Отзыв официального оппонента 2 (1102412)
Текст из файла
Отзыв официального оппонента на диссертационную работу Генералова Евгения Александровича «Биофизические характеристики и взаимодействие с рецепторами Вес11п-1 и Т1.К- 6 природных полисахаридов из Н«Напйиз (иЬегозих Л. », представленную на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук по специальностям 03.01.02 — «Биофизика», 03.01.08 — «Биоинженерия» Диссертация Е.А. Генералова посвящена одной из важнейших проблем современной биомедицинской науки — поиску новых подходов в лечении при широко распространенных тяжелых заболеваниях, таких как онкологические и вирусные. В связи с этим актуальность диссертационной работы несомненна.
Объектом исследования работы были выбраны полисахариды, выделяемые из растительного сырья. Полисахариды являются важным и неотъемлемым компонентом всего живого. Они участвуют в большом количестве биологических событий, включая адгезию, узнавание патогена и выполняют структурную, защитную, энергетическую и другие функции. Таким образом, их физико- химические свойства и биологические функции весьма разнообразны, несмотря на относительную простоту состава. В качестве предмета исследования полисахариды являются исключительно сложными и непрятными молекулами.
Их высокая гетерогенность, и сложная трехмерная структура крайне затрудняют корректное выделение и характеризацию. В качестве источника полисахаридов автором выбран топинамбур Не!~апйт гиЬегохиз Е., известный своим положительным регуляторным воздействием на различные функции организма человека. Полисахариды топинамбура, их структурно-функциональные характеристики, а также рецепторы, взаимодействующие с полисахаридами, были недостаточно изучены. Автору удалось выделить ранее неохарактеризванную фракцию полисахаридов топинамбура и показать, что высокомолекулярный полисахарид нз Кейапйил гиЬ«гозих А, является природным нетоксичным биополимером с иммуномодулирующими, противоопухолевыми, радиопротекторными свойствами, благодаря чему может быть использован в качестве фармакологического препарата, что еще раз подтверждает актуальность проведенного исследования, Научная новизна диссертации Е.А.
Генералова связана с разработкой новой методики выделения высокоочищенной фракции полисахарида из малоизученного источника, получением ранее не описанного полисахарида, названного НТЬР, выявлением его физико-химических свойств и биологической активности, с построением и разработкой математической модели механизмов действия НТЬР на клетки. В ходе работы был использован исключительно широкий круг методов, в том числе требующих высокой квалификации. Решена нетривиальная задача по выделению и очистке полисахарида из Нейапйиг 1иБегозия Л. Проведено тестирование на наличие биологической активности в модели адъювантной активности. Установлены основные физико-химические свойства НТЬР, включая спектральные характеристики (ЯМР, ИК, .УФ), моносахаридный состав, молекулярную массу и тип гликозидной связи.
Высказаны предположения о возможной структуре гликана. У НТЬР обнаружено наличие радиопротекторных (в модели абсолютной выживаемости и колониестимуляции), иммуномодулирующих (на примере влияние на цитокины 11,-1, 1Ь-б, ТИР, 1РХ и активность натуральных киллеров), противовирусных (были использованы ВПГ-1 и вирус Клеймана), противоопухолевых (ш чего — торможения роста опухолевых клеточных культур Нер-2 и Ь-929, 1п ймо — торможение процесса метастазирования и роста опухолевого узла) свойств. Было показано отсутствие цитотоксических и токсических свойств у НТЬР (в МТТ-редуктазной модели и по влиянию на количество клеток КА% 264.7). Сформулирована гипотеза о рецепторном взаимодействии полисахарида с клетками с участием рецепторов Рес11п-1, ТИ-6 и С8.3.
С помощью выключения генов целевых рецепторов методом РНК- интерференции и антительной блокировки сайтов связывания рецепторов доказано, что для проявления биологической активности НТЬР необходимо его взаимодействие с Ресг1п-1 и ТЫ-6, но не с СКЗ. Практическая ценность диссертационной работы обусловлена тем, что предложен метод выделения полисахарида из растительного сырья, который обладает целым набором полезных фармакологических свойств и поэтому может быть использован для изготовления фармакологических препаратов. Теоретическая модель влияния полисахарида на сигнальные каскады клеток, приводящего к требуемому изменению их функционирования, может быть использована для поиска новых методов коррекции состояния системы.
