Автореферат (1141129), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Гистопантомограмма и мультиканальнаягистопантомограмма с люминисцентной микроскопии х100 теменнойкости крыс с критическим костным дефектом спустя 28 дней послеоперации. А1,А2 - Матрикс ПОБ/АЛГ2 группа с гибридный матрикс из поли-3-оксибутирата, гидроксиапатита иальгината. Относительный объем восстановляемой костной ткани в дефектетеменной кости составил в среднем 36% (медиана), а соединительная ткань всвою очередь 64 % (медиана) (рис.
10Б1, 5Б2).18Б1.Б2.Рисунок 10. Гистопантомограмма и мультиканальнаягистопантомограмма с люминисцентной микроскопии х100 теменнойкости крыс с критическим костным дефектом спустя 28 дней послеоперации. Б1, Б2 – Матиркс ПОБ/ГА/АЛГ3 группа с гибридный матрикс из поли-3-оксибутирата, гидроксиапатита иальгината с добавлением в состав матрикса мультипотентных стволовых клетокобеспечивает до 92% закрытие критического костного дефекта свода черепа укрысы с новообразованной костной ткани (рис 10В1, В2).19В1.В2.Рисунок 10. Гистопантомограмма и мультиканальнаягистопантомограмма с люминисцентной микроскопии х100 теменнойкости крыс с критическим костным дефектом спустя 28 дней послеоперации.
В1,В2. – Матрикс ПОБ/ГА/АЛГ/МСКНа рисунках № 11, 12 можно детально можно проследить площадь искорость образования костной ткани на основе исследованных скаффолдов.Площадь прироста новообразованного костногорегенерата , см214 сутки15-21 сутки22-28 сутки[ЗНАЧЕНИЕ]±0,005[ЗНАЧЕНИЕ]±0,005[ЗНАЧЕНИЕ]±0,005[ЗНАЧЕНИЕ]±0,0025 [ЗНАЧЕНИЕ]±0,0009[ЗНАЧЕНИЕ]±0,003[ЗНАЧЕНИЕ]±0,0012[ЗНАЧЕНИЕ]±0,0034 [ЗНАЧЕНИЕ]±0,001КИ-ПОБКИ-ПОБ-ГА-АЛГ.МСК-ТИКРисунок 11. Площадь прироста новообразованного костного регенерата , см220Скорость прироста костной ткани , мкм/сут700600[ЗНАЧЕНИЕ]±27500[ЗНАЧЕНИЕ]±14,7400200100[ЗНАЧЕНИЕ]±19,5[ЗНАЧЕНИЕ]±15,7355±22300[ЗНАЧЕНИЕ]±17[ЗНАЧЕНИЕ]±12[ЗНАЧЕНИЕ]±10 [ЗНАЧЕНИЕ]±210КИ-ПОБКИ-ПОБ-ГА-Алг.14 сутки15-21 суткиМСК-ТИК22-28 суткиРисунок 12.
Скорость прироста костной ткани , мкм/сутПо сравнению с другими группами в 3-ой группе происходит какувеличение площади костного регенерата, образовавшегося за первые 14 суток(МСК-ТИК Md.ArD=0,065±0,005 см2), так и увеличение скорости приростакостной ткани (МСК-ТИК MFR0-14=388±19,5 мкм/сут). Однако в последующем (с15-21 сутки), скорость образования кости замедляется (МСК-ТИК MFR1521=333,3±15,7),чтовыражаетсявумереннойстабилизацииплощадиновообразованной костной ткани на уровне 0,044±0,005 см2 (МСК-ТИК Md.ArT).В последующем (с 22-28 день) скорость образования костной ткани послетрансплантации ТИК увеличивается (МСК-ТИК MFR22-28=483±14,7 мкм/сутки),что приводит образованию значительного массива костной ткнаи – площадь,занимаемая новообразованной костной тканью в этот период (22-28 день)составляла 0,082±0,005 см2.Проводясравнительныйанализмеждугруппами,выявлено,что,21трансплантация тканеинженерной конструкции (ТИК), содержащая клеточнуюкультуру проявляла выраженную стимуляцию репаративного остогенеза сувеличениемпервичнойплощади,занимаемойкостнымрегенератомнаповерхности твердой мозговой оболочки.Экспериментсоответствовал«Правилампроведенияработсиспользованием экспериментальных животных» в соответствии с приказами МЗСССР № 755 от 12.08.1977 г.
и № 701 от 24.07.1978 г. и «Правилами лабораторнойпрактики в Российской Федерации» от 2003 г.Такимобразом,терапевтическаябыласистеманаразработанаосновеиполученаскаффолдаиззаполненная альгинатным гидрогелем, содержащим МСК.тканеинженернаякомпозитаПОБ/ГА,22ВЫВОДЫ1. На основании анализа специальной литературы, нами был выбранполимер поли-3-оксибутират (ПОБ) в качестве основы для простых и сложныхкостных матриксов, в том числе для заселения их мезенхимальными стволовымиклетками.
