Диссертация (1140625), страница 5
Текст из файла (страница 5)
В польскомисследовании выявление патогена из шейных и перитонеальных образцовкоррелировало с 5-кратным увеличением риска бесплодия [132]. Несмотря нанеоднородность данных в исследованиях по бесплодию у женщин, метаанализ(2015) показал примерно 2-кратное статистически значимое увеличение риска[152].Способность M. genitalium прикрепляться к головке, средней части и кхвосту сперматозоида человека in vitro в большем проценте случаев нарушает ихдвижение.Частьсперматозоидов,которыеещедвигаются,являются26переносчикамимикроорганизма, что припопаданиив верхние отделыурогенитального тракта может привести к повреждению маточных труб, ихокклюзии и последующему бесплодию [147].Исследование по изучению влияния M. genitalium-инфекции на слизистуюоболочку фаллопиевых труб продемонстрировало повреждение ресничатогоэпителия.
При электронной микроскопии было показано набухание ресничек вразных ее частях, уменьшение их в размере и количестве [103].Нарушение структуры ресничатого эпителия в маточных трубах можетприводить к внематочной беременности. Эта взаимосвязь хорошо прослеживаетсяв исследовании A.M. Ashshi, где среди 84 госпитализированных саудовскихженщинсэктопическимибеременностями,которымбылапроведенасальпингэктомия, и 51 женщиной, подвергшейся гистерэктомии или перевязкетруб, у 20,2% была идентифицирована M. genitalium [99].Количестводанных,преждевременнымиродамидоказывающихисвязьспонтаннымиM.абортами,genitaliumсограничено,араспространенность возбудителя у беременных достаточно низкая.
Рядом авторовсообщается о повышении риска преждевременных родов на 30% среди женщин снизким уровнем риска ИППП и 2,5-кратном увеличении риска среди перуанскихженщин со спонтанными абортами [25, 100, 136]. В. Е. Радзинским с соавт. (2014)выявлено,чтонеблагоприятнымипредиктораминедонашиванияявляетсясочетание бактериального вагиноза с персистенцией Ureaplasma urealyticum,Mycoplasma hominis и Mycoplasma genitalium в цервикальном канале беременных.Также в данном исследовании отмечено, что проведение антибактериальноголечения и нормализация микробиоценоза половых путей, не привели кдостоверному снижению числа преждевременных родов [61], что свидетельствуето неэффективности в ряде случаев существующих схем терапии смешанныхинфекций.Mycoplasma genitalium обнаруживается в образцах хориальной и плодовойтканей при ранних спонтанных выкидышах, в пробах аспирационных биопсий уженщин с привычным невынашиванием беременности, в образцах тканей при27добровольных медицинских абортах, в пробах плацент женщин, беременностькоторых завершилась преждевременными родами.
Mycoplasma genitalium такжевыявлялась в аутопсийном материале (взяты образцы плаценты и внутреннихорганов) детей, которые умерли в раннем неонатальном и постнатальномпериодах. Эти данные свидетельствуют о роли Mycoplasma genitalium вформировании осложнений течения беременности и ее исходов [50].1.6. Методы лабораторной диагностики инфекций урогенитальноготракта, ассоциированных с Mycoplasma genitaliumАсимптомное течение, полиморфизм клинической картины, отсутствиепатогномоничныхсимптомовзаболеванийнижнихотделовУГТ,ассоциированных с M. genitalium, создает трудности диагностики даннойинфекции.Главенствующаярольввыявлениипатогенапринадлежитлабораторным методам.
Диагностика полностью определяется особенностями M.genitalium.В связи с отсутствием четких морфологических характеристик иполиморфизмом,присущихидентификациивозбудителяобнаружениевозбудителявсемусемействумикроскопическивобразцахсмикоплазм,непомощьювозможностьприменяется.Прямоеразличныхметодовокрашивания практически невозможно из-за небольшого размера и отсутствияклеточной стенки [194].Впервые патоген был выделен в культуре, основу среды составлял бульон,дополненнойглютамином,дрожжевымэкстрактом,бычьейсывороткой,пенициллином и фенольным красным для индикации. Свидетельством ростамикоплазмы было увеличение мутности среды и изменение цвета индикатора открасного до желтого из-за ферментации глюкозы микроорганизмом. Ростпроисходил очень медленно в течение 50 дней. M. genitalium является труднокультивируемой бактерией.
На сегодняшний день значительно усовершенствованбактериологический метод, в частности, за счет использования клеточныхкультур, однако, выделение и размножение патогена занимает от несколькихнедель до 6 месяцев, что в клинической практике не применимо [146].28Серологическая диагностика микоплазмы достаточно затруднительна, вопервых, по причине фенотипической вариабельности липополисахаридныхкомплексов на поверхности мембраны, во-вторых, M. genitalium имеет антигенноесходство с М.
