Диссертация (1140128), страница 12
Текст из файла (страница 12)
было выполнено дополнительноеиммунологическое обследование:Исследование цитокинового профиля методом ОТ-ПЦР у больной С от05.2014 г.Наличие мРНК (+): ИЛ-1β, ИЛ-2, ФНО-αОтсутствие мРНК (-):ИФН-α,ИФН-γ,ИЛ-4,ИЛ-6,ИЛ-8,ИЛ-10,ИЛ12,ИЛ-18.Исследование продукции цитокинов методом ИФА у больной С от05.2014 г. (таб. 23)80Таблица 23Исследование продукции цитокинов методом ИФА у больной С.ЦитокинЗначение, пг/млНорма, пг/млИФНα0≤5ИЛ-1β5.11-11ИЛ-85.22-10ИЛ-18344.290-260ФНО-α01-6Исследованиецитокиновогопрофиляданнойбольнойвыявилоповышение экспрессии мРНК ИЛ-1β, ИЛ-2 и ФНО-α в МПК. Также отмеченоповышение концентрации сывороточного ИЛ-18 (таблица 23).Проведенное подробное клиническое, лабораторное обследованиебольной С., отсутствие экспрессии мРНК ИЛ-18 в МПК указывает наотсутствие активности ГПА у данной больной.
Пациентка С. страдаетгенерализованным ГПА с поражением легких и почек и у неё обнаруженоповышение уровня сыворотчного ИЛ-18 до 344,2 пг/мл (дополнительныйпоказатель наличия генерализованной формы ГПА). Высокий уровень ИЛ18 в сыворотки крови, наиболее вероятно, связан с высокой выработкойданного цитокина макрофагами (основными клетками продуцентами ИЛ-18).ИЛ-18 является провоспалительным цитокином и обладает широкимспектром биологическойактивности (индуктор образования ИФН-γ иразвития Th1 типа иммунного ответа, активация ЕК, стимуляция продкциимногих цитокинов - ФНО-α, ИЛ-1β (определяется у Больной С.
) и др). Приотсутствии экспрессии ИЛ-12 (что наблюдает у пациентки С.), ИЛ-18 вместес ИЛ-2 индуцирует выработку ИЛ-4, что способствует развитию Th2-типаиммунного ответа. Таким обраом высокий уровень ИЛ-18 в сыворотке кровибольной С. является показателем возможности реализации основных81эффектов данно цитокина, что наряду с оценкой клинико-лабораторныхисследований указывает на необходимость сохраненияподдерживающейтерапии в прежнем объеме. Поражение легких у больной С.
проявляетсяобнаружение участков по типу матового стекла и сопровождается наличиемвысокого сывороточного ИЛ-18 (имеется достоверная корреляция междууровнем указанного цитокина и наличием поражения легких у больныхГПА). Поражение почек достоверно коррелирует с понижением экспрессиимРНК ИФН-α. Клиническим примером данного заключения являютсяпоказатели, определяемые у больной С.: мРНК ИФН-α не определяется,имеется поражение почек в рамках ГПА (ХБП 2 ст.). Экспрессии мРНКФНО-α достоверно коррелирует с наличием поражения легких и почек, как уобследованной больной, что указывает на участие данного цитокина впоражении легких и почек пациентки.Помимоопределяетсяналичия вовлеченияпоражениеверхнихлегких и почек,дыхательныху больнойпутейС.(язвенно-некротический ринит), которое ассоциировано с понижением экспрессиимРНК ИЛ-4 и мРНК ИЛ-12, а также с понижением уровня ИФН- α всыворотки крови.
Поражение органа слуха (двусторонний отит, смешаннаятугоухость) у больной С сопровождается отсутствием экспрессии мРНК ИЛ12.Данные корреляционные связи были достоверно подтверждены вкорреляционном исследовании.823.5 Факторы риска развития обострения ГПА в течение одногогода.У 42 из 60 обследованных нами больных ГПА (14 мужчин и 28женщин, в возрасте от 18 до 77 лет) проводилось наблюдение в динамике.Минимальный срок наблюдения составил 10 месяцев, максимальный срокнаблюдения - 18 месяцев. У всех обследованных больных выполняласьоценка активности васкулита с использованием шкалы BVAS. Среднеезначение индекса BVAS на момент первичного обследования составляло 2,7баллов. Нарастание индекса на 2 балла по сравнению с данными предыдущейгоспитализации расценивалось как нарастание активности ГПА.У 30 из 42 пациентов отсутствовали данные за наличие отрицательнойдинамики по сравнению с предыдущей госпитализацией.
