Автореферат (1141263), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Результаты проведенного исследованиясоответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2 и 3паспорта фармацевтическая химия, фармакогнозия.Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтическойнауки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с научным планомФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» в рамках комплексной темыисследований: «Изучение механизмов эндо- и экзогенной регуляции функцийцентральнойнервнойнейропсихотропныхсистемы.средств»Разработка(номерновыхоригинальныхгосударственнойрегистрации01.2.006.06601).Объем и структура диссертации.
Работа изложена на 152 страницахмашинописного текста, содержит 32 таблицы, 43 рисунка и приложение.Диссертационнаясокращений,работавведения,исследований»,двухсостоитобзораглавизсодержания,литературы,описанияглавыспискаиспользуемых«Объектыэкспериментальныхиметодыисследований,библиографии. Список цитированной литературы включает 122 источника, в томчисле 57 на английском языке.Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них3 в журналах, входящих в перечень ВАК РФ рецензируемых научных изданий, вкоторых должны быть опубликованы основные научные результаты диссертациина соискание ученой степени кандидата наук. Получен патент РФ на изобретение№2545861 «Фармацевтическая композиция в твердой форме с анальгетическойактивностью».СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫОбъекты исследованияОбъектами исследований являлись серийные образцы субстанции новогоотечественного κ-опиоидного анальгетика РУ 1205, исходное вещество - 2аминобензимидазол (примесь 1) и промежуточные продукты его синтеза – 2-амино-1морфолиноэтилбензимидазол (примесь 2) и бромид 2-амино-1-морфолиноэтил-3-(4фторфенацил)бензимидазолия(примесь3),атакжетвердаядозированнаялекарственная форма РУ 1205 – таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 10 мг.8Методы исследованияВ ходе работы использовали следующие методы анализа: ИК-, УФ-, ПМРспектроскопию, титрование в водной и неводной средах, ВЭЖХ в изократическом иградиентном режимах, ГЖХ.Оборудование:УФ-спектрофотометр UV-1700 (Shimadzu, Япония); однолучевой ИК-Фурьеспектрометр Vertex 70 (Bruker, ФРГ) с валидированным программным обеспечением(ПО) «OPUS-NT»; ПМР-спектры регистрировали на спектрометре AC-250 (Bruker,ФРГ).
Микрорскопический анализ субстанции проведен с помощью микроскопаEclipse 50i (Nikon, Япония). ГЖХ анализ проведен на приборе Chrom-5(Лабораторные приборы, ЧССР) с пламенно-ионизационным детектором (ПИД) и ПО«Экохром» (ООО Прибор, Россия). Анализ методом ВЭЖХ проведен на жидкостномхроматографе Beckman System Gold HPLC (Beckman, США) с градиентным насосом(модель 127) и спектрофотометрическим детектором (модель 166); ПО – пакет«Мультихром 1.5». Тест «Растворение» проведен на приборе «Лопастная мешалка»PT-DT 70 (Pharmatest, Германия).ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ СУБСТАНЦИИ РУ1205FNNN2HClOH2CCH2NРУ 1205дигидрохлорид 2-(4-фторфенил)-9морфолиноэтилимидазо[1,2б]бензимидазолаС21Н23Cl2FN4OМ.м.
437,34Физико-химические свойства и фармакопейные показатели качествасубстанции РУ 1205По внешнему виду все образцы субстанций представляли собой почти белыемелкокристаллические порошки. Растворимость субстанции в воде составила от 1:180до 1:210 (мало растворим), в этаноле – от 1:370 до 1:800 (мало растворим), в кислотемуравьиной – от 1:4 до 1:6 (легко растворим), в ацетоне, диметилформамиде, гексанеи хлороформе менее 1:10000 для всех образцов (практически нерастворим). В смесивода – этанол (1:1) – от 1:77 до 1:110.Показатели «Прозрачность», «Цветность» и «рН» определяли для 0,25%растворов субстанции в воде.
Растворы всех образцов субстанции РУ 1205 были9бесцветные и выдерживали сравнение с эталоном мутности I. Значения рН 5%растворов образцов лежали в пределах интервала от 2,85 до 3,15.Определение потери в массе при высушивании проводили при 105 и 130 °С.Полное удаление воды из субстанции происходило только при 130 оС (потеря в массесоставила от 5,5 до 9,6%), что подтверждалось данными определения воды по К.Фишеру (от 4,7 до 7,7%).
