Диссертация (1140128), страница 13
Текст из файла (страница 13)
При сопоставлениицитокинового профиля больных локальной формой ГПА с данными больныхгенерализованной формой ГПА статистически значимых изменений вэкспрессии генов исследуемых цитокинов обнаружено также не было.89В нашем исследовании показано что при различных формах ГПАцитокиновый профиль в МПК одинаковый, что может указывать наоднонаправленной характер участия данных типов клеток (мононуклеаровпериферической крови) в процессе развития ГПА независимо от формы.На выработку интерферонов и интерлейкинов могут оказывать влияниедругие цитокины, которые вырабатываются локально, в очаге воспаления, атакжецитокины,вырабатываемыедругимиклетками-продуцентами.[28,31,33] Цитокиновый профиль, определяемый в системномкровотоке при различных формах ГПА, может отличаться от выработкицитокинов в тканях различных органов и систем больных ГПА. Такимобразом, указанных биологически активных веществ, и также выработкицитокинов другими клетками-продуцентами может быть оправдано длясовершенствования знаний патогенеза ГПА.Цитокиновый профиль у больных с обострением и ремиссией ГПАПри анализе цитокинового профиля больных с обострением иремиссией ГПА было выявлено, что при сравнении этих групп с группойконтроля отмечается активация экспрессии генов ИФН-α, ИЛ-8 и подавлениеэкспрессии генов ИЛ-12, ФНО-α.
Кроме того, у больных с обострением ГПАотмечается статистически значимая активация экспрессии гена ИЛ-18 посравнению с группой контроля.ИЛ-18 представляет собой провоспалительный цитокин, которыйотносится к семейству интерлейкина 1. ИЛ-18 обладает плейотропнымиэффектами в отношении многих типов клеток и влияет на секрециюразличных по своей функциональной направленности медиаторов. Естьданные как о про-, так и противовоспалительной активности ИЛ-18. ИЛ-18сдвигает баланс цитокинов в пользу клеточного иммунитета , стимулируяпродукцию ИФН-γ, ФНО-α и ИЛ-2.[34]. С другой стороны, существуютданные о том, что ИЛ-18 индуцирует созревание наивных CD4+ лимфоцитов90в ИЛ-4 продуцирующие клетки in vitro [85].Также ИЛ-18 вырабатываетсямакрофагами.
Повышение его содержания может говорить об активациимакрофагального звена иммунитета.[34] В 2009 году Novick и соавторыотметили, что повышение уровня ИЛ-18 и ИЛ-18 связывающего белка убольных с обострением ГПА может давать основания предположить, чтоданные маркеры играют определенную роль в патогенезе и течение ГПА.[43]В нашем исследовании была установлена достоверная прямаякорреляционная зависимость между наличием АНЦА и обнаружением мРНКИЛ-18 (0,48).
Известно, что АНЦА играют одну из ключевых ролей впатогенезе ГПА [24] Выявление достоверной прямой корреляционной связимежду наличием с АНЦА и обнаружением мРНК ИЛ-18 являетсядополнительным указанием на участие данного цитокина в патогенезе ГПА.Для оценки клинической значимости определение мРНК ИЛ-18 в МПКкак маркера обострения ГПА был проведен ROC-анализ. Площадь подкривой составила 0,67, что говорит об удовлетворительном качествеклинической значимости теста с чувствительностью данного метода - 75% ,специфичностью - 41%.Таким образом, определение мРНК ИЛ-18 в МПК может бытьиспользовано как дополнительный маркер активности ГПА и указывает научастие данного цитокина в патогенезе заболевания.Продукция цитокинов у больных ГПАПроанализировав, транскрипция каких цитокинов у больных ГПАдостоверноизменяетсяпосравнениюсоздоровыми,проводиласьпоследующая оценка конечного этапа синтеза белка - продукции цитокинов сиспользованием метода иммуноферментного анализа.