рneumoniae, что может приводить к появлению перекрестныхреакций и, соответственно, ложным результатам. За последние годы методывыявления антител к патогену более совершенствованы и показывают своюинформативность, но до настоящего времени ни один из серологических тестовдля M.
genitalium не был стандартизирован [68, 73, 76].В ранних исследованиях было отмечено, что количество M. genitalium вотделяемом урогенитального тракта может быть достаточно низким, поэтому сцелью обеспечения адекватной диагностики необходимы высокочувствительныетесты. В настоящее время таким тестом является молекулярно-биологическийметод амплификации нуклеиновых кислот (МАНК). Наиболее распространеннымиз всех МАНК на сегодняшний день является ПЦР, которая позволяет с высокойдиагностической чувствительностью и специфичностью выявлять возбудителя.Широкое внедрение МАНК в клиническую практику увеличило возможностиобследования больных с симптомами воспалительных заболеваний мочеполовойсистемы, проводения скрининга бессимптомных пациентов и беременных [6, 17,43, 56, 75, 175, 177].В первом ПЦР-тесте в качестве мишени использовались фрагменты генабелка-адгезина MgPa, играющего важную роль в патогенезе инфекции.НаблюдениязагенетическойизменчивостьюM.genitaliumпривеликнеобходимости альтернативных ПЦР-анализов, в связи с чем стал применятьсяфрагмент гена 16S рРНК.
Последний имеет высокую степень гомологии с такимже геном М. рneumoniae. В свою очередь, появление антибитиотикорезистентныхштаммов M. genitalium привело к разработке и применению методов ПЦР сэлектрофоретическимформатомдетекции,направленныхнаопределениеустойчивости возбудителя к группам антибиотиков [32]. Данный молекулярныйметод рекомендован к применению в Европейском руководстве по ведению29пациентов с M. genitalium-инфекцией [141], однако, его недостатками являетсявысокая стоимость и отсутствие валидации в нашей стране.Одним из последних достижений является ПЦР в режиме «реальноговремени» (ПЦР-РВ). Указанная технология дает возможность регистрироватьнакопление специфического продукта амплификации непосредственно в процессереакции, в режиме реального времени, позволяя существенно сократить времяанализа и риск контаминации.
Вместе с тем, дает возможность количественноопределять генетический материал не только патогенных бактерий, но итруднокультивируемых анаэробных УПМ, что важно с клинической точки зрения[11, 60, 194].Альтернативным молекулярно-биологическим методом для обнаружения М.genitaliumявляетсяметодтранкрипционно-опосредованнойамплификации(NASBA, Nucleic Acid Sequence-Based Amplification) [81]. В качестве мишени вэтом тесте служат многокопийные молекулы рибосомной РНК. Последниеприсутствуют в живых клетках бактерий или простейших в количестве донескольких десятков тысяч, что дает возможность обнаружения патогена дажепри его небольшой концентрации, обеспечивая высокую специфичность. Так какРНК является менее стабильным генетическим материалом по сравнению с ДНК,более раннее ее разрушение может служить контролем проведенного лечения иэлиминации микроорганизма [16, 155, 176].Помимо качественного и высокочувствительного метода диагностики важенвыборлокусазабораматериала,которыйоказалсябымаксимальноинформативным.
У женщин для выявления M. genitalium посредством МАНКиспользуются различные биологические жидкости: первая порция утренней мочи,соскоб из уретры, слизистой оболочки влагалища, цервикального канала, ампулыпрямой кишки, биопсийный материал эндометрия, что важно с практическойточки зрения.В работах отечественных и зарубежных авторов отмечаются различия почастоте случаевобнаруженияM.
genitalium из разных локусов. Одниисследователи показывают, что наибольшей информативностью для выявления30возбудителя является соскоб со слизистой оболочки влагалища [74, 173]. Приобследованиибеременныхисравненииинформативностиполученногобиологического материала из шейки матки и влагалища методом ПЦР, былотакже определено, что обнаружение M. genitalium имеет более высокуювыявлемость в соскобе из влагалища [28]. Другие исследователи, в частности, R.A. Lillis с соавт. указывают, что более четверти женщин были бы упущены наналичие патогена при тестировании только из одного локуса (влагалища илицервикального канала).
Чувствительность метода увеличивалась до 95% приисследовании материала, полученного сразу из двух локусов. Частота выявлениямикроорганизма также повышалась при одновременном анализе первой порцииутренней мочи и соскобов из цервикального канала [151].Согласно Федеральным клиническим рекомендациям по ведению больныхурогенитальными заболеваниями, вызванными Mycoplasma genitalium (2015),осуществление молекулярно-биологических методов с целью обнаруженияпатогена необходимо проводить лицам с клиническо-лабораторными признакамивоспаленияоргановмочеполовойирепродуктивнойсистем,тогдакакбессимптомным пациентам данное обследование нецелесообразно [76, 81, 195].Однако, отечественными и зарубежными учеными приводятся данные онеобходимости скрининга на M.
genitalium как симптоматических, так ибессимптомных пациентов, что, во-первых, по статистическим расчетам на 31,1%уменьшит частоту ВЗОМТ в течение последующих 20 лет, во-вторых, снизитуровень инфицированности населения в целом [104]. Кроме того, в руководстверекомендуется проводить обследование лиц, у половых партнеров которыхдиагностирована данная инфекция. В исследовании С. В. Рищука обращает насебя внимание факт наличия большого количества половых пар с доказанной M.genitalium-инфекцией только у одного партнера при тестировании методом ПЦР.Последующая оптимизация диагностики с использованием ПЦР-РВ существенноповышало выявляемость микроорганизма у обоих партнеров [66, 81].В настоящее время широко используемый метод ПЦР-РВ являетсявысокоспецифичным и чувствительным для диагностики не только возбудителей31ИППП, но и УПМ.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