ПОБ и его метаболиты являются нетоксичными, биосовместимыми.2. Нами была разработана комплексная методика получения гибридныхполимерных 3D-матриксов на основе ПОБ, заселенные МСК заданной формы имикроструктуры, включающая методы 3D-печати, двойного выщелачивания исоздания гибридных полимерных конструкций.3. Метод 3D-печати позволяет создавать форму для изготовления шаблоновдля заполнения черепных дефектов не менее 5 мм в диаметре.4. Метод двойного выщелачивания применим для изготовления матриксов,которые могут использоваться при заполнении костных дефектов произвольнойформы.5. Полученные матриксы представляют собой гибридную конструкцию изразличных биосовместимых полимеров – поли-3-оксибутирата и альгината, вкоторой альгинат является гидрогелем-наполнителем твердого высокопористогоматрикса из ПОБ.6.
Разработанные нами матриксы на основе ПОБ полностью резорбируютсяпри подкожной имплантации без повреждения окружающих их мягких тканей, неотграничиваются фиброзной капсулой, подвергаются макрофагальной резорбциисо скоростью 1 мм в неделю.7. Основываясь на данных исследования гистологических срезов образцовкостной ткани при помощи флуоресцентной микроскопии с раздельнымокрашиванием флюорохромами было показано, что гибридный матрикс из поли3-оксибутирата и альгината натрия, обладает ограничительной функцией,обеспечивая условия для нормальной регенерации плоских костей черепа у крыс.Добавление в состав матрикса мультипотентных стволовых клеток обеспечиваетдо 92% закрытие критического костного дефекта свода черепа у крысы.23ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИ1.
Для изучения и оценки скорости остеогенеза при восстановлениякритического костного дефекта черепа крыс следует применят флюоресцентныеметки (доксициклин-тетрациклин-ализариновый красный), которые необходимовводить в сроки 7-3-4-3-4-3-4 (три дня введения чередовались с четырехдневнымиперерывами).
Это позволит при гистологическом исследованием визуализироватьзоны роста и скорости формирования новообразованной костной ткани.2. Для изготовления костных имплантатов сложной геометрической формыиз ПОБ необходимо: изготовить компьютерную 3D модель самого имплантата и3D модель формы для отливки имплантатов при помощи программногообеспечения Horos Project-Free DICOM Medical Image Viewer. На 3D принтеренапечатать 3D пресс-форму для отливки самого имплантата. Для добавленияостеоиндуктивных свойств имплантату из ПОБ следует растворить ПОБ втрихлорметане и диспергировать его совместно с ГА в соотношении ГА к ПОБ1:10.3. Для придания остеогенных свойств имплантата из ПОБ следует заселятьего МСК в количестве (200 000 клеток) на 1 мл объема.4.
Для фиксации клеток МСК на скаффолды из ПОБ рекомендованоиспользовать Альгинат натрия в виде удерживающего и препятствующегоразмывания клеток тканевой жидкостью.24СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ1.Разработка и доклинические исследования ортотопических костныхимплантатов на основе гибридной конструкции из поли-3-оксибутирата иальгината натрия / А.А. Мураев, А.П. Бонарцев, Ю.В. Гажва, В.М. Рябова, А.В.Волков, И.И. Жаркова, И.А. Стамболиев // Современные технологии вмедицине. – 2016. – Т. 8, № 4. – С. 42-50.2.СтамболиевИ.А.Разработкасинтетическогокостезамезащающегоматериала, содержащего мезенхимальные стволовые клетки / И.А.
Стамболиев,А.А. Мураев, Е.С. Кузнецова // Science4health 2016. Клинические и теоретическиеаспекты современной медицины : материалы VII Международ. науч. конф. –Москва : РУДН, 2016. – С. 252.3.Стамболиев И.А. Применения сложных биокомпозционных матриксов длянаправленной регенерации костной ткани / И.А.
Стамболиев, А.П. Бонарцев //Неделя Науки-2017 : материалы Всерос. молодежного форума с международ.участием. – Москва, 2017. – С. 344-345.4.Матриксы и микросферы из поли-3-оксибутирата для инженерии костнойткани [Электронный ресурс] / Д.В. Чеснокова, И.И. Жаркова, А.В. Волков, И.А.Стамболиев, А.А. Мураев, А.П. Бонарцев // Биотехнология: состояние иперспективы развития. Науки о жизни : материалы Международ. форума, 23-25мая. – Москва, 2018. – URL: https://istina.msu.ru/conferences/92516617/5.СовременныеподходыСтамболиев, Ю.В. Гажва,инженериикостнойткани[Обзор]/И.А.С.Г.
Ивашкевич, В.М. Рябова // Российскийстоматологический журнал. – 2018. – Т. 22, № 2. – С. 111-117.6.Разработкагибриднойтканеинженернойконструкцииизтерапевтическойполи-3-оксибутиратасистемыснаосновегидроксиапатитом,заполненной альгинатным гидрогелем, содержащим мезенхимальные стволовыеклетки / И.А. Стамболиев, А.П. Бонарцев, И.И. Жаркова, Е.А.
Акулина, Ю.В.Гажва, Г.А. Бонарцева, А.А. Мураев // Здоровье и образование в XXI веке. –2018. – Т. 20, № 9. – С. 70-79..
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