Учитывая достоверноеизменение транскрипции мРНК ИФН-α, ИЛ-8, ФНО-α и ИЛ-18 (приобострении ГПА) в МПК у обследованных больных по сравнению со91здоровыми добровольцами, оценкасывороткекровиможетсодержания указанных цитокинов впредположитьучастиеактивированныхпериферических мононуклеаров и исследуемых цитокинов в патогенезе ГПА.Дополнительно проводилась оценка продукции ИЛ-1β - главногомедиатора развития местной воспалительной реакции и острофазовогоответа.[28] Изучение изменения концентрации ИЛ-1β у больных ГПАпредставляет особый интерес в связи с развитием некротизирующеговаскулита - воспалительной реакции в стенке сосудов.ИФН-α проявляет неспецифическую противовирусную активность.[33]ИФН-α может активировать естественные киллеры (EK) и цитотоксическиеТ-лимфоциты (ЦТЛ).[86] При выраженной стимуляции продукции ИФН-αотмечается снижение продукции ИЛ-12 и ИФН-γ NK-клетками.[31]Исследованиеэкспрессиигеновцитокиноввпериферическихмононуклеарах (в состав которых входят моноциты и лимфоциты, в томчисле NK- клетки) показало, что у больных ГПА угнетается синтез мРНКИЛ-12 и ИФН-γ.
Таким образом, исходя из полученных нами результатов, убольных ГПА можно было бы предположить непосредственное участиепериферических мононуклеаров в патогенезе ГПА в виде активациицитотоксическихлимфоцитови(ЦТЛ)развитияNK-клеточнойцитотоксичности у данных больных. Однако, невысокий процент больныхГПА (17,5%) с повышенным содержанием ИФН-α в сыворотке крови,не даетвозможность однозначно утверждать о развитии данного типа иммунногоответа.Оценка синтеза мРНК ФНО-α в периферических мононуклеарахбольных ГПАэкспрессиигенадобровольцами.в нашем исследовании выявила достоверное снижениеданногоцитокинаПоследующаяпооценка92сравнениюпродукциисоздоровымиФНО-αтакжепродемонстрировала, что данный цитокин повышался только у 6 (15%)обследованных больных.Припроведениидвойного-слепогоплацебо-контролируемогоисследования с использованием конкурентного ингибитора связыванияФНО-α (этанерцепта) у больных ГПА было показано,что использованиеданного препарата не повлияло на частоту достижения длительной ремиссииу больных ГПА [40,71]В опытах показано, что ФНО-α индуцирует экспрессию протеиназы 3на поверхности полиморфноядерных лейкоцитов у больных ГПА.[47]Известно, что активированные моноциты представляют собой основнойисточник ФНО-α.
[87] Влияние ФНО-альфа на индукцию экспрессиипротеиназы 3 на поверхности нейтрофилов[47], достоверное снижениеэкспрессиигенаданногоцитокинапосравнениюсоздоровымидобровольцами, незначительная продукция ФНО-альфа в сыворотке кровибольных ГПА и отсутствие эффекта от проводимой анти-ФНО-альфа терапиис применением этанерцепта [15] указывает на неоднозначную роль данногоцитокина в патогенезе ГПА, требующую дальнейшего изучения.ИЛ-1β является главным медиатором развития местной воспалительнойреакции и острофазового ответа на уровне организма [28,31,33].
в связи сэтим обнаружение повышенного содержания ИЛ-1β в сыворотки крови у20(50%) больных ГПА представляет особый интерес.За счет конститутивной экспрессии своих рецепторов ИЛ-1β оченьбыстроактивируетпрактическивсетипыклеток,участвующихвформировании локальной воспалительной реакции, включая фибробласты,эндотелий, резидентные макрофаги и все типы лейкоцитов крови. ИЛ-1βучаствует в регуляции функций эндотелия и системы свертывания крови,индуцируя прокоагулянтную активность. [33] ИЛ-1β образуется моноцитами,макрофагами, дендритными клетками, астроцитами, фибробластами, NK-93клетками,кератиноцитамииэндотелиальнымиклетками.Усиливаетфункцию нейтрофилов и NK.[28] В работе Borgmann и соавторов выявлено,что пациенты страдающие васкулитом, имеющие АТ к протеиназе 3 ипоражение почек, обладают повышенным риском развития терминальнойстадии почечной недостаточности при обнаружении высокой секрециипровоспалительного ИЛ-1β и низкой секреции антагониста рецептора ИЛ1β.[88] Учитывая, что у больных ГПА ИЛ-1β может влиять на хемотаксиснейтрофилов в БАЛ [41], на прогрессирование почечной недостаточности[88]и его повышенная концентрация в сыворотке определяется у 50% больныхГПА по данным нашего исследования, можно предположить, что данныйцитокин является непосредственным участником патогенеза ГПА.Продукция ИЛ-8 у больных с обострением ГПА.ИЛ-8– хемотаксический воспалительный цитокин, который являетсятакже активатором нейтрофилов.