Определение гигроскопичности субстанции РУ 1205 вкамере с 90% влажностью показало, что субстанция гигроскопична и можетпоглощать до 15% влаги от собственного веса, причем прирост массы за счетпоглощения воды достигал указанных значений уже через трое суток и практическине изменялся до конца эксперимента (в течение 6 месяцев).Спектральные характеристики субстанции РУ 1205В УФ-спектрах растворов РУ 1205 в воде (0,01 мг/мл) в диапазоне длин волн от200 до 300 нм присутствовали два максимума поглощения при 242±2 нм и 271±2 нм идва минимума при 225±2 и 255±2 нм.ИК-спектры субстанции РУ 1205 были получены в дисках калия бромида иметодом ИК-НПВО.
В диапазоне от 400 до 3000 см-1 спектры всех образцовсубстанции имели характеристические полосы при: 1620, 1602 и 1508 см-1, (С=С связиароматического кольца), 1660 см-1 (валентные колебания С=N гетероциклическогофрагмента), 2434-2600 см-1 (колебания связи N+H фрагментов морфолина иимидазобензимидазола) и 1237 см-1, (монофторзамещенное ароматическое кольцо(ArC-F).В ИК-спектрах в дисках KBr даже после высушивания субстанции допостоянной массы наблюдалась выраженная полоса поглощения адсорбционной воды(при 3430 см-1), перекрывавшая характеристические полосы поглощения РУ 1205,что, вероятно, объяснялось быстрым поглощением атмосферной влаги в процессеприготовления пробы. На ИК-спектрах НПВО высушенной до постоянной массысубстанции РУ 1205 эта полоса поглощения была значительно менее интенсивной(рис.
1). Поэтому в качестве метода подтверждения подлинности РУ 1205 всубстанции рекомендовано использовать метод ИК-НПВО с предварительнымвысушиванием субстанции до постоянной массы.В ПМР-спектре РУ 1205, снятом в ДМСО-d6 (концентрация 2%), δ, м.д.наблюдаются следующие сигналы: 3,49 (4Н, м., СН2 – N – CH2 -); 3,72 (2Н, т., СН2);103,90 (4Н, м., -СН2 – О – СН2-); 4,99 (2Н, т., СН2); 7,36 (2Н, м., ArF); 7,42 (1Н, т., ArH);7,52 (1Н, т., ArH); 7,95 (1H, д.д., ArH); 7,97 (2Н, м., ArF); 8,01 (1Н, д.д., ArH); 8,53 (1Н,с., Ar3-H).1.а1.бРис.
1 ИК-спектры субстанции РУ 1205, снятые в дисках KBr (1.а) и методом ИК-НПВО (1.б)Определение посторонних примесей в субстанции РУ 1205Определение посторонних примесей в субстанции РУ 1205 проведено методомВЭЖХ. Добиться оптимального разделения РУ 1205 и его технологических примесей(табл.1) удалось в следующих условиях: подвижная фаза – смесь ацетонитрила,метанола и 0,015М раствора калия фосфорнокислого двузамещенного трехводного(pH 7,4) (100:100:150, о/о/о); стальная колонка 150 х 4,6 мм BDS Hypersil C18, 5 мкм(Thermo scientific), скорость потока подвижной фазы – 1,0 мл/мин; температураколонки комнатная; режим элюирования изократический. В указанных вышеусловиях происходило полное разделение технологических примесей и РУ 1205 (рис.2).11Таблица 1Технологические примеси РУ 1205OH2C CNNNH2NH2NNHH2C2-аминобензимидазол(примесь 1)16.
3 mVFNNH2H2C NBrNO2-амино-1-морфолиноэтилбензимидазол (примесь 2)H2CH2C NOбромид 2-амино-1-морфолиноэтил-3-(4-фторфенацил)бензимидазолия (примесь 3)4561273ch11234567891011121314минРис. 2. Хроматограмма модельного раствора РУ 1205 и вероятных технологическихпримесей (4 – примесь 1, 5 – примесь 2, 6 – примесь 3, 7 – РУ 1205, концентрация всехсоединений 0,05 мг/мл)В качестве аналитической была выбрана длина волны 275 нм.
При этой длиневолны наблюдалось совпадение полос поглощения УФ-спектров растворов всехисследуемых соединений в подвижной фазе.Линейная зависимость площади пика от концентрации РУ 1205 при 275 нм былаподтверждена в пределах интервала от 0,001 до 0,05 мг/мл, примеси 3 – от 0,0002 до0,01, примеси 2 – от 0,0004 до 0,05 мг/мл, примеси 1 – от 0,0003 до 0,04 мг/мл,коэффициенты корреляции составляли не менее 0,999.Отклик детектора для РУ 1205 и свидетелей технологических примесейотличался, поэтому расчет содержания этих примесей в субстанции было решенопроводить с применением поправочных коэффициентов, рассчитанных на модельныхрастворах РУ 1205 и технологических примесей.