У 12 человекопределялось повышение индекса BVAS на 2 и более баллов по сравнению спредыдущим обследованием.При динамическом наблюдении, у 3 из 12 больных c обострением ГПАустановлено ухудшение состояния ЛОР органов, у 1 больного - ухудшениесостояния органа зрения, у 7 больных отмечено появление новых очаговоинфильтративных изменений в легких, у 1 больного была зафиксированаотрицательная динамика как со стороны ЛОР органов, так и со сторонылегких (выявлены новые очаги в легких). Клиническая характеристикабольных, прошедших динамическое наблюдение представлено в таб.
24.83Таблица 24Частота развития поражений органов у больных ГПА припервичном и динамическом обследовании.Первоначальноеобследованние, N (%)Динамическоенаблюдение,N(%)Генерализованный ГПА25 (59.5)27 (64.3)Локальный ГПА17 (40.5)15 (34,9)Поражение носа и ППН39 (92.9)39 (92.9)Поражение органа слуха22 (52.4)22 (52.4)Поражение органа зрения24 (57.1)24 (57.1)Поражение легких22 (52.4)24 (57.1)Поражение почек19 (45.2)19 (45.2)В течение года, у 2-х пациентов, изначально имеющих локальнуюформу ГПА образовались очагово-инфильтративные изменения в легких,соответствующие генерализованной форме ГПА.
В течение всего периоданаблюдения все пациенты получали иммуносупрессивную терапию, в томчислеглюкокортикостероидами–40(95,2%)человек,изнихглюкокортикостероидами более 20 мг/сут – 17 (40,5%) , циклофосфамидом –18 (42,9%) , метотрексатом – 4 (9,5%), азатиоприном – 9 (21,4%),микофенолатом мофетилом - 1 (2,4%), ГИБТ (ритуксимаб) - 1 (2,4%).Определение факторов риска при исследовании транскрипции геновцитокиновВсем 42 больным, включенным в динамический контроль припервичномобследованиипроводилосьисследованиетранскрипциицитокинов методом ОТ-ПЦР. При обследовании больных через год, у 12человек было выявлено нарастание индекса BVAS на 2 балла и более, у 30указанного повышение индекса BVAS не определялось.84Выполнен статистический анализ с использованием метода отношенияшансов.
(таб. 25). Обнаружение экспрессии мРНК цитокинов у больных ГПАрасценивалось как наличие фактора риска, отсутствие экспрессии мРНКцитокина - как отсутствие фактора риска.Таблица 25Определение факторов риска повышение индекса BVAS на 2 баллаи более в течение года у больных ГПА при оценке транскрипциицитокинов.ЦитокиныОтношение шансов (95% ДИ)РТранскрипция цитокинов (N=42)ИФН-α1.17(0.28-4.89)0.83ИФН-γ1.00(0.17-6.03)1.00ИЛ-1β0.50(0.12-2.02)0.33ИЛ-21.8(0.26-12.41)0.55ИЛ-40.79(0.03-20.66)0.89ИЛ-60.47(0.09-2.57)0.38ИЛ-80.38(0.09-1.69)0.20ИЛ-100.80(0.14-4.66)0.80ИЛ-120.79(0.03-20.66)0.89ИЛ-180.44(0.11-1.77)0.25ФНО-α0.21(0.02-1.90)0.17Установлено,чтообнаружениетранскрипциигеновизученыхцитокинов не является фактором риска повышение индекса BVAS на 2 иболее баллов в течение года у больных ГПА.85Определение факторов риска при исследовании продукции цитокиновПроводилось изучение факторов риска нарастания индекса BVAS на 2и более баллов у больных ГПА при исследовании содержания цитокинов всыворотке крови с использование метода ИФА.У 28 из 42 больных ГПА, при первичном обследовании, проведениммуноферментный анализ (ИФА) с целью оценки содержания цитокинов всыворотки крови.