ИЛ-8 вызывает хемотаксис нейтрофилов,базофилов и некоторых субпопуляций Т-лимфоцитов в очаг воспаления. Онспособен повышать адгезивность нейтрофилов и вызвать повышениеэкспресии молекулы адгезии-1. ИЛ-8 стимулирует транслокацию протеиназы3наповерхностьнейтрофилов,темсамымобеспечиваябольшуювероятность связывания протеиназы 3 с АНЦА. [63,64] Известно, что АНЦАстимулируют выработку ИЛ-8 как моноцитами, так и нейтрофилами.[57,62]Выявленное достоверное повышение экспрессии гена ИЛ-8 посравнению со здоровыми добровольцами подтверждает, что у больных ГПАстимулированавыработкамононуклеарах.У14данного(35%)цитокинаобследованныхвпериферическихбольныхопределяетсяповышенная концентрация ИЛ-8 в сыворотки крови.
В предыдущихисследованияхтакжеотмечаетсяповышениеуровняхемокинов,вызывающих нейтрофилию, в сыворотке больных ГПА и повышение CXCхемокинового лиганда (CXCL8) в клубочках почек больных с обострениемГПА.[27,57] Описано что, ИЛ-8 коррелирует с активностью заболевания[40],94кроме того данный цитокин обнаруживается в повышенных концентрациях убольных как с обострением, так и с ремиссией ГПА.[41] Проведенное намиисследование выявило, чтов сыворотке больных с обострением ГПАдостоверно чаще определялось повышение содержания ИЛ-8 по сравнению сбольными в ремиссии заболевания.Учитывая полученные данные, а такженаличие стимуляции выработки данного цитокина в МПК больных ГПА,можно предположить, что ИЛ-8 является важным участником патогенезаГПА, а также играет роль в развитии обострения данного заболевания.Использование определение кинцентрации ИЛ-8 в сыворотке крови вкачетстве дополнительного маркера обострения ГПА обладает невысокойчувствительностью и специфичностью.Продукция ИЛ-18 у больных генерализованной формой ГПА.ИЛ-18участвуетвпроцессеинфильтрациитканейиммунокомпетентными клетками, стимулируя экспрессию молекул адгезии.[89,90] ИЛ-18 - провоспалительный цитокин, обладающий плейотропнымиэффектами Основной эффект ИЛ-18 - это индукция продукции ИФН-γ Т иNК клетками, что приводит к активации Th1 типа иммунного ответа.
Помимобезусловного вляние на развитие Th1, ИЛ-18 также принимает участиве вразвитие Th2 типа иммунного ответа, является стимулятором молекуладгезии.[34]При анализе продукции ИЛ-18, в сыворотке крови больных ГПАопределяется повышенная концентрация данного цитокина у 18(45%)обследованных больных. У пациентов, имеющих генерализованную формуГПА, достоверно выше содержание ИЛ-18 в сыворотке крови по сравнению спациентами с локальной формой ГПА. Для определения возможностииспользовать ИЛ-18в качестве биомаркера наличия генерализованнойформы ГПА, был проведен ROC анализ и определена чувствительность испецифичностьданногобиомаркерадляразличныхконцентраций.Оптимальные значения чувствительности и специфичности метода выявлены95при концентрации ИЛ-18 более 258,5 пг/мл и составили– 60,9 и 82,4%,соответственно. Площадь под ROC-кривой составляет 0,627 - показатель,характеризующий хорошее качество модели диагностического теста, однакообладающеговысокойспецифичностью.Полученныеданныедемонстрируют, что исследование содержания ИЛ-18 в сыворотке кровибольных ГПА можно использовать для дополнительной диагностикигенерализовации ГПА.Исследование факторов риска обострения ГПА в течение одного годаС использованием метода отношения шансов, определено, чтодостоверным фактором риска повышения индекса BVAS на 2 и более баллову больных ГПА в течение одного года является обнаружение ИЛ-1β всыворотке крови в пределах от 5,1 до 19,7 пг/мл.Известно, что ИЛ-1β относится к ключевым провоспалительнымцитокинам, является главным медиатором развития местной воспалительнойреакции и острофазового ответа на уровне организма.[] ИЛ-1 инициирует ирегулирует воспалительные, иммунные процессы, активирует нейтрофилы,естественные киллеры,Т- и В-лимфоциты, стимулирует синтез белковострой фазы, цитокинов, молекул адгезии, простагландинов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