Значения их составили – 1,39, 2,93 и3,04 для примесей 1, 2 и 3 соответственно.12Таблица 2Параметры разделения и пределы обнаружения и количественногоопределения РУ 1205 и свидетелей технологических примесей№п/п1234СоединениеОтносительноевремяудерживания,tотнРУ 12051,00Примесь 10,16 ± 0,01Примесь 20,18 ± 0,01Примесь 30,25 ± 0,02Числотеоретических тарелок,N7424 ± 12387186 ± 13452445 ± 1504042 ± 383ФакторРазрешениеасимметсоседнихрии пика,пиков, RsQ1,3 ± 0,011,1 ± 0,01 1,6 ± 0,1 (1-2)1,1 ± 0,01 2,0 ± 0,1(2-3)1,2 ± 0,01 12,46 ± 0,3(3-4)ПО*,мкгПКО*,мкг0,00080,00160,00200,00120,00260,00530,00660,0040*ПО – предел обнаружения, ПКО – предел количественного определенияДля определения пригодности хроматографической системы готовили растворстандартного образца РУ 1205 и 2-аминобензимидазола (примеси 1) (Aldrich Cat.№934-32-7) в подвижной фазе с концентрацией каждого соединения 0,01 мг/мл.Пригодность хроматографической системы определяли по величине относительногостандартного отклонения (RSD) площадей пиков РУ 1205 (не более 1%); числутеоретических тарелок (N, не менее 7000); фактору асимметрии (Q, не более 1,5) иразрешению пиков примеси 1 и РУ 1205 (Rs, 15,0 ± 0,50).Специфичность методики подтверждается разделением РУ 1205 и еготехнологических примесей в модельных смесях (рис 2), а также разделением РУ 1205и примесей, образовавшихся в испытуемых растворах под действием солнечногосвета в течение 8 суток (рис.
3).5.1 8 mV6212047101381239111419151626232217 18242527ch1246810121416182022242628303234363840424446минРис. 3. Хроматограмма раствора РУ 1205, подвергшегося действию солнечного света втечение 8 суток (время удерживания РУ 1205 около 13 мин)Правильность и прецизионность методики определена на модельных смесяхРУ 1205 и технологических примесей (табл. 3). Отклонение среднего результатаизмерения от истинного значения для всех примесей не превышало 3,1%.Коэффициент вариации (RSD) для всех примесей не превышал 2% и фактически13составлял менее 1,6%.
Интервал Xср ± ΔХср включал 100%. Проверка результатов спомощью t-критерия не выявила присутствие систематической ошибки: значениявычисленного критерия Стьюдента не превышали табличных значений.По разработанной методике был проведен анализ серийных образцовсубстанции РУ 1205. В исследуемых образцах субстанции было найдено до 15посторонних примесей, содержание лишь одной из которых в отдельных образцахнезначительно превышало 0,1% (не более 0,12%, неидентифицированная примесь сотносительным временем удерживания около 1,34). Суммарное содержание примесейсоставляло менее 0,3%.Таблица 3Результаты определения содержания технологических примесей РУ 1205 в модельныхсмесях№ЗаданнаяОбнаружено Обнаружено примесиМетрологическиеп/п концентрацияпримеси,(в % от заданнойхарактеристики, (Р=95%, n=3)примеси, мг/млмг/млконцентрации)Примесь 110,010200,0101899,80Хср = 102,02S = 1,57ΔХср = 3,90ε = 3,47%20,005100,00517101,37RSD = 1,54% tвыч = 2,23tтабл = 4,30tвыч < tтабл30,002040,00210102,94Примесь 210,010100,01017100,69Хср = 101,32S = 0,56ΔХср = 1,39ε = 1,37%20,005050,00514101,78RSD = 0,55%tвыч = 4,08tтабл = 4,30tвыч < tтабл30,002020,00205101,49Примесь 310,010450,01051100,57Хср = 102,00S = 1,28ΔХср = 3,18ε = 3,12%20,005230,00539103,04RSD = 1,25%tвыч = 2,7130,002090,00214102,39tтабл = 4,30tвыч < tтаблОпределение остаточных органических растворителей в субстанции РУ 1205проведено методом ГЖХ в условиях, разработанных ранее в аналитической группеопытно-технологического отдела (Коночкина М.Е.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