При динамическом обследовании, из 28 больных, у 9выявлено нарастание индекса BVAS на 2 балла и более, у 19 - указанногоповышение индекса BVAS не определялось.Проводилось определение среднего содержания цитокинов в сывороткекрови, а также значения межквартильного размаха у больных с наличием иотсутствием отрицательной динамики ГПА. (таб. 26).Таблица 26Межквартильный размах, среднее содержание цитокинов всыворотке крови больных с наличием и отсутствием отрицательнойдинамики ГПА.ЦитокинСреднеесодержаниеимежквартильный размах цитокинов, убольныхсотсутствиемотрицательнойдинамикойГПА,пг/мл (n=19)Среднеесодержаниеимежквартильныйразмахцитокинов,убольныхсотрицательной динамикой ГПА,пг/мл (n=9)ИФН-α12.0 [5.0-22.4]5.0 [5.0-5.0]ИЛ-1β72.2 [5.0-117.3]36.5 [5.1-19.7]ИЛ-87.7 [4.6-9.4]8.1 [5.4-12.0]ИЛ-18305.3 [150.3-352.7]416.1 [163.3-708.7]ФНО-α7.7 [1.0-5.1]1.0 [1.0-1.0]У больных с отрицательной динамикой ГПА в течение года отмечаласьтенденция к уменьшению среднего содержания ИФН-α,ИЛ-1β, ИЛ-8 иувеличение среднего содержания ИЛ-18 и ФНО-α.86Обнаружение значения цитокина в пределах межквартильного размаха,определяемого у больных с отрицательной динамикой ГПА, расценивалоськак наличие фактора риска, обнаружение цитокиноввне пределовмежквартильного размаха - как отсутствие фактора риска.
(таб. 27)Таблица 27Количество больных N (%) с наличием или отсутсвием факторариска.Цитокин Количествобольныхс Количество больных с отсутствиемотрицательной дианмикой ГПА в отрицательной дианмики ГПА втечение года (n=19)течение года (n=9)Наличиефактора риска,n (%)Отсутствиефактора риска, n(%)ОтсутствиеНаличиефактора риска, n фактора риска, n(%)(%)ИФН-α9 (100%)013 (68.4%)6 (31.6%)ИЛ-1β5 (55.5%)4 (44.4%)3 (15.8%)16 (84.2%)ИЛ-86 (66.7%)3 (33.3%)9 (47.4%)10 (52.6%)ИЛ-187 (77.7%)2 (22.2%)10 (52.6%)9 (47.4%)ФНО-α9 (100%)014 (73.7%)5 (26.3%)Выполнен статистический анализ с использованием метода отношенияшансов. (таб. 28)87Таблица 28Определение факторов риска повышение индекса BVAS на 2 баллаи более в течение года у больных ГПА при оценке содержанияцитокинов в сыворотке крови).ЦитокиныОтношение шансов (95% ДИ)РПродукция цитокинов (N=28)ИФН-α9.14(0.46-182.62)0,15ИЛ-1β6.67(1.10-40.44)*0,04*ИЛ-82.22(0.43-11.60)0.34ИЛ-183.15(0.52-19.27)0.21ФНО-α7.21(0.36-145.99)0,20* P ˂ 0,05 (метод отношения шансов)Достоверным фактором риска повышения индекса BVAS на 2 и болеебаллов у больных ГПА в течение одного года является обнаружение ИЛ-1β всыворотке крови в пределах от 5,1 до 19,7 пг/мл.88Глава 4.
Заключение:Экспрессия генов цитокинов, как и других белков, осуществляется внесколько этапов: транскрипция, процессинг мРНК, трансляция, процессингбелка и секреция белка. Каждый этап экспрессии генов цитокинов можетрегулироваться, поэтому важно знать не только уровень продукциимедиатора, но и характеристики других этапов экспрессии гена. Впроведенном исследовании проводилось изучение цитокинов на несколькихэтапах: на этапе транскрипции (методом ОТ-ПЦР) и на этапе продукциицитокина (метод ИФА). Качественное определение мРНК с использованиемОТ-ПЦР представляет собой скрининговый метод, который позволяетизучить изменение транскрипции достаточно широкого спектра цитокинов.[84] Исследование мРНК цитокинов в мононуклеарах периферической кровипозволяет определить, эксрессия каких цитокинов активированна именно вданных клетках (мононуклеарах периферической крови) у больных ГПА.Проанализировав, транскрипция каких цитокинов у больных ГПАдостоверно изменяется по сравнению со здоровыми добровольцами,проводилась последующая оценка содержания цитокинов в сыворотки крови,что позволило оценить конечный этап синтеза цитокинов у обследованныхбольных.Цитокиновый профиль у больных с локальным и генерализованнымГПАПроведенноеисследованиестатистически достоверной (p˂0,05)продемонстрировалоналичиеактивации экспрессии генов ИФН-α,ИЛ-8 и подавления экспрессии генов ИЛ-12, ФНО-α при сравнении больныхлокальной формой ГПА с группой контроля и при сравнении больныхгенерализованной формой ГПА с группой контроля.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
