = 3,10; RSD = 3,23; ε = 8,0%ΔX = 1,83%tвыч = 2,35;tтабл = 4,3098,45-0,00002- 1,55S = 2,32;97,60-0,00005- 2,40Хср±ΔX =99,19±3,45%RSD = 2,38%S = 1,39; RSD = 1,40; ε = 3,50,0020999,80-0,00001- 0,20ε = 1,87%tвыч = 1,00; tтабл = 4,30100,18 +0,000002 + 0,18tвыч = 3,2596,18-0,00020- 3,82Хср±ΔX =97,46±2,83%tтабл = 2,360,0052397,85-0,00012- 2,15 S = 1,14; RSD = 1,16; ε = 2,9%δ = 2,52tвыч = 3,85; tтабл = 4,3098,37-0,00009- 1,63ВуказанныхусловияхпроисходилополноеразделениеРУ1205итехнологических примесей, а также компонентов плацебо (рис.
4).Линейная зависимость площади пика от концентрации РУ 1205 в условияхградиента была подтверждена в пределах интервала от 0,001 до 0,1 мг/мл, примесей 1,2 и 3 – от 0,005 до 0,06 мг/мл, коэффициенты корреляции более 0,998.17Рис. 4. Типичная хроматограмма испытуемого раствора модельной смеситехнологических примесей и РУ 1205, где 1-4 пики плацебо, 5, 6, 7 – пики примесей 1, 2 и 3(концентрация каждого соединения 0,01 мг/мл), 8 – пик РУ 1205 (концентрация 1 мг/мл)Таблица 6Параметры разделения, пределы обнаружения и количественного определения РУ 1205 итехнологических примесейСоединеВремяОтн. времяЧислоФакторСтепеньПО,ПКО,ниеудерживан удерживан теоретиассиметразделениямкгмкгия, миния, tотнческихрии пика,соседнихтарелок, NQпиков, RsРУ 1205 15,9 ± 0,021,00277021,160,002 0,0066Примесь 1 9,6 ± 0,02 0,60 ± 0,02127751,24,0 (1-2)0,010 0,0330Примесь 2 11,8 ± 0,02 0,74 ± 0,02193021,15,0 (2-3)0,010 0,0330Примесь 3 13,6 ± 0,02 0,85 ± 0,04263391,14,0 (3-4)0,014 0,0462*ПО – предел обнаружения, ПКО – предел количественного определенияОценка правильности и сходимости методики была проведена на модельныхсмесях технологических примесей иплацебо с применением поправочныхкоэффициентов (1,031 для примеси 1; 2,248 для примеси 2 и 2,426 для примеси 3).Ниже приведены результаты определения содержания технологических примесей вмодельных смесях (табл.
7).Доверительный диапазон среднего значения для примесей 1 и 2 включаетзначение 100%, значения вычисленного коэффициента Стьюдента (tвыч) непревышают табличные (tтабл), полученные результаты не отягощены систематическойошибкой, правильность определения примесей 1 и 2 удовлетворительна. Присутствиесистематической ошибки (δ) при определении примеси 3, по-видимому, объясняетсяее неполным извлечением из модельной смеси с плацебо. Однако величина этойошибки невелика и не превышает 3,5%.Значения коэффициента вариации (RSD), для всех примесей не превышают 5%,сходимость методики приемлема.18Таблица 7Открываемость технологических примесей в модельных смесяхПримесь 1Примесь 2Примесь 3Взято (C1),НайденоВзято (C1),НайденоВзято (C1),Найденомг/мл(в % от C1)мг/мл(в % от C1)мг/мл(в % от C1)100,99102,9495,910,01500101,000,0149099,000,0150093,87100,99104,998,9795,0095,9793,460,0100096,530,0099595,000,0100096,4897,00102,0097,48100,66102,3398,320,00505102,660,00490100,000,0051096,97104,33103,3398,32Метрологические характеристики (P=95%, n=9)Хср±ΔX = 99,91±2,42 (%)Хср±ΔX = 100,61±2,67 (%)Хср±ΔX = 96,64±1,47 (%)S = 3,07; RSD = 3,07%S = 3,39; RSD = 3,37%S = 1,94; RSD = 2,00%ε = 2,42%ε = 2,60%ε = 1,52%tвыч = 0,09; tтабл = 2,36tвыч = 0,54, tтабл = 2,36tвыч = 5,20, tтабл = 2,36; δ = 3,36Оценкупригодностихроматографическойсистемыпроводилипоотносительному стандартному отклонению результатов измерений площадей пика РУ1205 (RSD, не более 2%), числу теоретических тарелок (N, не менее 25000),коэффициенту ассиметрии пика РУ 1205 (Q, не более 1,2), разрешению примеси 1 ипика РУ 1205 в растворе для проверки пригодности хроматографической системы(Rs1, 26,6 ± 0,2) и разрешению примеси 3 и пика РУ 1205 (Rs3, 12,0 ± 0,3).Сприменениемразработанныхусловийбылоопределеносодержаниепосторонних примесей в серийных образцах таблеток РУ 1205 (табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