Диссертационная работа представлена на 192 страницах„состоит из введения, трех глав с изложением результатов (введение и обзор литературы, материалы и методы, результаты), включая 26 рисунков и 28 таблиц, обсуждения и выводов, списка сокращений, а также списка цитируемой литературы из 308 наименований. Введение содержит обоснование актуальности, научной и практической значимости, научной новизны, формулировки основных положений, выносимых на защиту, список публикаций и конференций с участием автора. Первая глава представляет собой развернутый обзор и подробный анализ литературы по теме исследования и состоит из нескольких частей.
Во второй главе содержится краткое описание использованных экспериментальных методов. Третья глава посвящена результатам исследования. В этой главе подробно описывается процесс экстракции полисахарида и результаты определения его физико-химических характеристик. Например, показано присутствие 0,5',4 белка в образце химически (метод Брэдфорда) и спецтрофотометрически (ИК- и ЯМР- спектрометрия). Методами кислотного гидролиза и ВЭЖХ определен моносахаридный состав полисахарида: О1с — 30',4, Оа1А — 23',4, О1сА — 15'~о, Оа1— 13',4, Кпа — 6'4, Ага — 4;4, Мап — 3'.4, Ху! — 2;4, Обработка ферментами— целлюлаз ой и литиказой, приведя щая к потере адъювантной активности позволила установить наличие Д-(1-3)- и Д-(1-4)-гликозидных связей.
Спектральные данные подтвердили наличие этого типа гликозидных связей. Проведены различные тесты по определению биологической активности НТ1.Р в разных моделях. Автор проверил наличие взаимодействия полисахарида с клеточными рецепторами 13ес11п-1, Т1.К-6 и СКЗ и показал, что СКЗ не принимает участие в реализации биологической активности НТЬР, а Ресг1п-1 и ТЬК-6 необходимы. Для объяснения полученных данных автор предложил математическую модель, описывающиую распространение сигнала в клетке. В главе «Обсуждение» приводится обобщение и анализ полученных данных.
Заключение представляет собой перечисление результатов и выводов диссертационного исследования. Вместе с тем, по диссертации есть несколько замечаний. В главе «Материалы и методы» автору следовало бы подробнее описать экспериментальные методики и добавить описание некоторых стадий. Например, недостаточно описана подготовка к снятию ИК-спектра полисахарида. Было бы желательно дополнить данные результатами исследований кругового дихроизма и метилирования.
В диссертации содержится некоторое количество опечаток. Количество табличных данных представляется несколько избыточным, и не очень удачно, что описание статистического анализа приведено именно в таблицах. Термин "биофизическая модель" не очень понятен, и математическая модель нуждается в более сильной связи с экспериментальной частью работы. Указанные недостатки не являются принципиальными и не снижают общей высокой оценки диссертационного исследования Генералова Е.А., представляющего собой целостную, актуальную и завершенную научно- квалификационную работу. Полученные результаты достоверны.
Материалы диссертации достаточно отражены в научных публикациях автора. Выводы, сделанные автором обоснованы, соответствуют экспериментальным данным, обобщают полученные результаты, информативны и позволяют сделать заключение о достижении цели и выполнении задач, поставленных в начале исследования. Автореферат отражает суть диссертационной работы и соответствует содержанию публикаций автора по ее теме. По совокупности обьектов, задач и методов, диссертационная работа Генералова Е.А. соответствует специальностям 03.01.02 — «Биофизика» и 03.01.08 «Биоинженерия».
Диссертационная работа Генералова Е.А. «Биофизические характеристики и взаимодействие с рецепторами Пес6п-1 и ТЬй.-б природных полисахаридов из Не11апйиь ~ибегохия А.» является полноценным, самостоятельным, целостным и завершенным исследованием. Считаю, что диссертационная работа Генералова Е.А. полностью соответствует требованиям «Положения о присуждении ученых степеней в Московском государственном университете имени М.В.Ломоносова», утвержденного Ректором Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова от 27.!О.!6, предъявляемым к диссертациям на соискание ученой степени кандидата наук, а ее автор заслуживает присуждения искомой степени кандидата физико-математических наук по специальностям 03.0!.02— «Биофизика» и 03.0!.08 — «Биоинженерия». 9 октября 2017 года Официальный оппонент: Заместитель директора по науке, заведующий лабораторией молекулярных механизмов гемостаза Центра теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН, доктор физико-математических наук Пантелеев Михаил Александрович/ Адрес 119991, г.
Москва, ул. Косыгина 4, ЦТП ФХФ РАН Тел: 8(495) 938-25-33 Адрес электронной почты: тарапге!еечРуапс!ех.гп Директор Центра теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН, член-корреспондент РАН, доктор биологических наук тауллаханов Фазоил Иноятович/ .
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
